Metodele microscopice de investigare sunt metode de studiere a diferitelor obiecte cu ajutorul unui microscop. În biologie și medicină, aceste tehnici ne permit de a studia structura obiectelor microscopice, dimensiunile care sunt dincolo de puterea de rezoluție a ochiului uman. Baza M.M.I. lumină și microscopie electronică. În activitățile practice și științifice ale medicilor de diverse specialități -. Virusologie, microbiologie, citologie, morfologie, hematologi, etc., în plus față de microscopie optică convențională folosind contrast de fază, interferență, luminiscent, polarizarea, stereoscopic, ultraviolete, microscopie în infraroșu. Aceste metode se bazează pe diferitele proprietăți ale luminii. În microscopia electronică, imaginea obiectelor de investigare rezultă din fluxul direct al electronilor. Pentru microscopie ușoară și alte MM bazate pe ea. o importanță decisivă în plus față de rezoluția microscopului este natura și direcția fasciculului de lumină, precum și caracteristici ale obiectului studiat, care poate fi transparent și netransparent.
În funcție de proprietățile obiectului, proprietățile fizice ale luminii se schimbă - culoarea și luminozitatea acesteia, asociate cu lungimea de undă și amplitudinea undei, fazei, planului și direcției propagării undelor. Cu privire la utilizarea acestor proprietăți ale luminii, sunt construite diferite MW. Pentru microscopia ușoară, obiectele biologice sunt de obicei colorate pentru a identifica anumite proprietăți. În acest caz, țesuturile trebuie fixate, deoarece colorarea dezvăluie anumite structuri ale celulelor moarte. Într-o celulă vie, colorantul este izolat în citoplasmă ca un vacuol și nu-i pată structura. Cu toate acestea, într-un microscop luminos, se pot studia, de asemenea, obiecte biologice vii utilizând metoda microscopiei vitale. În acest caz, se utilizează un condensator de câmp întunecat, care este încorporat într-un microscop. Phase-contrast microscopy este, de asemenea, folosit pentru a studia obiecte biologice vii și nevopsit. Se bazează pe difracția unui fascicul de lumină în funcție de caracteristicile obiectului de radiație. Aceasta schimbă lungimea și faza undei luminoase. Lentila microscopului special cu contrast de fază conține o placă de fază translucidă. Obiectele microscopice vii sau microorganismele și celulele fixe, dar nu colorate, din cauza transparenței lor, practic nu modifică amplitudinea și culoarea fasciculului luminos care trece prin ele. provocând doar o schimbare de fază a valului său.
Totuși, după trecerea prin obiectul studiat, razele de lumină deviază de la placa de fază semitransparentă. Ca rezultat, o diferență de lungime de undă are loc între razele transmise prin obiect și razele fondului de lumină. Dacă această diferență nu este mai mică de 1/4 din lungimea de undă, apare un efect vizual în care obiectul întunecat este vizibil în mod clar pe un fundal ușor sau invers, în funcție de caracteristicile plăcii de fază. O varietate de microscopie cu contrast de fază este contrastul amplitudinii sau microscopia anoptrală, în care se utilizează o lentilă cu plăci speciale care schimbă doar luminozitatea și culoarea luminii de fundal. Ca urmare, se extind posibilitățile de a studia obiecte vii nevopsite. Phase-contrast microscopy este utilizat în microbiologie și parazitologie în studiul de microorganisme, protozoare, celule de plante și animale; în hematologie pentru numărarea și determinarea diferențierii măduvei osoase și a celulelor sanguine; precum și în studiul celulelor de cultură tisulară etc. Microscopia de interferență rezolvă aceleași probleme ca și microscopia cu contrast în fază.
Polarizarea se modifică atunci când razele luminoase trec (sau reflectă) prin diferite componente structurale ale celulelor și țesuturilor ale căror proprietăți nu sunt uniforme. În așa-numitele structuri izotrope viteza de propagare a luminii polarizate nu depinde de planul de polarizare în structurile anizotropice viteza de propagare variază în funcție de direcția luminii de-a lungul axei longitudinale sau transversale a obiectului. Dacă indicele de refracție a lungul structurii mai mult decât în direcția transversală, există o birefringență pozitiv cu relația inversă - birefringență negativ. Multe obiecte biologice au o orientare moleculară strictă, sunt anisotropice și au o refracție dublă pozitivă a luminii. Aceste proprietăți sunt myofibrils, cilia neurofibrils epiteliului ciliat, fibre de colagen si altele. Compararea naturii refracție a razelor de lumină polarizată și mărimea anizotropiei obiectului oferă o indicație a structurii sale moleculare organizare. Microscopia Polarizarea este una dintre metodele de cercetare histologica, metoda de diagnostic microbiologic își găsește aplicarea în studii citologice, și altele. în lumina polarizată poate fi prelucrată ca vopsite și nevopsite și non-fixe, așa-numitele preparate de felie de tesut nativ.
Microscopia luminescentă este utilizată pe scară largă. Ea se bazează pe capacitatea unor materiale pentru a da strălucire - luminiscența în lumină UV sau porțiune albastru-violet a spectrului. Multe substanțe biologice, cum ar fi proteine simple, coenzime, anumite vitamine și medicamente, au propriile luminescențe (primare). Alte substanțe încep să strălucească numai atunci când li se adaugă coloranți specifici - fluorochromi (luminescența secundară). Fluorocromi pot fi alocate în celulă sunt colorate în mod selectiv structuri celulare sau compuși chimici specifici ai obiectului biologic prolix sau separat. Aceasta se bazează pe utilizarea citologice microscopie fluorescentă și studii histochimice (vezi. Studii Metode histochimice). Cu microscopie imunofluorescentă pentru a detecta antigene virale fluorescente și concentrația lor în celule, virușii identificați, antigene determinate și anticorpi, hormoni, diverse produse metabolice, etc. În acest sens, microscopie fluorescentă a fost utilizată în diagnosticul de laborator al infecțiilor, cum ar fi herpes, oreionul, hepatita virală, gripă, etc. Sunt utilizate in diagnosticul rapid al infecțiilor virale respiratorii, examinând amprentele cu mucoasa nazală a pacienților, și diagnosticul diferențial al diferitelor infecții. În Pathomorphology folosind microscopie fluorescente recunosc tumori maligne histologice și specimene citologice, determina zonele ischemice ale mușchiului cardiac în stadii incipiente de infarct miocardic, a detecta amiloid in tesutul biopsie, etc.
microscopie UV bazat pe capacitatea unor substanțe care fac parte din celule vii, microorganisme sau fixe, dar nu colorate, transparente în țesuturi de lumină vizibilă absorb radiațiile UV cu o anumita lungime de unda (400-250 nm). Această proprietate este posedat de compuși cu masă moleculară mare, cum ar fi acizi nucleici, proteine, acizi aromatici (tirozină, triptofan, metilalanii) purina si baze piramidinovye etc. Cu microscopie ultraviolet specifică locația și cantitatea acestor substanțe, precum și în cazul studierii obiectelor vii -. Schimbări lor în procesul de viață. microscopie în infraroșu permite să investigheze opac la lumina vizibilă și absorbind obiecte de structurile lor de lumină cu lungime de undă de 750-1200 nm UV-radiații. Pentru microscopia în infraroșu, nu este necesar un tratament chimic preliminar al preparatelor. Această specie este M.M.I. cel mai adesea folosit în zoologie, antropologie, alte ramuri ale biologiei. În medicină, microscopia în infraroșu este folosită în principal în neurologie și oftalmologie. Microscopia stereoscopică este utilizată pentru studierea obiectelor volumetrice.
Construcția de microscoape stereoscopice face posibilă vizualizarea obiectului investigației cu ochiul drept și stâng la diferite unghiuri. Explorați obiectele opace cu o creștere relativ mică (de până la 120 de ori). Microscop stereoscopic este utilizat în microchirurgie, în Pathomorphology pentru un studiu special de biopsie, materialul operațional și secțională, studii criminalistice de laborator. Pentru a studia subcelular si nivelurile macromoleculari structura celulelor, microorganisme și viruși țesuturi folosind microscopia electronică. Acest M.M.I. a permis trecerea la un nivel calitativ nou al studiului materiei. Acesta este utilizat pe scară largă în morfologia, microbiologie, virusologie, biochimie, oncologie, genetică, imunologie, creșterea bruscă a rezoluției microscop electronic este furnizat de fluxul de electroni care trec sub vid prin câmpuri electromagnetice generate de lentile electromagnetice.
Electronii pot trece prin structura obiectului de test (microscopie electronică de transmisie) sau reflectate de la acestea (microscopie electronică de scanare), deviate la unghiuri diferite, rezultând într-o imagine pe ecranul fluorescent al microscopului. Când imaginea de transmisie (TEM) de microscopie electronică obținute structuri plane când scanarea - volum. Combinația de microscopie electronică cu alte metode, cum ar fi autoradiografie, metode histochimice, imunologice, permite electroni radioautographic, electron-histochimic, studiile de electroni imunologic. Microscopia electronică necesită pregătirea specială a obiectelor de cercetare, în special fixarea chimică sau fizică a țesuturilor și a microorganismelor. Biopsiile și materialul secțională este deshidratată după fixare, se toarnă în rășini epoxidice, tăiate de sticlă sau de diamant cuțite pe ultratome specială care permite să se obțină secțiunile de țesut ultrasubțiri 30-50 nm grosime. Ele sunt contraste și apoi studiate într-un microscop electronic. La microscop de scanare (raster) electroni studiind suprafața diferitelor obiecte prin împroșcarea pe ele într-o cameră de vid a unei substanțe densitate de electroni, și au examinat așa-numita proba replica repetarea contururi. Vezi și Microscopul.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: