Nr. 20 Medii nutritive artificiale, clasificarea lor. Cerințe pentru mediile nutritive.
Mediul nutritiv în microbiologie se referă la medii care conțin diferiți compuși de compoziție complexă sau simplă care sunt utilizați pentru propagarea bacteriilor sau a altor microorganisme în condiții de laborator sau industriale.
Suplimentele nutritive sunt preparate din produse de origine animală sau de origine vegetală. O mare importanță este prezența în mediul nutritiv a factorilor de creștere care catalizează procesele metabolice ale celulei microbiene (vitaminele din grupa B, acidul nicotinic etc.).
Mediile artificiale sunt preparate conform unor rețete din diferite infuzii sau decoctări de origine animală sau vegetală, cu adăugarea de săruri anorganice, ape de carbon și substanțe azotate.
Practica bacteriologic cel mai frecvent utilizate medii nutritive uscate, care se bazează pe realizările biotehnologiei moderne. Pentru prepararea lor utilizate nealimentare materii prime viabile economic: pierderea de valabilitate a produselor din sânge (hidrolizatul-gidrolizina acidului de sânge animal, aminopeptid - hidrolizatul enzimatică a produselor din sânge biotehnologiei (furaje furajere drojdie Lizina, pudra de struguri, belkolizin) medii nutritive uscate pot fi depozitate pentru o perioadă lungă de timp. timp, convenabil pentru transport și având o compoziție relativ standard.
Conform consistenței, mediul nutritiv poate fi lichid, semi-lichid, dens. Mediile dense se prepară prin adăugarea în mediu lichid a agarului 1,5-2% agar semi-lichid - 0,3-0,7%. Agarul este un produs prelucrat dintr-un tip special de alge marine, se topește la o temperatură de 80-86 ° C, se solidifică la o temperatură de aproximativ 40 ° C și, în stare solidă, conferă mediului o densitate. În unele cazuri, gelatina (10-15%) este utilizată pentru a obține medii nutritive dense. O serie de medii naturale nutritive (colaps de sânge-coagulat, ouă pliate) sunt dense în sine.
Pentru scopul propus al mediului este împărțit în bază, electivă și diferențial-diagnostic.
Principalele sunt mediile folosite pentru a crește multe bacterii. Acestea sunt hidrolizate tripetice de carne, produse din pește, sânge animal sau cazeină, din care se prepară un mediu lichid - un bulion nutritiv și un bulion dens - agar nutritiv. Astfel de medii servesc ca bază pentru pregătirea mediilor complexe nutritive - zahăr, sânge etc., care satisface nevoile nutriționale ale bacteriilor patogene.
Mediile nutritive selectate sunt destinate pentru izolarea și acumularea selectivă a microorganismelor unei anumite specii (sau a unui anumit grup) din materiale care conțin o floră străină diversă. Atunci când se creează medii nutritive electivă se bazează pe caracteristici biologice care disting aceste microorganisme de cele mai multe altele. De exemplu, creșterea selectivă a stafilococilor are loc cu o concentrație crescută de clorură de sodiu, cholera vibrio într-un mediu alcalin și așa mai departe.
Mediile nutritive de diagnosticare diferențiate sunt utilizate pentru a diferenția speciile (sau grupurile) individuale de microorganisme. Principiul construirii acestor medii se bazează pe faptul că diferite tipuri de bacterii diferă între ele în activitatea biochimică datorită unui set diferit de enzime.
Un grup special constă din medii nutritive sintetice și semisintetice. Compoziția mediilor sintetice include substanțe chimice pure: aminoacizi, săruri minerale, carbohidrați, vitamine. Mediile semisintetice includ suplimentar peptonă, extract de drojdie și alți nutrienți. Aceste medii sunt cele mai des folosite în cercetare și în industria microbiologică în producția de antibiotice, vaccinuri și alte medicamente.
În ultimii ani, în scopul de a salva medii de cultură și exprima identificarea verifica-rennoy anumitor microorganisme (enterobacterii, Staphylococcus, Streptococcus și altele.) Sunt utilizate ca în legătura între sistemul microtest (MTS). Acestea sunt plăci din polistiren cu găuri, care conțin medii de diagnoză diferențială sterilă. Sterilizarea MTC se efectuează prin iradiere UV. Sistemele de microtestare sunt convenabile în special pentru studiile bacteriologice în masă în laboratoarele practice.
Cerințe pentru mediile nutritive.
Orice mediu nutritiv trebuie să îndeplinească următoarele cerințe: să conțină toate substanțele necesare pentru propagarea microorganismelor în formă ușor digerabilă; au umiditate optimă, vâscozitate, pH, sunt izotonice și transparente dacă este posibil. Fiecare mediu nutritiv este sterilizat într-un anumit mod, în funcție de compoziția sa.
Principii și metode de izolare a culturilor bacteriene pure.
O cultură pură este o populație de bacterii dintr-o specie sau dintr-o varietate, cultivată pe un mediu nutritiv. Multe specii de bacterii sunt împărțite de o caracteristică în variante biologice - biovare. Biovars, care diferă în proprietățile lor biochimice, se numesc chemovari. pe proprietăți anti-gene - serovari. pe sensibilitatea la fag - fag. Culturile de microorganisme din aceeași specie, sau biovar, izolate din surse diferite sau în momente diferite de la aceeași sursă, se numesc tulpini. care sunt de obicei indicate prin numere sau unele simboluri. Culturile bacteriene pure în laboratoarele bacteriologice de diagnostic sunt obținute din colonii izolate, prin introducerea lor în tuburi de testare cu medii nutritive solide sau, mai rar, lichide.
Colonia este izolat Osprey-vizibil Leniye aceleași specii de microorganisme care rezultă din multiplicarea unuia celule bacteriene pe mediu solid (pe suprafața sau în profunzimea acesteia). Coloniile de bacterii de diferite specii diferă între ele în ceea ce privește morfologia, culoarea și alte caracteristici.
O cultură pură de bacterii se obține pentru studii de diagnostic - identificare, care se realizează prin determinarea caracteristicilor morfologice, culturale, biochimice și de altă natură ale microorganismului.
Semnele morfologice și tinctuale ale bacteriilor sunt studiate prin examinarea microscopică a frotiurilor colorate cu metode diferite și preparate native.
Proprietățile culturale se caracterizează prin nevoi nutriționale, condiții și tip de creștere a bacteriilor în medii nutritive dense și lichide. Ele sunt stabilite în funcție de morfologia coloniilor și a caracteristicilor creșterii culturii.
Semnele biochimice ale bacteriilor sunt determinate de compoziția enzimelor constitutive și inductibile inerente unui anumit gen, specii și variante. În practica bacteriologică, semnificația cea mai adesea taxonomică este enzimele zaharolitice și proteolitice ale bacteriilor, determinate pe medii de diagnostic diferențiate.
Atunci când se identifică bacterii pentru genul și speciile, se acordă atenție pigmenților care culorează coloniile și mediul de cultură într-o varietate de culori. De exemplu, un pigment roșu-Obra forma un Serratia marcescens, Staphylococcus pigment - Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), pigment albastru-verde - aeruginosa Pseu-domonas.
Pentru a stabili biovarul (chemovar, serovar, fageotip), sunt efectuate studii suplimentare pentru a identifica markerul corespunzător - determinarea enzimei, a antigenului, sensibilitatea la ventilatoare.
Metode de izolare a culturilor bacteriene pure.
Un instrument universal pentru producerea culturilor este buclele bacteriene. În plus, se utilizează un ac special de bacterii pentru însămânțarea cu un bolț și spatule de metal sau de sticlă pentru plantare pe plăci petri. Pentru însămânțarea materialelor lichide împreună cu buclă, se utilizează pipete și pastelate gradate. Primele sunt pre-fabricate din tuburi sterile de sticlă fuzibilă, care sunt trase pe flacără sub formă de capilare. Capilar capăt imediat sigilat pentru a menține sterilitatea. În pipetele Pasteur și graduate, capătul larg este acoperit cu bumbac, după care sunt plasate în cutii speciale de creion sau învelite cu hârtie și sterilizate.
Prin subcultivarea tubul de cultură bacteriană luate în mâna stângă și dreaptă clasping dop din bumbac IV și degetele V, se îndepărtează, care transportă peste flacăra arzătorului. Ținând degetele cu celelalte degete ale aceleiași mâini, acestea ridică materialul de însămânțare, după care închid tubul cu o plută. Apoi, un tub cu o buclă oblică agar luare cu un material de sămânță, coborându-l până condensului în mediul de jos Cha stimul, și o mișcare partiționat zigzag rial de mate pe suprafața conică a agarului. Scoateți bucla, ardeți marginea tubului și închideți-o cu un dop. Bucla este sterilizată în flacăra arzătorului și este așezată într-un trepied. Sunt înscrise tuburi cu culturi care indică data însămânțării și natura materialului de însămânțare (numărul studiului sau numele culturii).
Cropurile "gazon" produc o spatulă pe agar nutritiv într-un vas Petri. Pentru a face acest lucru, deschideți capacul cu mâna stângă, bucle sau pipetă, aplicați semințele pe suprafața agarului nutrient. Apoi treceți spatulul prin flacăra arzătorului, răciți-l în interiorul capacului și frecați materialul pe întreaga suprafață a mediului. După incubarea culturii, apare o creștere continuă uniformă a bacteriilor.
№ 22Factibilitatea bacteriilor. Identificarea bacteriilor prin activitate enzimatică.
În centrul tuturor reacțiilor metabolice din celula bacteriană este activitatea enzimelor care aparțin clasei-6 în sine: oxidoreductaze, transferaze, hidrolaze, ligare, liaze, isomerase. Enzimele, celula bacteriană imagine-emye poate setările locale-apel a celulelor din interiorul - endofermenty și eliberate în mediul înconjurător - exoenzymes. Exoenzymes joacă un rol important în asigurarea faptului că celula bacteriană disponibilă pentru penetrarea este sursă de carbon și energie. Majoritatea hidrolază este exoenzymes care, în picioare în peptidele scindabil-mediu sunt molecule mai mari, polisaha-Reed, lipide la monomeri și dimerii, care ar putea pătrunde în celulă. Un număr de exoenzymes, cum ar fi hialuronidaza, colagenaza si alte enzime sunt agresiune. Unele enzime sunt localizate în spațiul periplasmic al celulei bacteriene. Participă la procesele de transfer al substanțelor într-o celulă bacteriană. Spectru Enzymatic este un caracter taxonomic, tipic al familiei, genului și - în unele LES-ceaiuri - pentru specie. Prin urmare, determinarea spectrului de activitate enzimatică este utilizată la stabilirea poziției taxonomice a bacteriilor. Prezența ekzofermen-ing pot fi determinate prin medii de diagnostic diferențial, astfel încât identificarea bacterii au dezvoltat sistem de testare special constând dintr-un set de medii de diagnostic diferențial.
Identificarea bacteriilor prin activitate enzimatică.
Cel mai adesea, enzime clasa hydrolase și oxidoreductase, folosind metode speciale și medii.
Pentru a determina activitatea proteolitică, microorganismele se inoculează în coloana de gelatină cu un prick. După 3-5 zile, culturile sunt examinate și se notează caracterul de lichefiere a gelatinei. Când proteina este descompusă de unele bacterii, pot fi eliberate produse specifice - indol, hidrogen sulfurat, amoniac. Pentru definirea lor împăcării sunt indicatoare hârtie specială, co-torye plasată între gât și dopul într-un tampon de bumbac sau un BCH (i) apă peptonată, microorganismele studiate semănate. Indolul (produs de descompunere a triptofanului) pătează o bandă roz de hârtie saturată cu o soluție saturată de acid oxalic. Hârtia, impregnată cu o soluție de acetat de plumb, devine negru în prezența hidrogenului sulfurat. Pentru a determina utilizarea amoniacului, folosiți o hârtie roșie.
Pentru multe microorganisme taxonomice la-semn este abilitatea de a descompune un anumit carbohidrați pentru a forma acizi și gazoase produk-ing. Pentru a identifica această utilizare Gissa, care conține carbohidrați diferiți (glucoză, zaharoză, maltoză, lactoză, etc.). Pentru detectarea acizilor în mediu adăugat reactivul Andred care își schimbă culoarea de la galben pal la roșu la pH 7,2-6,5, astfel încât setul de medii cu creșterea microorganismelor sâsâitură numite „lângă pestriță“.
Pentru a detecta formarea de gaze în mediu lichid, flotoarele sunt coborâte sau se utilizează medii semilichide cu 0,5% agar.
Pentru a determina formarea acidă intensă. caracteristică de tip mixt fermentat în mediu cu glucoză 1% și 0,5% peptonă (mediu Clark) a fost adăugat metil indicator roșu, care este galben la pH 4,5 și mai sus și roșu -cu valori mai mici ale pH-ului.
Hidroliza ureei este determinată prin izolarea amoniacului (hârtia de turnătorie) și alcalinizarea mediului.
Pentru identificarea multor microorganisme ispol'uet formează o reacție Voges - Proskauer la acetoină - conexiune diate Promo cu formarea de butandiol acid piruvic. O reacție pozitivă demonstrează prezența fermentației cu butandiol.
Catalaza poate detecta bule de oxigen care devin proeminente imediat după amestecare, depozitele de celule microbiene cu soluție 1% de peroxid vodoro da.
Pentru a determina citocrom oxidaza, se folosesc re-active: 1) soluție 1% alcool de c-naftol-1; 2) soluție apoasă 1% de diclorhidrat de N-dimetil-p-fenilendiamină. Prezența citocrom oxidazei este evaluată prin colorarea albastră care apare după 2-5 minute.
Pentru determinarea nitriților se utilizează reactivitatea Griess: apariția culorii roșii indică prezența nitriților.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: