Studiul este apa:
1) alimentarea cu apă centralizată;
2) din puțuri de diferite tipuri;
3) corpurile de apă deschise (râuri, lacuri, mări);
4) piscine;
Notă. Eșantioanele de apă clorurată sunt luate în sticle cu un dechlorinator (hiposulfit).
Eșantionarea apei. Din rezervoarele deschise de apă prelevate folosind sticle speciale sau sticle de apă prevăzute cu platine. Apa probă este recomandat să luați la o adâncime de 10-15 cm de la suprafața (deoarece suprafața este expusă condițiilor atmosferice) și la o distanță de 1,5 m de la mal (apă în apropierea țărmului pot fi contaminate microflorei din sol).
Pentru prelevarea probelor de apă de la robinet utilizați sticle sterile cu o capacitate de 500 ml, închise cu dopuri din bumbac și acoperite cu capace de hârtie.
Macara este arsă preliminar cu un tampon umezit cu alcool, după care apa este eliberată timp de 10-15 minute și este colectată în flacoane. Flacoanele umplute sunt închise cu dopuri sterile.
Notă. Se examinează 333 ml de apă (Tabelul 54).
Tabelul 54. Tabelul empiric al GOST 16963-73
În rețeaua de distribuție a apei, se efectuează eșantionarea apei în funcție de numărul de persoane care locuiesc în zona de servicii.
Metodele standard de investigare sunt reglementate pentru apa de alimentare cu apă centrală (GOST 18963-73) și prevăd:
1. Determinarea numărului total de microorganisme (în 1 ml de apă examinată, nu trebuie să existe mai mult de 100).
2. Determinarea indexului coli și a colitei (indicele colibului 3, colita 333 și mai mare, pentru Moscova și Leningrad, indicele coli nu este mai mare de 2 și numărul este mai mare de 500).
3. Cercetarea privind indicațiile epidemiologice pentru microflora patogenă (microorganismele patogene nu trebuie detectate).
Determinarea numărului total de bacterii
Conform GOST 18963-73 numărul total de bacterii - este numărul de microorganisme conținute în 1 ml de lichid de testat peste noapte capabil la o temperatură de 37 ° C pentru a forma colonii vizibile cu ochiul liber (sau în creștere cu o lupă).
Prima zi a studiului
La examinarea apei de la robinet, 2 cani sunt inoculate. Unul dintre acestea este introdus cu 1 ml de apă nediluată, în cealaltă 1 ml de apă diluată de 10 ori (adică 0,1 ml din proba inițială).
În studiul apei mai poluate se inoculează 1 ml de apă diluată de 100 de ori. Aceasta corespunde la 0,01 și 1 ml .vody diluat de 1000 de ori (0,001 ml) și t. D. Pentru a obține aceste volume de zece ori serii de diluție preparate și 1 ml din fiecare diluție a fost introdus într-un pahar și se toarnă un strat subțire (12-15 ml ) topit și răcit la agar nutritiv de 45 ° C. Pentru o distribuție uniformă a apei studiate, plăcile de agar sunt amestecate prin rotirea acestora. După solidificare agar Culturi pus într-un termostat și se incubează la 37 ° C timp de 24 ore.
A doua zi a studiului
Cupele cu culturi sunt scoase din termostat și numărul de colonii crescute este calculat. Luați în considerare numai acele cupe, unde numărul de colonii se situează între 30 și 300. Dacă coloniile sunt mici, ele sunt numărate cu ochiul liber sau cu ajutorul unei lupă.
Dacă există mai multe colonii, numărarea poate fi făcută folosind un dispozitiv special pentru numărarea coloniilor microbiene (Figura 54).
Fig. 54. Dispozitiv pentru numărarea coloniilor de microorganisme. 1 - masă pentru feluri de mâncare Petri; 2 - acul cu dispozitiv de arc; 3 - indicatorul contorului; 4 - comutator pentru comutarea comutatorului de impulsuri; 5 - Comutatorul de comutare pentru iluminarea contorului
Numărul de colonii numărate se înmulțește prin diluare, iar numărul de microbi în 1 ml de apă se determină.
Definiția CGB
Prezența CGB (bacterii din grupul Escherichia coli) este un indicator al contaminării fecale, a cărui intensitate se caracterizează prin:
Indicele coli - numărul de E. coli detectat în 1 litru de apă.
Coli-titrul este cea mai mică cantitate de apă în care este detectată prezența E. coli *.
* (Titrul de coli și indicele coli reprezintă un indicator, exprimat diferit.)
Pentru a detecta CGB în apă, pot fi utilizate două metode: titrare (fermentație) și filtre cu membrană.
Pentru studiul apei se folosește mediul de acumulare glucoză-peptonă (GLA) folosind mediul Eikman cu un indicator și cu tuburi de fermentație. Mediul este preparat prin concentrarea (de 10 ori) și concentrația normală - pentru însămânțarea a 1 ml de apă.
Prima zi a studiului
apă Investigat inoculat cu 100 ml de 3 flacoane la 10 ml pe 3 tuburi (cu mediu concentrat,) și 1 ml de 3 flacoane (cu concentrație medie normală) - total 333 ml. Culturile sunt incubate într-un incubator la 37 ° C timp de 24 ore.
A doua zi a studiului
Scoateți culturile de la termostat și căutați prin ele.
Dacă există turbiditate în baloane sau tuburi de testare, se face o bucla pe sectoarele medii Endo în vase Petri. Culturile sunt incubate într-un termostat la 37 ° C.
A treia zi a studiului
Scoateți paharul de la termostat. Din coloniile suspecte fac frotiuri. Dacă există tije gram-negative, puneți testul pentru activitatea oxidază. Un test pozitiv pentru oxidază dă dreptul de a da un răspuns negativ.
Proba pentru oxidază. Prima metodă: din mediul Endomo, 2-3 bucle de fiecare tip sunt îndepărtate printr-o buclă și aplicate pe suprafața hârtiei de filtru umezită cu dimetilparafenilendiamină. O reacție pozitivă este caracterizată de dungi albastre din colonii.
A doua metodă: reactivul poate fi aplicat unei colonii izolate pe mediul endo (colonia roșie devine albastră) (Figura 55).
Fig. 55. Determinarea indicelui coliform al apei prin metoda de titrare
Un test negativ pentru oxidază indică prezența CGB în apă. În acest caz, calculați indicele coli și colitetr utilizând tabele standard (empirice) din GOST 16963-73 (a se vedea tabelul 54).
Aceste tabele oferă o combinație posibilă a cantităților de însămânțare din care este izolat E. coli.
Metoda de filtrare cu membrană
Pentru a filtra apa, puteți utiliza o pâlnie Goldman cu o capacitate de 700-800 ml.
Prima zi a studiului
Se toarnă un volum măsurat de apă testat în pâlnia filtrului Seitz montat și sterilizat. Cu ajutorul pompei, în recipientul de recepție este creat un vid (de obicei, apa este filtrată prin filtrele nr. 2 și 3). La terminarea filtrării sau forceps steril ars în filtrul de foc îndepărtat și aplicat în mediul Endo în vasul Petri, astfel încât suprafața cu microbi au stabilit pe acesta cu fața în sus (la o cana poate fi plasat filtru cu membrană 3-4).
Culturile sunt incubate într-un termostat la 37 ° C timp de 18-24 ore.
A doua zi a studiului
Cupele cu culturi (filtre) sunt scoase din termostat. Absența unor colonii suspecte dă dreptul de a da un răspuns negativ.
Toate coloniile roșii și roz cu sau fără luciu metalic sunt supuse contabilității. Din coloniile crescute fac frotiuri, colorate de Gram (Figura 56).
Fig. 56. Determinarea indicelui coliform al apei prin metoda filtrelor membranare
În prezența tijelor gram-negative, puneți un test pentru oxidază. Un test pozitiv de oxidază dă dreptul de a da un răspuns negativ. Când proba oxidaza negativ inoculate pe mediu semisolid cu glucoză și un indicator asupra CFP sau mediul fermentativ cu tuburi - pentru detectarea fermentarea carbohidraților la acid și gaz. În prezența acidului și a gazului, se calculează indicele coli. De exemplu, toate filtrele sunt pe mediu Endo, colonia a crescut de 3, a trecut prin filtru a fost de 300 ml apă.
Notă. Metoda de titrare este mai precisă și poate fi utilizată în prezența impurităților în apă. Metoda filtrelor cu membrană este mai economică și oferă posibilitatea de a da un răspuns în a doua zi.
Identificarea contaminării proaspete cu fecale
Pentru a determina prezența în apă a E. coli proaspăt de fecale, apa este însămânțată (3 volume) în mediu lactoză-peptonă cu acid boric. Incubați la 43 ° C timp de 24 de ore. Prezența acidului și gazului indică o contaminare proaspătă a fecalelor.
Conform indicațiilor epidemiologice din apă, se determină salmonella, shigella, enterovirusuri.
Notă. Enterococci este un indicator suplimentar acceptat de contaminare fecală a apei potabile. La efectuarea unui studiu bacteriologic, toate grupurile de enterococci sunt determinate, deși valoarea sanitară este în principal de streptococi fecali, a căror detectare este un indicator al contaminării proaspete cu fecale.
1. Care este sarcina principală a microbiologiei sanitare?
2. Ce este un microorganism indicator de sănătate?
3. Care este indicele coli și colita?
4. De unde știi metodele de determinare a CGB-ului?
Determinați numărul total de microbi din proba de apă de testare. Miercuri de GPS (Eikman).
GPS (Eikman) este concentrat. În 1 litru de apă, se dizolvă 100 g peptonă, 50 g clorură de sodiu. Amestecul a fost încălzit la reflux, filtrat, a adăugat la 100 g de glucoză, ajustat la pH 7,4-7,6 și se toarnă în 10 ml flacoane cu 250 ml de 1 ml în 3 tuburi (mediu concentrat) și 1 ml de 3 eprubete ce conțin mediu de concentrație normală (în toate recipientele mediul este ajustat la concentrația necesară cu apă sterilă).
Notă. Când se studiază în special apele poluate, se realizează diluții mari (de exemplu, 10 -6 .10 -7, etc.).
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: