Culturile de celule sunt potrivite pentru izolarea majorității virusurilor animale.
În acest scop, se utilizează atât culturi celulare primare-tripsinizate, cât și culturi de celule transplantate și diploide.
Infecția culturilor celulare se efectuează după cum urmează. Din tuburi sau saltele cu un monostrat de celule crescute mediul de creștere a fost îndepărtat, monostratul celular se spală din mediul de creștere (poate fi un anticorp la virus de testare și inhibitori nespecifici) soluția Hank și de a face un material care conține virusul. După contactul (1-1,5 ore) necesar pentru adsorbția virusului pe celule, materialul care conține virusul este îndepărtat și face mediu care nu promovează proliferarea celulară de sprijin, dar asigură funcțiile vitale. Tuburile și saltelele sunt plasate într-un termostat de incubare. Adsorbit de către celule, particule virale penetreze celulele sunt reproduse în ele și să iasă în lichidul de cultură, infectarea celulelor noi, apoi următorul și așa mai departe până atunci, până când nu celulele vii.
Pentru a detecta un virus în celule, puteți utiliza următoarele metode (sau semne):
1) asupra acțiunii citopatice (CPD) sau a efectului citopatic (CPE). CPD - reprezintă orice modificare a celulelor sub influența unui virus care se înmulțește în ele. Pentru a detecta CPD, culturile de celule infectate sunt privite sub o mică creștere a microscopului luminos. Formele CPP pot fi foarte diverse, în funcție de proprietățile biologice ale virusului, tip de celule, doza infecție, condițiile de cultură, etc. Unii viruși prezintă CPE după 2-3 zile după infectare (enterovirusuri), celelalte - .. 1-2 săptămâni (adenovirusuri ). Cele mai semnificative diferențe dintre cele trei forme ale CPD: fragmentarea, rotunjirea celulelor, formarea simplastului.
Fragmentarea este distrugerea celulelor în fragmente separate (virusul stomatitelor veziculoase etc.).
Rounding - celulele au o formă sferică și sunt separate de sticlă (adeno-, picornavirusuri, etc.).
Simplastobrazovanie - formarea de celule gigant: citoplasmă celulelor vecine este drenată datorită dizolvării pereților celulari și formează un colivie mare cu mai multe nuclee; (PG-3, virusul pestei bovine și colab.)
2) cu ajutorul acestuia, unii viruși cu proprietăți hemaglutinante pot fi detectați în cultura celulară: virusurile PG-3, gripa etc., prin reacția de hemodisporție. Hemadsorbția este aderența (adsorbția) eritrocitelor din sânge pe suprafața celulelor infectate cu virusul. Această metodă este utilizată pe scară largă în diagnosticul bovinelor PG-3, în timp ce se utilizează eritrocite de cobai;
3) prin metoda de formare a "plăcilor". Această metodă este mult mai complexă din punct de vedere tehnic decât altele și este folosită în principal pentru titrarea și clonarea virușilor;
4) detectarea virusului în RIF. În cazul în care multiplicarea virușilor într-o cultură celulară nu este însoțită de un efect citopatic, hemodisorbția, prezența sa poate fi detectată cu anticorpi fluorescenți. Această metodă este utilizată pe scară largă în diagnosticul de pestă porcină clasică, infecții parvovirus, rabie, etc;
5) reacția imunoperoxidazei;
6) prin detectarea incluziunilor intracelulare. Pentru a detecta corpurile incluziuni culturi de celule sunt cultivate pe lamele plasate în eprubete, inoculate cu materialul de testat și într-un anumit interval de timp de incubare (la 37 ° C), sticla se spală, fixate și colorate cu diverse tehnici (hematoxilină-eozină, acridină orange, etc.). .
Multiplicarea virușilor în culturi celulare parțial sau complet (în funcție de gradul de distrugere a celulelor) intră în lichidul de cultură, care este utilizat ca o suspensie gata preparată a virusului. Dacă nu toate celulele de cultură sunt distruse ca urmare a multiplicării virusului în ele, atunci acestea sunt distruse prin înghețare și dezghețare de 2-3 ori prin ultrasunete.
Distribuiți un link cu prietenii
Trimiteți-le prietenilor: