Utilizare: biotehnologie, producția de acid citric. REZUMATUL INVENȚIEI: O nouă tulpină de producător de acid citric, Aspergillus niger BKPMF-681. Tulpina a fost obținută prin selecție, are o culoare de colonie neagră, conidii cu un diametru de 3,4-4,6 um. Se distinge printr-o productivitate ridicată a biomasei, formând 11,8-18,7 g acid citric per 1 g de miceliu uscat la aer. 1 tab.
Invenția se referă la industria microbiologică și selectarea ciupercii Aspergillus niger -produtsenta acid citric profunzime metoda de fermentare media: zahăr și minerale obținute prin hidroliza amidonului care conțin diferite cantități de glucoză.
O tulpină naturală de ciupercă Asp este cunoscută. niger 82 (D), producător de acid citric pentru fermentarea mediului de zaharoză-mineral. Pe parcursul a 10 zile de fermentație, tulpina formează 50-60% acid citric din zahărul uzat (1). Când se cultivă pe agar de must, tulpina 82 (D) formează abundent conidii de culoare neagră de dimensiune de 4,3 μm.
Producătorul de acid citric Asp este cunoscut. niger S-59 (din colecția de microorganisme CCF 1600) pentru cultivarea profundă pe un mediu nutritiv conținând 15% zaharoză. După 7 zile de fermentare, randamentul acidului citric ajunge la 70% 75% din zahărul adăugat (2).
Un dezavantaj al tulpinilor cunoscute 82 (D) și S-59 este productivitatea relativ scăzută cu fermentație prelungită.
Prototipul conform invenției poate fi cunoscută tulpina Asp. niger VKPMF-501, destinat cultivării imersată într-un mediu de sucroză-mineral care formează acid citric într-un randament de 82,5% zahăr tulpinii are o culoare bej conidia (3).
Dezavantajul tulpinii VKPMF-501 este creșterea sa puternică, care necesită o cheltuială semnificativă de zahăr pentru formarea biomasei în detrimentul acidului citric format. Datorită creșterii abundente, randamentul acidului citric din zahărul consumat în culturile tulpinei VKPMF-501 nu este suficient de ridicat.
O nouă tulpină de selecție de Aspergillus niger din Colecția All-Russian a microorganismelor industriale a fost dată cu numărul de colectare a VKPMF-681.
CARACTERISTICI CULTURAL morfologica NOI STRAIN VKPMF-681 Aspergillus niger In ziua 5, creșterea pe agar wort gigant diametru colonie de 90 mm. Colonia este neagră și colorată. Pe o rază de 10 mm, conidiența este abundentă. Pe restul coloniei, capetele conidiene se formează în grupuri, nu foarte strânse. Marginea "sterilă" a coloniei cu capetele conidice imature este de aproximativ 5 mm. Cu tălpile coloniilor ei în centrul strâns, partea periferică a coloniei are un miceliu subțire.
După 10 zile de creștere pe agar de must, cultura este caracterizată prin maturizarea abundentă a conidiilor. Capurile conidiene de la 54x54 microni la 180 x 234 microni în diametru, pe o medie de 119 microni. Inflamațiile de conidiophore 34-39 microni sferice sau longitudinale alungite. Sterigmatele cu două straturi. Lungimea sterigmului primului strat este de 9x2,3 11,5x4,6 pm; lungimea sterigului celui de-al doilea strat este de 4,6 pm. Conidiile sunt rotunde, cu un diametru de 3,4-4,6 μm, o medie de 3,99 μm. Coajă este gri, are o mulțime de spini. Conidiophorele sunt drepte, lungimea acestora este de 240-1000 microni; lungimea medie este de 450 μm. Secțiunea transversală a conidiophores este de 19-34 μm; o medie de 29 microni.
Conidiophorele nevopsite, pigmentul maro închis se acumulează în partea superioară a conidiophorului adiacent veziculei.
Comparativ cu tulpina parentală 82 și începe o nouă tulpină 163/9 are valoarea mai mică a structurilor morfologice (lungimea conidiofore, conidiofore abdominale sterigmata doilea strat conidii) dintr-un bej prototip tulpina VKPM B-501 este diferită de culoare gri închis de conidia.
Tulpina Asp. niger VKPMF-681 a fost identificat prin specificatorul de ciuperci Aspergyllus (4).
Fiziologici și BIOCHIMICE PROPRIETĂȚILE Aspergillus Niger VKPMF-581 Temperatura de aerobi cultura 28-32 o C, pH 5,5 7,5.
Atitudinea față de sursele de carbon: absorb glucoza, fructoza, sucroza, maltoza, într-o măsură mai mică manitol, galactoză, sorbitol.
Băut surse de azot: asimileaza compuși organici cu azot, de exemplu, proteine, peptone, aminoacizi, drojdie autolizatului, uree, asimileaza săruri de amoniu, nitrați.
Metoda de depozitare. Noua tulpină este stocată sub formă de conidia aer uscat separat de cultura ciupercilor cultivate pe agar cu must timp de 10 zile (6-7 zile la 32 ° C și 3-4 zile la temperatura camerei), este protejat de lumina directă a soarelui.
FUNCȚIA GENETICĂ A PROTOTROFULUI STAMM Esența invenției este ilustrată prin următoarele exemple specifice de utilizare a tulpinei VKPMF-681.
Exemplul 1. Pentru testele de laborator, inoculul este crescut în tuburi de test pe agar de must; pentru poluproizvodstvennyh și testarea semințelor în celule crescute pe mediu solid, preparat pe bază de neohmelennogo must de bere care conține 7% solide și compactată agar-agar (20 g / dm 3), pH 5,8 mediu. Înălțimea stratului mediu este de 12 13 mm. Mediul steril este inoculat cu conidii culturii fungice de elită și păstrat într-un termostat la 32 ° C timp de 7 zile. Umiditatea relativă într-un cuptor scade treptat: primele patru zile de 80 până la 60% din ultimele trei zile de la 60 la 40% pentru maturizarea deplină a culturii ciupercilor este păstrată la temperatura camerei timp de 2 zile. După 9-10 zile, conidiile sunt îndepărtate de pe suprafața peliculelor fungice utilizând un dispozitiv special de vid.
Condițiile umede se usucă până la un conținut rezidual de umiditate de 5-8%. Se păstrează la temperatura camerei.
Procesul de fermentare în condiții de laborator se desfășoară într-o manieră profundă pe balustrada AVU-50r cu un număr de leagări de 160-180 pe minut. Temperatura aerului în camera de balansare este de 32 o C.
Mediul nutritiv este preparat în flacoane de 750 ml; volumul mediu de 50 ml.
Cultura a ciupercii cultivate pe agar cu must timp de 10 zile, sau conidia aer uscat (07 octombrie conidia / cm 3 ecartament), sunt însămânțate în mediul de cultură și cultivate timp de 2 zile inoculumul miceliene, temperatura aerului într-o cameră de căldură 30-32 o C.
Principala materie primă pentru prepararea mediului în acest exemplu este zahărul granulat.
Compoziția mediului de cultură (g / l): zahăr 50 17 melasa de sfeclă, azotat de amoniu 2,5, sulfat de magneziu heptahidrat dihidrogenfosfat 0,25 potasiu 0,16, apa de la robinet până la 1 litru, pH 5,0 5,5.
Marele avantaj al noii tulpini de creștere limitată și eficiență ridicată a miceliului, ajungând la 18,7 g de acid citric per 1 gram de aer uscat timp de 5 zile de fermentație micelial; acidul oxalic nu formează o tulpină; fracțiunea de masă a acidului citric în cantitatea de acizi este randament 94-99% acid citric din ciclul zahărului petrecut la 84-92,5% (a se vedea. Tabel.).
Noua tulpina este destul de versatil si ofera fermentatie sucroza medii minerale și medii care rezultă din hidroliza amidonului, conținând 15-75% glucoză.
SURSE DE INFORMARE Zhuravsky G.I. Cel mai adânc mod de a produce acid citric. - Microbiology, 1955, t.XXIV. 3, p. 323-340.
Brevet 202709 Cehoslovacia, cl. C 12 P 7/48. Mod de preparare a acidului citrat submersibil prin picurare a soluției cu soluție plină Asp. niger. - Zerpold S. (CSSR), Musilkova M. (CSSR), Fencil Z. (CSSR), Ujcova E. (CSSR), publ. 05.30.80.
Tulpina de ciuperca Asp. niger VKPMF-501 producător de acid citric. - VM Golubtsova (URSS); VP Ermakova (URSS); E.S.Mintz (URSS); T.A Nikiforova (URSS); A. V. Galkin (URSS); VMFinko (URSS); V.N. Zhdanov (URSS).
Bilai V.I. Koval E.Z. Genul Asperilli-Kiev. Naukova Dumka, 1988.
Tulpina de ciuperca Aspergillus niger VKPM F-681 producator de acid citric.
Trimiteți-le prietenilor: