Pregătirea frotiurilor pentru bacterioscopie este o procedură foarte importantă, determinând în mare măsură succesul studiului. Trebuie avut în vedere că aceasta este una dintre cele mai periculoase proceduri. Tuberculoza se raspandeste prin picaturi din aer prin mici picături în jur de 5 um ca dimensiune, care conține agentul patogen care, atunci când este inhalat în plămâni poate ajunge la alveolele și să soluționeze ea, formând un focar de infecție. În cadrul lucrărilor de laborator, eforturile trebuie direcționate spre evitarea sau minimizarea riscului de infecție în acele manipulări în care există cel mai mare risc de dispersare a aerosolilor potențial infecțioși. Principalele surse de formare a acestor aerosoli în laboratoare sunt manipulările care sunt asociate cu prepararea frotiurilor pentru bacterioscopie:
- deschiderea containerelor cu materiale; această manipulare este deosebit de periculoasă dacă se găsesc particule de spută uscată între peretele exterior al gâtului recipientului și suprafața interioară a capacului sau dacă recipientul a fost agitat chiar înainte de deschidere;
- pregătirea de frotiuri prin aplicarea materialului pe o glisantă și împrăștierea acestuia pe suprafața sticlei;
- Arderea buclelor bacteriologice utilizate pentru a transfera materialul în sticlă. Atunci când efectuați aceste manipulări, trebuie să aveți grijă deosebită.
Smearele pentru bacterioscopie sunt preparate din spută netratată nativă. Pentru a face acest lucru, sputa este turnată într-un vas Petri, sub fundul căruia este așezată hârtia neagră. Lângă cești, sunt plasate două glisiere curate (anterior neutilizate) și pre-marcate. Folosind două ace de disecție, bucla bacteriologic sau bastoane de lemn foarte ascutit (pentru fiecare nouă probă de spută) 5-6 este selectat bulgări mai dense de spută purulentă, a fost transferat pe sticlă, acoperite cu un al doilea pahar și apăsați ușor în jos, împingând sticla în direcții diferite, se triturează până se obține un strat subțire uniform. Frotiul ar trebui să ocupe 2/3 din sticlă.
În timpul preparării frotiurilor, trebuie luate măsuri pentru a evita stropirea și materialele care părăsesc marginile paharului.
Amestecurile preparate sunt așezate pe hârtia de filtru timp de 15-30 minute pentru a se usca la temperatura camerei. Deoarece nu este întotdeauna posibil să se evite obținerea materialului de pe marginea sticlei, hârtia pe care se vor întinde frotiurile trebuie considerată infectată. Dried pensete de sticlă sau clește pentru a lua la capăt pe care este aplicat marcajul, și se efectuează de 3 ori printr-un arzător de gaz cu flacără sau o lampă cu alcool (timpul de staționare total frotiu flacără nu trebuie să depășească 3-5 secunde) și apoi plasate pe o hârtie simplă sau o tavă specială .
Pentru o mai mare siguranță, fecalele sputei pot fi obținute din sedimente după tratarea materialului.
Frotiuri din materialul patologic lichid (lavaj bronhoalveolar, spălări bronșic, sau de stomac, urină, punctiforma cavităților închise și alte exudate.) A fost preparat din Sedimentul obținut după tratarea acestuia cu un acid sau alcalin urmat de spălare sau de neutralizare și centrifugare. Cursele uscate și fixe sunt colorate. Atunci când alegeți o culoare să ia în considerare metoda de microscopie prin care va fi examenul microscopic directă: o lumină normală (imersie în ulei) sau luminiscentă (microscop fluorescente) microscop.
Metoda de colorare cea mai utilizată și folosită pe scară largă pentru detectarea micobacteriilor acide-rapide este metoda Tsilya-Nielsen. Cu expunerea simultană la căldură și puternic fenol agent de corodare (acid carbolic), care pregătește fucsină colorantului bazic, penetrarea colorantului anilină este facilitată într-o celulă microbiană, în special în structura peretelui celular constând din lipide și acizi mycolic. Coloranții anilinici obișnuiți nu sunt percepuți de micobacterii, iar cei din urmă nu sunt colorați. Decolorarea ulterioară a frotiului într-o soluție de acid sulfuric de 29% sau o soluție 3% de acid clorhidric conduce la decolorarea tuturor structurilor care nu sunt acide. Doar micobacteriile, care au rezistență puternică la acizi și alcool, rețin persistent colorantul și rămân colorate în roșu. Elementele decolorate ale frotiului sunt colorate cu albastru de metilen. Micobacteriilor se găsesc în produs sub formă de stick-uri luminoase de culoare roșie subțire, drepte sau ușor curbate, uneori înclinate sub formă de romane numeral V, grămezi parțial sau în grupuri mici. Adesea, în corpul de tije sau separat de acestea, sunt izolate boabele închise la culoare sau agregatele lor (forme granulare).
Atunci când microscopia frotiu trebuie considerat un polimorfism de Mycobacterium tuberculosis, în special în studiul materialului de la pacientii care au primit medicamente anti-TB. Datorită faptului că utilizarea pe scară largă a chimioterapiei modifică morfologia mycobacterii, în unele cazuri, în droguri de studiu pot fi detectate și forme de lățime inegale și blednookrashennye coli și fragmentele mycobacterii, și granule sau clustere individuale rezistente la acide ramificate.
Mai mult, în frotiuri din sedimentul urinar, lavaj gastric și alte materiale, împreună cu Mycobacterium tuberculosis poate fi detectată și saprofite acide, în special în urină - spermă Mycobacterium, care sunt ușor de confundat cu Mycobacterium tuberculosis. În caz de îndoială, se recomandă decolorarea frotiului pentru o perioadă lungă de timp (45-60 minute) în acid clorhidric sau în apă sărată. Cu această metodă de saprofite albire pierde culoarea și călcate sub formă de tije de culoare albastră (rezultând într-un frotiu după înălbire contracolorat cu albastru de metilen).
Microscopia corectă a preparatelor este o procedură responsabilă și necesită o înaltă calificare și o experiență minunată a microscopului, deoarece pe baza rezultatelor microscopiei se face un diagnostic, se specifică eficacitatea tratamentului și prognosticul bolii.
În ultimii ani, metoda microscopiei luminescente a fost folosită pe scară largă. Se bazează pe diferența de luminiscență a unui obiect microscopic în spectrul luminii vizibile în ultraviolet sau în lungime de undă scurtă. Această metodă se bazează pe capacitatea lipidelor acestor bacterii de a percepe coloranții luminescenți și apoi de a străluci atunci când sunt iradiate cu raze ultraviolete. În funcție de coloranții utilizați, Mycobacterium tuberculosis dă o strălucire roșie strălucitoare pe fond verde sau galben auriu pe fundal verde închis. Această metodă poate fi utilizată pentru a studia orice alt material decât urina, în care pot exista saprofite dificil de diferențiat cu această culoare. Acestea din urmă au o tentă verzui sau portocalie. Cele mai utilizate metode de colorare a portocaliei de acridină conform lui Adamchik și colorarea cu auramină-rodamină.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: