un cuptor pentru topirea preparatelor,
Contoare de 11 chei, vase.
Fixation. După ce a luat materialul pentru o examinare microscopică, acesta este plasat într-un lichid de fixare. Scopul fixării este de a amâna modificările care apar în țesuturile izolate de un organism viu și de a păstra structurile tisulare și celulare în starea structurii lor intravitale.
Pentru a spăla uniform bucățile de țesut cu un fixer, recipientele sunt agitate cu o perioadă de câteva (1-2) ore. Pentru o impregnare uniformă a materialului cu fixatorul, bucățile de organ sunt luate în dimensiunea 0,5-1 cm.
Deoarece opritorul utilizat 10% soluție de formalină, preparată în soluție salină, astfel ca cauze de apă distilată inundarea și umflarea considerabilă a țesuturilor. Pentru studiile histologice și histochimice, lichidul lui Buen este utilizat ca fixator. În dispozitivul de reținere se poate menține - de la 48 de ore la 30 de zile.
Spălarea și deshidratarea materialului.
Spălarea asigură purificarea inițială a materialului din fixatorul în sine și diferite precipitate care apar în timpul perioadei de fixare. Se clătește în apă de la robinet care circulă timp de 10 până la 20 de minute.
Pentru deshidratare, se utilizează un set de alcooli (alcool etilic) pentru a crește concentrația de la 70 la 100%.
Pentru a obține preparate microscopice bune o mare importanță are deshidratare gradată, cu deshidratarea rapidă a țesutului (în special cele care au o consistență liberă) poate contracta și deforma (Eliseev, 1954; 1959).
Se folosește următoarea procedură pentru deshidratarea cu alcooli:
70% - 2 ore. 80% - 12 ore. 90% - 2 ore. 96% - 1 oră. 100% - 1 oră.
Periodic, seturile de alcooli sunt actualizate, deoarece în timpul lucrului lor, acestea sunt udate și contaminate cu substanțe extrase din material, în special grăsime.
Turnarea materialului în mediu solidificat.
După deshidratare, fragmentele organelor sunt bine înmuiate în hârtie de filtru și plasate într-o soluție de celloidină 1%.
Soluția se prepară prin dizolvarea a 1 g de celloină în 100 ml dintr-un amestec de părți egale de alcool și eter. În această concentrație, coloidul penetrează cu ușurință în interiorul obiectului și îl impregnează complet. În medie, durata materialului în soluția de celloidină este de 6 zile.
În etapa următoare, materialul este purificat din celloidină. Pentru acest organ și probe de țesut au fost spălate de două ore de cloroform, apoi 2 ore într-un termostat la 37 grade snegopodobnoy greutate reprezentând o soluție saturată de ceară de parafină în cloroform. Următorul a avut loc într-un termostat la 56 de grade în parafină pură impregnare timp de 1 oră. apoi probele sunt transferate în parafină pură - timp de 1 oră. După aceea, piesele sunt umplute într-un amestec de 100 g de ceară de parafină și 5 g răcit rapid în apă cu cuburi de gheata pentru a preveni formarea de bule de aer în blocuri de parafină.
Blocurile de parafină rezultate sunt topite pe blocuri de lemn, care sunt necesare pentru fixarea blocurilor atunci când se taie țesuturile pe un microtom.
Pentru a umple materialul, se utilizează parafină albă, care are un punct de topire mai mare de 52-54 ° C. Pentru o mai mare plasticitate a parafinei, se adaugă 5% ceară de albine. Pentru a deplasa gazele din surplusul de ceară topită de mai multe ori pe o placă fierbinte încălzită la o spirală închisă, urmată de răcirea rapidă într-o baie de gheață.
Pregătirea tăieturilor se efectuează pe un microtome sart utilizând cuțite microtoom. Grosimea secțiunilor rezultate este de 1, 2, 3, 4, 5, 6 pm.
Pentru a îndepărta ridurile și panglicile de întindere sau o serie de felii, ele sunt plasate pe o suprafață într-un vas larg (cristalizor) cu apă la o temperatură de 40 ° C. Secțiunile de tăiere se fac cu un ac de pregătire. Apoi, felii tăiate sunt așezate pe un tobogan special pregătit și uscate pe o masă încălzită specială până la 370 de grade. Paharele sunt degresate într-un amestec de alcool eter (1: 1).
Pentru o adeziune mai puternică a secțiunilor de parafină, diapozitivele sunt pre-lubrilate cu un amestec de proteine și glicerină într-un raport de 1: 1. Stratul subțire al amestecului aplicat pe diapozitiv este încălzit peste flacara lămpii cu alcool pentru a îndepărta umiditatea. În viitor, aceste pahare sunt utilizate pentru lipirea secțiunilor preparatului. Paharele sunt impregnate cu menta amestecată cu proteine (1: 1) și calcinate.
Înainte de a picta, secțiunile, bine uscate și lipite de diapozitive, sunt eliberate din parafină. În acest scop, felii sunt plasate timp de 30 de secunde. în xilen I, apoi timp de 30 de secunde. în xilen II. După dizolvarea parafinei, preparatele sunt ținute timp de 1 minut. în 100% alcool, apoi 1 min. în alcool 70%. După alcooli, preparatele sunt spălate cu apă distilată.
Colorarea secțiunilor se face conform metodei lui Mallory (Roskin, 1951).
Secțiunile din apa distilată sunt transferate într-o soluție 0,1% de fuchsină acidă timp de 3 minute. În acest caz, secțiunile devin roz. Următoarea etapă este de 5 minute. într-o soluție 1% de acid fosfomolibdic. Această soluție fixează colorarea cu fuchsină acidă. Secțiunile sunt clătite în apă distilată, apoi timp de 1 min. cufundat într-un amestec de anilină portocaliu albastru G și acid oxalic. (Amestecul Mallory) (Roskin 1951).
După colorare, secțiunile au fost diferențiate în alcool 70% (2-3 sec.) Și alcool 96% (2-3 min.), Held prin xilen și închise în Canada balsamul. Preparatele pregătite, care pot fi stocate pe o perioadă nedeterminată, sunt studiate sub microscop cu mărire de 8 ori. 40 x. 90 x (imersiune).
Secțiunile fixe de țesut sunt microscopice la "Olympus" (Japonia) și "Jenamed" (Germania).
Alegerea măririi când se ia în considerare obiectele depinde de sarcini specifice - de la 40 x la 1000 x.
• pentru gonadele - diametrul ovocitelor mature și imature ovocite diametrul miezului, distanța de la membrana ovocitului la nucleu ca stadiu de maturitate ovocit component (Sakun, Butsko 1963.), Ovocitele formate impropriu condiționarea produselor citoplasmatice masculine stadiu de maturitate sexuală (AF Turdakov 1972), starea pereților ampulelor și a vaselor de sânge;
• ficat - parenchimul si structura tesutului conjunctiv, diametrul nuclee de hepatocite, starea vaselor de sânge, starea citoplasmei hepatocitelor;
• splina - la fel ca și pentru ficat, precum și mărimea pulpei roșu și alb, prezența celulelor sanguine, acumularea pigmenților;
• rinichi - o condiție a epiteliului canaliculelor intortocheate, starea hematopoietic, țesutul conjunctiv, capsula Bowman, acumularea de pigmenți.
Studiile de citometrie sunt realizate folosind un micrometru ocular cu o rată de fisiune determinată individual pentru fiecare microscop
Trimiteți-le prietenilor: