Existența și reproducerea virusului în celule recunoscute de așa-numitul efect citopatic: ca rezultat multiplicarea virusului celule mor, iar la microscop schimbări degenerative vizibile în celule. Straturile celulelor infectate se exfoliază de pe peretele tubului de testat sau al flaconului. Pe măsură ce creșterea celulelor se oprește, pH-ul mediului se schimbă puțin în comparație cu cel de control (celule fără virus).
1. Dezvoltarea degenerării specifice a celulelor - arătați sub microscop: formarea de celule gigantice multinucleate, rotunjirea celulelor, focare de proliferare celulară.
2. Detectarea incluziunilor intracelulare - în citoplasmă sau nucleu (colorate și vizualizate sub microscop).
3. Detecția Ar specifică prin metoda imunofluorescenței.
4. Reacție pozitivă de hemadsorbție.
5. Reacție pozitivă de hemaglutinare.
6. Formarea plăcilor - în cultură există zone decolorate, constând din celule moarte - o colonie a virusului. Picat cu vopsea roșie - plăci rotunde, ușoare.
Efectul citopatic, definiția, clasificarea.
Efectul citopatic - degenerarea celulelor, care apare sub acțiunea unui virus care se înmulțește în cultura țesuturilor. efect citopatic microscopica este exprimat în diferite modificări morfologice celulare, formarea de celule multinucleate gigant (symplasts) pycnosis nuclee și, în final, în distrugerea completă a celulelor. Din punct de vedere macroscopic, celulele sunt îndepărtate din pereții tubului de testare. Natura degenerării celulare depinde, în principal, de tipul de virus.
12. Metode de tipare a virușilor:
Determinarea tipului de virus în materialul care conține virusul se bazează pe neutralizarea virusului cu seruri specifice tipului. Rezultatul final al reacției poate fi stabilit pe baza următoarelor caracteristici:
2) neutralizarea reacției de hemadsorbție;
4) întârzierea (inhibarea) hemaglutinării;
5) strălucirea celulelor care conțin virusul, sub influența serurilor fluorescente specifice tipului;
6) neutralizarea în experimentul pe animale.
Esența reacției de gemadsorbție.
Hemadsorbție - adsorbția eritrocitelor pe suprafața celulelor infectate cu virus.
Procedura de reacție. Se introduc 0,2 ml dintr-o suspensie de eritrocite de 0,4% în eprubete de testare pentru culturi de țesut infectate cu virus. Tuburile sunt agitate și lăsate într-o poziție înclinată. Durata contactului dintre eritrocite și celule depinde de temperatura incubării și de tipul de virus. Reacția este luată în considerare printr-o creștere mică a microscopului după o scurtă bătaie a tubului pentru a separa celulele roșii sanguine neadsorbate de suprafața celulei. Cu hemodisorbție virală, celulele roșii din sânge sunt fixate ferm pe celule și depozitate pe acestea după spălarea de 1-2 ori. Adsorbit pe suprafața celulelor infectate cu virus, celulele roșii formează grupuri caracteristice.
Esența metodei de eșantionare a culorilor.
Reacția de culoare. Reacția se bazează pe faptul că, în procesul de reproducere și creștere a celulelor în mediul nutritiv, se acumulează produse metabolice acide care reduc pH-ul mediului. În țesutul infectat cu virusul, apare degenerarea celulelor, astfel încât metabolismul lor este suprimat și pH-ul mediului nu se schimbă. Pentru a detecta aceste modificări, se adaugă un indicator roșu fenolic la mediul de cultură. La pH peste 7, culoarea indicatorului este roșie, la pH 7 - portocaliu și la pH sub 7 - galben.
Dacă celulele nu sunt infectate cu virusul (sau este neutralizat de un anumit ser), pH-ul mediului de cultură se deplasează spre partea acidă și devine galben. În cazul înmulțirii virusului, celulele degenerate și mediul păstrează culoarea roșie originală.
Metoda de eșantionare a culorilor poate fi utilizată pentru titrarea anticorpilor care neutralizează virusul sau virusul.
Esența metodei plăcii.
Metoda se bazează pe apariția în monostrat a celulelor infectate cu virusul de zone decolorate constând din celule degenerate. Aceste locații, numite plăci, sunt colonii ale unui virus format dintr-o singură particulă virală.
Metoda este după cum urmează. Într-un flacon special pe peretele unui monostrat de celule, apoi îndepărtați mediul nutritiv. Celulele sunt infectate cu un virus și se toarnă cu agar care conține un indicator roșu neutru. În cazul în care celulele cresc, mediul se va schimba într-o parte acidă și indicatorul va deveni roz. În zonele în care celulele au murit sub influența virusului, pH-ul mediului și, în consecință, culoarea indicatorului nu se schimbă. Astfel de insule de mediu nevopsit au forma plăcilor albicioase.
Esența reacției de hemaglutinare pentru detectarea virușilor.
Metode de diagnostic microbiologic al infecțiilor virale.
1.Virusoskopichesky - detectarea într-un material de testat, folosind metode de microscopie electronica prin utilizarea virioni sau incluziuni intracelulare microscop optic lumina.
2. Detectarea virușilor utilizând metode de microscopie imunoelectronică.
3. Metode virologice - izolarea culturilor pure de virusuri folosind culturi celulare sau embrioni de pui.
Metode 4.Serologicheskie - detectarea anticorpilor antivirali în ser bolnav sau convalescent utilizând reacții de neutralizare a virusului completa reacția de fixare, hemaglutinare reacția de inhibare a metodei immunosorbent (IPM), o tehnica radioimunotest (RIM), hemaglutinare pasivă (PHA), hemagglutination adeziune imună (AH + aT complex în prezența complementului adsorbite pe eritrocite), reacții de precipitare cu metoda imlunofluorestsentnogo agar. În principiu, aceste reacții pot fi, de asemenea, utilizate pentru a detecta antigeni virali.
5. Metode biologice - infectarea animalelor de laborator sensibile la laborator în scopul reproducerii bolii sau izolarea ulterioară a virusului.
Ce este o metodă de diagnosticare a virozopului.
Materialul din mucoasa nazală, faringelul este emulsionat în ser fiziologic, precipitat, iar tampoanele sunt preparate din sediment.
Smeile după uscare sunt tratate cu seruri luminescente specifice tipului și cu microscopie cu microscop de luminescență. Celule conținând anticorpi luminiscenți specifici de adsorbție a virusului și strălucire corespunzătoare.
Care este metoda virologică de diagnostic?
Infecția embrionilor de pui în cavitatea alantoică sau amniotică. Virusul este detectat printr-o reacție de hemaglutinare, tastată utilizând infecția RTGA a culturii tisulare. În cultura de țesut, virusul este detectat prin efectul citopatic, prin schimbarea culorii mediului și prin reacția de adsorbție gamma; sunt tipizate în funcție de RTGA, neutralizarea CPE și reacția de hemadsorbție. Infecția șoarecilor albi. Virusul este caracterizat printr-o acțiune de neutralizare cu seruri specifice.
Tipuri de infecții virale.
1.Virusuri cu o scurtă ședere a virusului în organism
-acută; -bessimptomnaya; - Infecția cu avort
2. Virușii vor continua să rămână virus în organism
-latent; -Hronicheskie; o încet
Caracteristici și mecanisme ale imunității antivirale.
1. Activitatea limfocitelor T-citotoxice (T-killer) și a altor celule ucigașe
2. Activitatea sistemului de interferon
3. Formarea sistemelor de neutralizare a virusului
Mecanisme de persistență a virușilor în organism.
1. Virusul este într-o stare defectă, nu este în măsură să înmulțească și să inducă efectul unui răspuns imun
2. Virusul este în celulă sub forma unui nucleol genomic liber pentru tine, lipsește acțiunea anticorpilor
3. Genomul virusului este integrat în cromozomul celulei țintă (virogenia)
Trimiteți-le prietenilor: