În cazul examinării microscopice a țesuturilor și a organelor, tehnica de luare a materialului este de mare importanță. Respectarea regulilor de luare a materialelor de mai sus va reduce numărul de artefacte și erori în cercetarea histologică.
1. Piesele de organe trebuie tăiate cu un cuțit ascuțit sau cu o ras. Nu este recomandat să folosiți foarfece pentru a evita întinderea țesuturilor. Nu strângeți bucățile, nu-i răniți sau frecati suprafața, în special membranele mucoase și seroase.
2. Piesele sunt tăiate la o grosime de 0,5-1 cm, lungimea și lățimea pot fi diferite (de obicei 1 x 1,5 cm), astfel încât fantele rezultate să se potrivească sub alunecarea standard a capacului. Datorită penetrării lente a fixatorului în adâncimea țesutului, nu se recomandă luarea unor piese mai groase.
3. Piesele sunt imediat plasate într-un lichid de fixare. Este inacceptabil să spălați bucățile cu apă înainte de a le fixa.
Fixarea asigură stabilizarea structurilor de țesut și compactarea acestora. Alegerea mediului de fixare depinde de sarcinile de cercetare (de exemplu, dacă este necesară detectarea glicogenului, obiectele trebuie fixate nu în formalină, ci în etanol). Volumul lichidului de fixare trebuie să depășească volumul pieselor de cel puțin 10 ori. În același timp, asigurați-vă că piesele din soluție nu se lipesc împreună și nu aderă la fundul vasului. Răcirea obiectelor fixate în formalină este nedorită, deoarece în timp ce penetrarea fixativului în țesut încetinește.
Formalinul este cel mai comun și universal lichid de fixare. Formalinul penetrează bine în țesuturi și, prin urmare, poate fi folosit pentru a repara obiecte destul de mari. După fixarea în formalină, obiectele pot fi umplute în parafină, celloidină sau tăiate într-un microtom înghețat. Marele avantaj al formalinei ca fixativ este capacitatea de a stoca bucati in ea pentru o lunga perioada de timp dupa finalizarea fixarii. Dezavantajul formalinei este deteriorarea culorii țesuturilor, cu o fixare prelungită și păstrarea arhivelor umede.
Pentru a fixa țesuturile, se utilizează atât 96% cât și alcoolul etilic absolut, precum și diferitele amestecuri de etanol și formalină. În practică, etanolul trebuie utilizat atunci când se fixează țesutul neural pentru vopsire în conformitate cu Nissl și când se planifică detectarea glicogenului. Cele mai bune rezultate se datorează fixării alcoolului în comparație cu formalinul și în detectarea fierului, a bacteriilor, a amiloidului. În comparație cu formalina, alcoolul are o capacitate mai mică de penetrare, prin urmare piesele pentru fixare nu sunt luate mai groase decât 0,5 cm. Durata fixării este de la câteva ore la 24 de ore.
Lichide de fixare complexe:
În practică, se utilizează lichide de blocare, de obicei, complicate, dar în cercetarea ei preferă adesea formolului și etanol datorită calității superioare de fixare a structurilor individuale de celule și țesuturi, mai puține artefacte de fixare și cea mai bună conservare a proprietăților tinctoriale ale țesuturilor.
Acest fixativ este de obicei utilizat pentru studii imunohistochimice, deoarece protejează bine proteinele asociate cu membranele celulare. Blocul este preparat prin dizolvarea a 50 g de clorură de zinc în 2 litri de apă distilată și adăugarea a 300 ml de soluție de formaldehidă concentrată și 1,9 ml de acid acetic glacial. Durata fixării nu este mai mare de 24 de ore la temperatura camerei.
Liquid Buena bine capturează toate țesuturile, cu excepția tesutului renal, nu conduce la compresiune și deformare substanțială țesuturilor friabile și, prin urmare, este utilizat frecvent în studiile experimentale și embrional. Blocul este preparat ex tempore dintr-o soluție apoasă saturată de acid picric (1,2%), formaldehidă concentrată (40%) și acid acetic glacial într-un raport de 15: 5: 1. Timpul de fixare este de aproximativ 24 de ore la temperatura camerei.
Acest fluid de fixare păstrează bine structura nucleului celular și este adesea folosit atunci când este necesară fixarea rapidă și cablarea accelerată. Blocul este pregătit cu cel mult o oră înainte de începerea fixării. Fixatorul constă din alcool absolut, cloroform și acid acetic glacial în raporturi: 6: 3: 1. Când se fixează într-un lichid Carnoy, piesele trebuie tăiate la o grosime de cel mult 4 mm. Durata fixării este de 3 - 4 ore.
Decalcificarea țesutului osos
Decalcificarea se efectuează după fixarea completă a țesutului și este necesară spălarea ulterioară a materialului (1-3 ore) în soluții slab alcaline. Fluidul de decalcificare constă din 100 ml acid formic 90%, 80 ml acid clorhidric 38,8% (greutate specifică 1,19) și 820 ml apă distilată sau de la robinet. Volumul lichidului decalcifiant trebuie să depășească în mod semnificativ volumul obiectului decalcificat (cu un factor de 10-20). Piesele mici de os compact (1 - 2 g) sunt decalcificate la o temperatură de 24 ° C timp de 12 până la 24 de ore.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: