Tematica diagnosticului microbiologic al dizenteriei bacteriene

SUBIECT: DIAGNOSTICUL MICROBIOLOGIC AL DYSENTERIEI BACTERIALE.

Scop. pentru a studia structura etiologică a dizenteriei bacteriene, proprietățile biologice ale agenților patogeni. Să studieze principiile de bază ale diagnosticului și să poată identifica cultura identificată.






Dysenteria bacteriană este o boală poliometologică antroponotică care este cauzată de mai multe specii de shigella și cu o leziune predominantă a intestinului gros. Proprietățile generale ale tuturor shigella sunt absența flagelui, activitate enzimatică mai mică decât alte enterobacterii și prezența numai a antigenului O.

Conform activității biochimice și structurii antigenice, toate shigella sunt împărțite în 4 grupe: A, B, C, D. Fiecare grup include serovari diferiți din aceeași specie.

Clasificarea interna a shigellaselor


A - Shigella dysenteriae


B - Shigella flexneri


C - Shigella boydii


D - Shigella sonnei

Virulența lui Shigella este determinată de prezența factorilor de adeziune și de colonizare, prin care Shigella pătrunde în epiteliul colonului și se înmulțește în el. Ulterior, apare hipersensibilitate de tip întârziat (HRT) sau alergie infecțioasă, care conduce la apariția colitei ulcerative.

Toxicitatea la tobi este asociată cu formarea de endotoxine (LPS) și exotoxine de 2 tipuri: enterotoxină și citotoxină. Citotoxina produce Shigella dysenteriae (Grigorieva-Shiga).

O caracteristică a epidemiologiei dizenteriei este dispariția Shigella dysenteriae în anii 1940 și apoi revenirea ei în anii 1960 și 1980.

Diagnosticul de laborator al dizenteriei bacteriene se realizează prin trei metode principale: bacteriologic, serologic și alergic. Principala metodă de diagnosticare este tratamentul bacteriologic al excrementelor pe medii nutritive selective și diferențiate (mediul de îmbogățire a selenitelor, mediile lui Ploskirev, Endo și Levin). Trebuie remarcat faptul că excreția tulpinilor de shigella dependente de antibiotice crește atunci când semăna fecalele pe medii care conțin levomicină și tetraciclină (25 μg / l).

În scopul serodiagnosticului, se pune reacția de hemaglutinare indirectă (RNGA).

Allergodiagnostika - a pus un studiu intradermic cu dizenterin din a 3-a până la a 5-a zi a bolii (testul Tsukverkalov).
Activitatea independentă a studenților

  1. Pentru a dezasambla și schița în notebook o schemă de diagnostic microbiologic de dizenterie bacteriană.

  2. Semănuiți excrementele pacientului cu suspiciune de dizenterie bacteriană în mediul de diagnostic diferențial al Ploskirev sau Endo.

  3. Pentru a studia natura creșterii pe mediul Ploskirev (studiul proprietăților culturale).

  4. O parte din S în formă de colonii incolore (colonii de L- defect), miercuri, Ploskireva pregătesc frotiu, pata Gram și promikroskopirovat (studiul proprietăților morfologice și tinctoriale).

  5. Staționarea unei reacții de aglutinare aproximativă pe sticlă cu un amestec de ser de dizenterie (Flexner, Sonne) și ser monoreceptor.

  6. Pentru a izola cultura pură, restul coloniei cu deficit de lactoză (colonii Ld) este transplantat în mediul lui Russell.

  7. Studiu microscopic al purității culturii izolate.

  8. Studiul proprietăților enzimatice ale culturii izolate, care a fost reaplicat la mediul de diagnostic diferențial al lui Giss.

  9. Determinarea sensibilității culturii izolate la antibiotice prin metoda difuziei discului (metoda discului de hârtie) și a fagolizei.

Schema 3. Examenul microbiologic pentru dizenterie

Reacția de aglutinare (în funcție de tipul reacției lui Vidal) cu diagnosticul de dizenterie, RPG cu

Semănarea pe medii diferențiale (Ploskireva et al.)

Natura și culoarea coloniilor

Smear, gram de Gram

Reacția de aglutinare pe sticlă cu un amestec de seruri de dizenterie

colonii pe mediul lui Russell sau într-un mediu cu trei saccharate

Smear, gram de Gram

Semănând pe seria "motley"

Reacția de aglutinare pe sticlă cu un amestec de seruri dententare, apoi cu specific și tipic

Direcții de lucru independente

Ziua 1: Scaunele pacientului este inoculată pe diagnostic diferențial media Ploskireva sau Endo. În prezența fecale test sau noduli însângerate muco-purulente sunt selectate bucla bacteriologic, se spală într-o soluție izotonică de clorură de sodiu și se aplică pe suprafața mediului sau Ploskireva Endo apoi se triturează cu o spatulă. Culturile sunt incubate într-un termostat la t - 37 ° C timp de 24 de ore.

Ziua 2: a) Coloniile transparente, incolore sunt transplantate în mediul lui Russell pentru a izola cultura pură;

b) restul de colonii izolate sunt utilizate pentru stabilirea reacției de aglutinare orientare pe sticlă cu un amestec de seruri dizenterie și seruri cu un amestec de anti-Salmonella (febra tifoidă, pentru a evita și Salmonella).

Ziua 3: a) după 24 de ore pe mediul lui Russell - coloana de agar devine albastră.

b) cultura izolată este transferată în mediul de diagnostic diferențial Giss sau MTS-5U;

c) determinarea sensibilității culturii izolate la antibiotice prin metoda difuziunii discului și a susceptibilității fagului.

Ziua 4: Concluzia finală privind rezultatele determinării proprietăților biochimice, sensibilitatea la antibiotice și fagoliză.

Notă: scaunul se duce direct din patul pacientului din cauza instabilității shigella în mediul extern.

Întrebări pentru auto-control:

  1. Dați clasificarea internațională actuală a lui Shigellas.

  2. Ce proprietăți sunt baza pentru clasificarea shigellaselor?

  3. Cât de diferite tipuri de bacterii dysenterice diferă în proprietățile lor biochimice?

  4. Ce tip de tija de dizenterie produce exotoxina?

  5. Listează principalele metode de diagnostic microbiologic de dizenterie bacteriană.

  6. Ceea ce determină cel mai adesea shigella cauza dizenteriei bacteriene în prezent.

  7. Cum și ce material este folosit pentru cercetare pentru a izola cultura pură și care sunt mediile nutritive pe care le semănați?

  8. Preparate pentru prevenirea și tratamentul specific al dizenteriei bacteriene.

Lecția 6
SUBIECT: DIAGNOSTICUL MICROBIOLOGIC AL COLERII.

Scop: studierea metodelor de diagnostic microbiologic al holerei. Să se familiarizeze cu metodele de prevenire și terapie specifică a holerei.
Holera este o boală infecțioasă carantină acută, antroponă, deosebit de periculoasă, caracterizată prin simptome clinice de gastroenterită cu deshidratare severă și intoxicație severă.







Specia Vibrio cholerae are 4 biovari: cholerae, eltor, proteus (Mechnikov vibrio), albensis (vibrio strălucitor). Cholera este cauzată de 2 biovari: cholerae și eltor. Cholera vibrio monotrich, foarte mobilă, solicitantă pentru PH, crescând pe medii alcaline, are o activitate biochimică ridicată. În ceea ce privește cele trei carbohidrați - zaharoză, manoză și arabinoză, toate vibrioanele sunt împărțite în 8 grupe (conform lui Heyberg). Boletele cholerae și eltor aparțin grupului I de Hayberg: ele se descompun în zaharoză și gaz fără zaharoză și manoză și nu împarte arabinoza.

Virulența holerei vibrio este cauzată de două toxine: endotoxină și exotoxine. Rolul principal în patogeneza bolii este exotoxina-colerogenul. Aceasta provoacă un efect citotoxic - pierderea fluidelor corporale și a sărurilor de sodiu, potasiu, care este cauza principală a dezvoltării algidei și a decesului pacientului.

Diagnosticul holerei se efectuează prin metoda bacteriologică. Materialele pentru cercetare includ mișcări intestinale, vărsături, alimente, cadavre etc.

Medii nutritive pentru cultivarea holerei vibrio: apă peptonă alcalină 1%, agar alcalin, mediu TCB.


Activitatea independentă a studenților.

  1. Eliminați în notebook un diagnostic microbiologic de holeră.

  2. Într-un prim pas în studierea frotiului materialului testat colorate prin metoda Gram și „strivite“ și „agățat“ picătură, și apoi inoculat cu 1% apă peptonată alcalină și mediu nutritiv solid.

  3. Pentru acumularea de material, cultura este transferată în apă peptonă nouă și încă o dată în medii lamelare. Alocați o cultură pură.

  4. Cultura izolată este identificată prin proprietățile morfologice și tintoriale (microscopia frotiurilor colorate de Gram), proprietățile culturale, biochimice și antigenice.

  5. Vivrio cholerae sunt determinate în reacția de aglutinare pe sticlă cu seruri aglutinante Inaba, Ogawa, Gikoshima.

  6. Proprietățile biochimice sunt determinate de carbohidrați: zaharoză, manoză, arabinoză.

  7. Studiul medicamentelor pentru prevenirea și tratamentul holerei.

  8. Înregistrarea raportului de cercetare.

Schema 4. Examinarea microbiologică în holeră

Emacinări, vărsături, bilă, material pathoanatomic, apă, etc.

Astfel, identificarea culturilor se realizează în 3 etape: 1) stabilirea apartenenței lor la genul Vibrio; 2) să le diferențieze de vibrații de tip holeră în RA cu ser de O, sensibilitate la un anumit fag și alte teste; 3) determinarea proprietăților specifice ale culturilor.

Răspunsul final privind izolarea și identificarea culturii izolate este dat după 36-48 de ore.

III. Express - metode de diagnostic.

  1. Imobilizarea vibrelor de holeră cu seruri anti-holeră.

Metodologie: atunci când sunt plasate V. cholerae în seruri imune (conținând anticorpi împotriva V.cholerae), pierde mobilitatea (determinată în „agățat“ drop „strivita“).

  1. RIF (reacție de imunofluorescență).

Procedură: Preparatele din materialul testat sunt tratate cu ser anti-cholera fluorescentă și examinate într-un microscop fluorescent.

Un rezultat pozitiv îl reprezintă detectarea în pregătirea unor vibrații simple, cu o strălucire strălucitoare galben-verde, sub forma unei jante strălucitoare de-a lungul periferiei celulei.



  1. ADN - diagnostic - utilizarea metodei moleculare genetice - PCR - reacția în lanț a polimerazei.

IV. Metode serologice

Acestea sunt o metodă auxiliară și sunt utilizate pentru diagnosticarea retrospectivă a holerei, precum și pentru detectarea vibrio-purtătorilor și evaluarea intensității imunității post-infecție și post-vaccinare. Serodiagnosticul se efectuează prin stabilirea RA sau RNGA (reacție hemaglutinantă indirectă) cu diagnosticul de eritrocite.

Reacția este stabilită pe panouri de plexiglas, în bucățile cărora se obțin diluții ale serului studiat, la care se adaugă 0,5 ml dintr-o suspensie 3% de diagnostic eritrocitar.

Rezultatul pozitiv - celulele roșii sanguine precipită sub formă de umbrelă.

Rezultat negativ - eritrocitele precipită sub forma unui "buton".
Tabelul 11

Medicamente pentru prevenirea și tratamentul holerei


Întrebări pentru auto-control:

  1. Specificați o taxonomie (familie, gen, specie) a agenților cauzali ai holerei.

  2. Care sunt proprietățile morfologice, tinctoriale și culturale ale holerei vibrio?

  3. Proprietățile biochimice ale holerei vibrio. Care este "triada Hayaberg"?

  4. Care este divizarea lui V.cholerae pe bază de serovare?

  5. Teste de biora V.cholerae.

  6. Care sunt toxinele care formează holera vibrio?

  7. Surse și modalități de infectare cu holeră.

  8. Ce reguli trebuie urmate la luarea, transmiterea și examinarea materialului în caz de suspiciune de holeră?

  9. Este posibil să se efectueze cercetări privind holera în laboratoarele convenționale. Dacă nu, de ce?

  10. Diferențe de holeră vibrio de la vibrioții de tip holeră.

  11. Denumiți medicamentele utilizate pentru prevenirea și tratamentul specific al holerei.


Lecția 7
SESIUNEA FINALĂ PE SECȚIUNEA: "DIAGNOSTICUL MICROBIOLOGIC AL INFECȚIILOR INTESTINALE"

Scop: să controleze cunoștințele studenților la nivel de 1-2 teste dezvoltate la departament.

Lecția 8
Subiect: DIAGNOSTICUL MICROBIOLOGIC AL INFECȚIEI STAFILOCOCCALE. CERCETAREA BACTERIOLOGICĂ A ANIMALELOR (1 ZI DE STUDIU)

Scop: 1. Studierea metodelor de diagnostic microbiologic al infecțiilor stafilococice.

2. Să se familiarizeze cu metodele de prevenire și terapie specifică a infecțiilor cu stafilococi.


Printre numeroasele bacterii globulare răspândite în natură, doar câteva sunt patogene pentru oameni. Procesele inflamatorii cauzate de aceste microorganisme sunt de obicei însoțite de formarea de puroi, ca urmare a faptului că sunt denumite cocci pyogenici sau pyogenici.

Stafilococi (Staphylococcus) - coci rotundă, este situată în cultura sub forma unor grămezi asemănătoare cu ciorchini de struguri și materialului patologic - sub forma unor grupuri mici de coci câteva; Sunt imobile, nu au spori, nu formează capsule, sunt gram-pozitive.

Dintre bacteriile care nu formează spori, stafilococii sunt cei mai rezistenți la diferiți factori fizici și chimici. Acestea sunt anaerobe facultative, dar se dezvoltă mai bine în condiții aerobe. Ei au activitate chimică semnificativă, descompun un număr de carbohidrați, gelatină diluată. Capacitatea de fermentare a glucozei și a manitolului în condiții anaerobe este de importanță diagnostică. Pe suprafața solidă mediu nutritiv formă circulară, convexă, pigmentat (auriu, galben pal, lamaie galben, alb) colonii cu margini netede; în mediu lichid dau o turbiditate uniformă. Laboratoarele folosesc capacitatea stafilococilor de a reproduce pe mediu o cantitate mare (6-10%) de clorură de sodiu. Pe aceste medii, alte bacterii nu cresc, ca urmare a faptului că mediile saline sunt elective pentru stafilococi. Genul Staphylococcus cuprinde 19 specii, dintre care numai trei asociate cu mediul cu corpul uman: S-aureus - Staphylococcus aureus, S. epidermidis - Staphylococcus epidermidis și S. saprophyticus - Staphylococcus saprophyticus. Boala caracterizata printr-o varietate de manifestări clinice, cauza de aur, epidermică mai puțin, și chiar mai rar stafilococi saprofite.

Toxinele și enzimele stafilococilor exercită un efect dăunător asupra celulelor și țesuturilor corpului uman.

Staphylococcus aureus poate excreta o serie de toxine, în special leucocidina, care are un efect dăunător asupra leucocitelor. Hemolizinele au un efect de lizaj pe eritrocite.

Apariția otrăvirii alimentare a naturii stafilococice este asociată cu acțiunea enterotoxinelor. produsă de stafilococi de aur. În patogeneza infecțiilor stafilococice, un rol important îl joacă exoenzimele:

- Plasmocoagulaza efectuează coagularea plasmei;

- Hialuronidaza promovează răspândirea stafilococilor în țesuturi;

- lecitinaza distruge lecitina, care face parte din membranele celulare, cauzeaza leucopenie;

- fibrinolizina dizolvă fibrina, care limitează focalizarea inflamatorie locală, care promovează generalizarea procesului patologic.

Stafilococii sunt distribuite pe scară largă în mediu - aer. praf și altele asemenea. d. La om, ele sunt întotdeauna pe piele, precum și comunicarea cu degajările exterioare (orale și nazale), ca locuitori inofensivi. În cazul oricăror tulburări generale din organism sau deteriorarea pielii și a membranelor mucoase ale stafilococului poate afecta orice organ și orice țesut.


Muncă independentă

  1. Realizați textul direcției de puroi în laboratorul bacteriologic.

  2. Pentru a elabora o schemă de investigare microbiologică a secreției purulente, sânge.

  3. Prima zi de cercetare a puroi pentru bolile purulent-inflamatorii:

a) pregătește o frotiu, pată Gram, microscopie;

b) să pui puroi în mediu HHS sau agar sanguin prin metoda accident vascular cerebral;

c) UIRS "Definirea transportului stafilococ în studenți". Ia materialul din membrana mucoasă a nasului și gâtului unul de altul cu un tampon de vată sterilă și produc culturi pe un vas Petri cu un VSA sau plăci agar cu sânge.

d) înregistrați în raportul de studiu (ziua 1)


Schema 5. Examinarea microbiologică a stafilococului


sânge în sepsis

puroi, exsudat, spută, mucus din faringe, nas, etc.

Smear, colorat la însămânțare

Gram pe HHS pe agar de sânge într-un bulion de zahăr

Etapa 1 a răspunsului
Caracter și hemoliză







Articole similare

Trimiteți-le prietenilor: