În cazul transformării ADN-T netumorigene plantelor sunt markeri necesare. Acest lucru nu este folosit ca ONCs gene ei înșiși și nos și promotorii acestora și situri de poliadenilare, între care este plasat markeri selectabili bacterieni. Aceasta este fosfotransferază neomicină (neo, rezistența la antibiotice aminoglkozidnym kanamicina și neomicina), gigromitsinfosfat transferaza (HPT, rezistență la higromicină) hloramfenikolatsetiltrasferaza (pisică, rezistență la cloramfenicol), dihidrofolat reductaza (dhfr, rezistența la metotrexat) și altele.
Unele tulpini de A. rhogenes care conțin plasmidă posedă de asemenea capacitatea de a transforma celulele plantelor dicotiledonate. La plantele infectate cu aceste bacterii, se provoacă formarea țesutului, care se numește rădăcină de pătrată. Prin urmare, plasmidele care provoacă acest efect se numesc Ri-plasmide (inducerea rădăcinilor). Hărțile genetice sunt similare cu plasmidele Ti. Partea infecțioasă a plasmidelor Ri este, de asemenea, T-ADN. Cu toate acestea, celulele transformate sunt non-oncogene. Acestea sintetizează păduchii, cresc rapid în cultură și din ele se pot regenera plante prolifice sănătoase. Prin urmare, astfel de plasmide sunt mai atractive. Pe baza lor au fost create vectori integrativi și binari.
3.2. Transformarea celulelor vegetale
Când se lucrează cu specii noi de plante în experimente preliminare, folosind agrobactria oncogenică, determinați ce explante sunt potrivite pentru astfel de experimente. Acestea pot fi segmente de frunze, tulpini, tuberculi, rădăcini, pețiole, germeni sau plante propagate in vitro. Apoi, experimentele se repetă cu agrobacterii non-oncogene. Mai mult, toroane neîngrijite sau rădăcină calus transferate în mediul de creștere solidă și schimbarea compoziției mass-media și condițiile de cultură, pentru a realiza regenerarea plantelor conform primei scheme.
O clonă a celulelor transformate este obținută din protoplastele lor. Protoplastia este o metodă sigură de obținere a celulelor izolate din plante. În condiții adecvate, protoplastul remodelează peretele celular și intră în mitoză. Sinteza ADN-ului servește ca un semnal al pregătirii celulei de plantă care urmează a fi transformată prin agrobacterii. În acest punct, care se produce la o săptămână după inițierea cultivării protoplaștilor într-un mediu lichid, se adaugă agrobacterii. După 1-2 săptămâni de cultivare suplimentară, formate într-o suspensie de microcolonii de celule vegetale (ele nu se dispersează după divizare) sunt însămânțate pe un mediu selectiv dens. Dupa 3-6 saptamani, pe cuple se formeaza un calus, din care se poate regenera intreaga planta. Aceasta planta va fi transgenica daca agrobacteriile infectante contin ADN recombinant.
Metoda de transfer al genelor străine în plante cu ajutorul agrobacteriilor nu este universală. Principalul dezavantaj este limitarea cercului de gazde. Numai în cazuri singulare au reușit să transforme plantele monocotiledonate în agrobacterii. De exemplu, este posibil să se inducă formarea coroanei biliare la yam Discorea bulbifera (plante monocotiledonate) infectate cu celule Agrobacterium, în care regiunea vir a fost indusa anterior de ranirea a acetosiringonă cartofului (dicotiledonate). Dar problema limitării nu este legată numai de monocoti. Pentru multe specii de dicotiledon cultivate, nu s-au găsit încă condiții de transformare și / sau regenerare a plantelor întregi din celule izolate. În astfel de cazuri, preparatele de ADN izolat sunt utilizate pentru transformare.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: