Practic 5

În procesul de recoltare după tripsinizare, puteți evalua starea culturii celulare, adică să numărați numărul total de celule și, de asemenea, să identificați celulele moarte și vii printre ele.

În aceste scopuri, există o metodă simplă de numărare a celulelor într-un hemocitometru (camera lui Goryaev).

Un volum egal de 0,1% albastru de tip trypan se adaugă la suspensia de celule. Acest colorant pata numai celulele moarte.
Pisa de sticlă șlefuită la coverslip hemocitometru de diapozitive (săgeata albă), înainte de apariția inelelor lui Newton, astfel încât să acopere zona hașurată (săgeata albastră).

Aceasta conduce la formarea unei camere cu un volum fix, deoarece marginile culisei sunt ridicate exact deasupra suprafeței umbrite cu exact 0,1 mm.

Fiecare zonă umbrită constă din 9 pătrate mari de 1x1, adică volumul delimitat de fiecare pătrat mare este de 1mm x 1mm x 0.1mm = 0.1mm3.

O porțiune din suspensia colorată este îndepărtată cu o pipetă Pasteur și camera de numărare a hemocitometrului este umplută utilizând aspirația capilară fără a umple canalele de cameră.

Numărarea celulelor vii într-un hemocitometru (conform lui R.L.P. Adams)

Numărați numărul de celule în patru pătrate mari în colțurile fiecăreia dintre cele două zone umbrite.

Sunt luate în considerare celulele care privesc liniile delimitării drepte și superioare, dar nu celulele care se referă la liniile limită din stânga și inferioară.

Deoarece volumul pătratului mare este de 0,1 mm3, atunci înmulțirea valorii medii a numărului de celule într-un pătrat cu 10 4. obțineți numărul de celule în 1 ml din suspensie.

Numărăți celulele sub obiectivul x10. Numărați celulele în patru seturi de 16 pătrate mici (în fiecare colț al zonei umbrite central). Luați în considerare numai celule necolorate. Împărțind acest număr de 4, se obține numărul mediu de celule per 1 mm 2. Deoarece înălțimea camerei este de 0,1 mm, factorul de conversie pentru hemocitometru este 104. Presupunând că valoarea obținută este de 20 celule per 1 mm 2. Apoi 20h104 egal cu numărul de celule în 1 ml de suspensie albastru tripan clorhidric colorat și 2h20h104 egal cu numărul de celule în 1 ml din suspensia inițială, adică. e. concentrația de celule vii din suspensia inițială de 4x10 5 celule în 1 ml.

Unul dintre avantajele culturii celulare asupra altor obiecte de studiu este posibilitatea monitorizării pe termen lung a funcțiilor vitale ale celulelor, starea organitelor celulare individuale, pentru procesele care au loc în celule, pentru a capta starea culturii în vederea parametrilor calitativi și cantitativi.

În aceste scopuri, pot fi utilizate metode de microscopie a celulelor (atât intravitală, cât și post-fixare) și fotografie.

Prima fotografie a celulei, obținută sub microscop electronic, a fost făcută în 1945 de către Keith R. Porter, Albert Claude și Ernest F. Fullam.

Cel mai adesea, înainte de observarea la microscop, celulele sunt colorate.

Comparați cele două fotografii ale celulelor monostrat obținute în laboratorul nostru (linia SPEV).
E greu de crezut că au aceeași cultură. Faptul este că celulele sunt colorate cu coloranți diferiți.

Celulele nucleului Indigo și structura celulară purpură de metilen.

Există, de asemenea, metode de colorare selectivă a componentelor structurale ale celulei. Să dăm câteva exemple.

Există metode de colorare intravitală a celulelor pentru a distinge celulele moarte și cele vii. Unele firme produc seturi speciale în acest scop.

De exemplu, astfel de teste sunt oferite de Molecular Probes Europe BV.

Celulele spermei bovine au fost colorate folosind setul de viabilitate LIVE / DEAD FertiLight Sherm. Celulele vii sunt verzi.

Articole similare

• 6 sfaturi utile de îngrijire a părului pentru lecții de înot, sfaturi, academie nebun val

• Muay Life - cursuri de box Thai

• Este necesar să se combată vânatul albinelor, apicultura practică

Trimiteți-le prietenilor: