HAI. Metoda principală, foarte specifică și ușor de efectuat pentru identificarea virusului Bibliotecii Naționale din Belarus. Pentru formulare, este necesar să se aibă seruri specifice de referință pentru virusul-sous și virusul izolat din CEE (fluidul alantoic) al RTGA este utilizat în mod obișnuit în macro- și micro-variante. Identificarea virusului este considerată completă dacă acest ser specific specific inhibă activitatea HA a virusului într-un titru întreg sau 1 / 2-1 / 8 cu o referință omologă AG. Pentru identificarea rapidă a virusului izolat se recomandă următoarea metodă: picături de lichid alantoic și suspensie de 1% de celule roșii de sânge de pui sunt aplicate pe diapozitiv. Apoi puneți un eșantion pentru a neutraliza activitatea GA. Pentru aceasta, o picătură din același lichid alantoic, o picătură de ser specific de referință, se aplică obiectului de sticlă și se amestecă bine. Dacă nu există aglutinare a globulelor roșii din sânge, atunci virusul este un virus al virusului.
Prepararea serurilor hiperimune. 5-8 luni de pui cu titruri anti-HA de imunitate post-vaccinare împotriva HB 1: 4-1: 64 sunt hiperimunizați cu vaccinuri virale din buc. B1, La Sola, N. Prima injectare se face cu un adjuvant (amestec de autoclav de lanolină și vaselină în raport 1: 1,5). Se adaugă 5 ml din virusul vaccinului la 1 ml din amestec. Amestecul se macină într-un mortar și se introduce într-o baie de apă timp de 30 de minute la o temperatură de 56 ° C
Prima dată când vaccinul este administrat cu un adjuvant în volumul de 1 ml intramuscular, a doua oară - după 3 zile fără adjuvant, a treia oară după 3 zile fără adjuvant. După 10 zile, se verifică activitatea serurilor hiperimune, titrul lor fiind de obicei 1: 6144-1 12288.
LV pe FE. Ele sunt utilizate pentru a identifica virusul rar, deoarece este consumatoare de timp și consumatoare de timp. Reacția este utilizată în situații controversate, RN este de obicei folosită în varianta de diluție a virusului și o doză constantă de ser. Reacția este considerată pozitivă cu un indice de neutralizare> 21g.
RSK. În practica de diagnostic, NB sunt rareori utilizate. RCC este propus ca o metodă rapidă și ieftină de diferențiere a tulpinilor virusului NB pentru virulență
RIF. Metoda se bazează pe utilizarea de ser imun conjugare rodaminsulfohlorida clorhidric la virus, în scopul de a identifica celulele infectate cu virus AH SAW Shih și păsări moarte utilizarea acestui colorant este cel mai adecvat și convenabil datorită luminos roșu-portocaliu AH luminescență. conjugați FITC (flyuorestseinizotiotsianat) sunt mai puțin potrivite pentru detectarea unui AG specific aplică omolog PCX conjugă manieră convențională. In cele mai multe cazuri, hipertensiunea arterială este detectată în nucleele celulelor albe din sânge (limfocite, monocite și eozinofile psevdoeozinofilah) sau celule infectate ale organelor menționate anterior, ca portocaliu-rosu culoare fluorescenta luminoase. La sfarsitul anilor-control unul preparatele tratate cu aceleași conjugate omoloage astfel sve-cheniya nu apar numai în anumite cazuri detectate punct galben-portocaliu strălucire în citoplasmă tinerilor eozinofile. Este stabilit că virale AH infectate culturi de celule (CEF si BHK-21), a relevat Feenberg pornind de la 4 ore (pentru tulpinile velogenice) și 6 ore (pentru tulpinile lentogene) la 10-12ch glow AG a remarcat doar în citoplasmă, și în 20 de ore - în citoplasmă și nucleele celulelor.
RIGA. VNIVIP a elaborat o procedură de obținere a unor medicamente testate pentru testul de eritrocite, foarte sensibile, de la AT la virusul ND pentru diagnosticul expres. Acest test de diagnosticare a eritrocitelor permite detectarea virusului în excrementele organelor și țesuturilor.
ELISA. Folosind metoda ELISA, virusul viral AG este detectat la începutul perioadei post-infecție, înainte de apariția CPD. La doisprezece ore după infecție, se observă celule unice care conțin AG.
Identificarea cu ajutorul mAb. Au fost studiate diferite tulpini de virus și lizate de HB pentru o relație omologă cu mAb. Ca rezultat al testării a 40 de izolate și tulpini utilizând un set de 9 mAb, au fost identificate 8 grupuri. Virusurile din fiecare grup posedat nu numai AG-proprietăți comune, dar, de asemenea, aceleași caracteristici epizootice mAb la HA și glicoproteina F recomandă folosirea pentru determinarea caracteristicilor patogenitate și biologice ale tulpinilor care circulă în efectivele vaccinate și păsări nevaccinate Ele pot fi folosite pentru a identifica domeniul izo-lyatov, AG legate de buc. La Sota și B1, diferențierea rapidă a acestor tulpini de vaccin de la izolații de câmp virulent.
Metoda de mapare a oligonucleotidelor. Această metodă a fost utilizată pentru a studia compoziția biochimică a mai multor tulpini ale virusului HBV izolat în statele din California, Texas și Florida, ceea ce a făcut posibilă diferențierea ușoară a tulpinilor unul de celălalt. Unele tulpini erau identice. Se crede că metoda de mapare a oligonucleotidelor poate fi utilizată în mod eficient pentru a evalua situația epizootică.
Determinarea virulenței virusului izolat. În plus față de identificarea serologică, devine adesea necesară determinarea virulenței izolatului izolat. Acest lucru este important atunci când se suspectează că agentul cauzal izolat este o tulpină utilizată pentru vaccinarea în masă. Gradul de virulență poate fi determinat prin următoarele metode.
Metoda lui Henson este determinarea indexului de virulență intracerebrală. Materialul investigat într-o diluție de 1:10 este infectat intracerebral într-o doză de 0,05 ml din 10 ouă de pui de o zi, obținute din găini nevaccinate împotriva NB. Timp de observare 8 zile. Toate puii de pui sunt considerați specifici; suma lor este multiplicată cu un factor de 2. Toate puii care prezintă semne clinice sunt de asemenea considerați specifici; suma acestora este înmulțită cu un factor 1. Indexul patogenității intracerebrice se calculează prin împărțirea sumei de bile cu 80 (numărul de observații pentru 10 pui de găină în decurs de 8 zile). Pentru tulpinile de tip bandă, indicele este de până la 0,2, pentru tulpinile bentonice - mai mult de 1,5. Dezavantajul acestei tehnici este - o perioadă de observație constantă - 8 zile.
Metoda de determinare a timpului mediu de deces de embrioni de 10 zile, a indus th-doză letală minimă (CSA / MLD). Pentru a face acest lucru, se prepară o serie de diluții de 10 ori ale virusului investigat de la 10 -1 la 10 -10. .. Cinci dintre ele (10 -1 10 -7 10 8. 10 9. 10 -10 este utilizat pentru Zara zheniya 10 zile în TBE cavitatea alantoidiană într-un volum de 0,1 ml din fiecare din aceste diluții au fost inoculate pe 10 TBE .: 5 infecta 8 dimineața și -sa 16 ore (total de 50 de embrioni-infecta nou) și le-incubat la 37 ° C, le vor respecta de 2 ori pe zi, la fiecare 8 ore timp de 120 h. După o oră s-au înregistrat decese fiecare embrion mort . doza minimă letală este considerată cea mai mare diluție a virusului care cauzeaza moartea embrionilor inoculate. timpul mediu de deces se găsește prin împărțirea sumei tuturor ore de la moartea embrionului prin apelarea Anna minimă doză letală, numărul de embrioni: timpul mediu de deces de până la 60 de ore - tulpini velogenice; moartea medie, timp de 61 până la 90 de ore - tulpinile mezogeni, timpul mediu de moartea lui 90 și peste 100 de ore - tulpini lentogenice Cu toate acestea, aceste metode sunt costisitoare și necesită. mult timp - este necesar să petreceți cel puțin 7 zile pentru a diferenția tulpinile sălbatice de vaccin.
RSK. O modalitate rapidă și ieftină de diferențiere a tulpinilor. Diagnosticul se face în termen de 3 zile de la primirea probelor. Legarea cea mai slabă a complementului este cauzată de tulpini de tip sălbatic de tip sălbatic, cel mai puternic latent (de exemplu, La Sota), puternic și slab-mezogenic. În plus, tulpinile virulente sunt mai puțin antigenice decât tulpinile de vaccin în ceea ce privește inducerea sintezei CCA la cobai. Cea mai distinctă diferențiere este serul de cobai imunizați cu tulpina Hitchner.
Biotestare. Din 1972, tulpinile cu virulență foarte mare au fost izolate în Statele Unite și apoi în alte țări. Acestea se numesc tulpini WND (tulpini viscerotropice ale NB). Pentru identificare, se efectuează o biotestare la puii sensibili la vârsta de cel puțin 6 săptămâni. Puii sunt infectați într-o cloacă. Mai multe persoane sunt infectate în ochi, făcând o picătură de virus. Bird watching 10 zile. Dacă în această perioadă nu pătrunde puiul, considerați că tulpina nu aparține WND. În cazul în care păsările se îmbolnăvesc și mor în 10 zile, se efectuează o autopsie. În Statele Unite sa făcut următoarea evaluare a intensității schimbărilor (în puncte): hemoragii exacte sau modificări necrotice în trahee - 25; hemoragii punctuale sau modificări necrotice în trahee și edemul însoțitor al traheei și în zona de intrare în torace - 100; sângerare la nivelul punctului sau modificări necrotice la buric - 100; necroza și ulcerarea glandelor intestinului orb și plăcile lui Peyer - 100; sângerare sau modificări necrotice în mucoasa cloaca-10; Inflamația peritoneului în regiunea ovariană - 10; punct de sângerare în alte locuri - 10. Diagnostic VVND este considerat valid dacă numărul total de puncte ajunge la 150 sau mai mult.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: