Obiectul examenului histologic patologic este secțiunea. Secțiunile pot fi făcute cu o grosime de 1-2 microni. Cele mai frecvente sunt felii de 6-12 microni grosime.
Aparatele pe care sunt făcute felii se numesc microtomuri (micile grecești - mici și "întunecate" - tăiate).
Cele mai frecvent utilizate microtomuri sunt:
1. Microtomele de congelare:
a) sistem cilindric, sistemul Sartorius;
b) microtom TOS-1c cu masa de răcire termoelectrică.
2. Microtome pentru sanie (sanie).
4. Ultramicrotomes de diferite branduri.
Părțile de bază ale fiecărui microtome sunt cinci: 1) pat; 2) suportul cuțitului; 3) etapa; 4) instalația micrometrică; 5) cuțit microtome.
Baza este o bază solidă solidă a aparatului.
Suportul cuțitului este prevăzut cu o instalație care permite ajustarea înclinării cuțitului.
Scena servește la fixarea obiectului.
Unitatea micrometrică servește la alimentarea automată a obiectului cuțitul pentru a obține felii cu grosimea necesară. Componenta principală a acestuia este un șurub micrometric, adică șurub cu un fir foarte subțire.
Cuțitele microtomului vin în trei clase:
A) un cuțit realizat din oțelul foarte moale folosit pentru tăierea blocurilor de parafină;
B) un cuțit din oțel dur - pentru tăierea parafinei și blocurilor de celloidină;
C) un cuțit realizat din cel mai dur oțel, folosit pentru a obține felii congelate, are un profil triunghi isoscel.
Calitatea oțelului este indicată pe cuțit.
Lucrați pe microtomele de congelare
Pe microtomele de îngheț, felii sunt făcute din obiecte care sunt suficient de compacte.
Avantajele tehnicii de microtomizare la îngheț:
1) nu este nevoie să umpleți;
2) viteza și simplitatea realizării tăieturilor.
Dezavantaje ale tehnicii de congelare:
1) imposibilitatea obținerii secțiunilor seriale;
2) imposibilitatea obținerii de secțiuni subțiri (grosime minimă 10 μm);
3) obiectele mici și libere nu pot fi tăiate.
Se taie pe microtomul de congelare
1. Coborâți scena când mânerul microtomei este aproape.
2. Puneți o bucată de material pe masă.
3. Înmuiați o bucată de apă cu apă.
4. Puneți cuțitul "C" în mufa mânerului microtomei.
5. Ridicați masa până când piesa intră în contact cu lama cuțitului.
6. Setați dispozitivul de reglare a grosimii felii.
7. Deschideți robinetul balonului.
8. Înghețați o piesă până când apare un sunet sonor atunci când o atingeți.
9. Aliniați suprafața piesei.
10. Obțineți felii și le transferați într-o ceașcă de apă.
11. La sfârșitul tăierii, închideți robinetul balconului.
12. Scoateți cuțitul, evacuați-l și puneți-l în locul de depozitare.
13. Scoateți piesa din scenă.
14. Ștergeți partea microtomei uscate.
Lucrați pe microtomul sart
Un microtome se numește o sanie, deoarece părți din ea se deplasează în caneluri speciale și alunecă ca o sanie.
Prin schimbarea tabelelor corespunzătoare, microtomul poate fi adaptat pentru tăierea oricăror blocuri și, prin urmare, este numit microtome universale.
Blocul tratat este scos din etanol 70% și întărit ferm în suportul pentru obiecte al microtomului. Se folosesc cuțite de tip "A" și "B". Unghiul cuțitului este ascuțit și reglabil în funcție de densitatea blocului: cu cât obiectul este mai moale, cu atât este mai înclinat unghiul de înclinare. Cuțitul și obiectul sunt umezite în mod regulat cu etanol 70% (o perie moale). Dacă este necesar, tăiați felii de pe lamă cu o atingere ușoară a unei perii sau a degetului. Secțiunile expandate sunt transferate într-un vas Petri umplut cu etanol 70%. În unele cazuri, pentru o bună răspândire, felii pot fi transferate din etanol 70% în apă distilată, unde ele sunt nivelate datorită unei schimbări bruște a tensiunii de suprafață.
O caracteristică specială a microtomei este poziția staționară a aparatului de ras și mișcarea obiectului la aparatul de ras la fiecare tăietură, ceea ce asigură producerea de felii de serie.
Pentru a tăia blocurile de parafină utilizați cuțitele marca "A" sau "B". Blocurile, lipite pe cuburi, sunt fixate în suportul pentru obiecte. Selectați unghiurile de tăiere și înclinarea cuțitului. Cuțitul este întărit sau perpendicular pe lungimea microtomului sau oblic. Reglați blocul la cuțit astfel încât să fie o distanță de 0,5-1 mm între ele. Scalpelul taie excesul de parafină, iar cuțitul microtomei - straturile superficiale ale materialului. Mișcările cuțitului microtome trebuie să fie netede și rapide.
Dacă materialul este turnat bine, unghiurile de tăiere și înclinare ale lamei sunt ascuțite, tăieturile sunt așezate pe suprafața cuțitului sub forma unei benzi.
Dacă blocul este tăiat incorect, felii au contururi unghiulare, dacă există jgheaburi în cuțitul pe care îl rup. Feliile obținute cu un aparat de ras este îndepărtat cu o perie moale sau cu un ac de disecție (fără a atinge lama!) Și se transferă într-o apă caldă (40 ° C) este fiert, partea care se confruntă cu lama. In apa ei îndreptați, apoi degresat de sticlă acoperită cu un adeziv (lipire tehnica cm. Mai jos) la un capăt este cufundat într-o cană de apă, acesta disecarea ac hrănite felie și treptat scos din apă. Se poate lua o sticlă de diapozitive ia o tăietură la 45 °, marginea tăiată presat de sticlă și apoi, împreună cu reducerea scos din apă. Glisierele din sticlă cu tăieturi întinse pe ele sunt uscate cu o hârtie de filtru netedă (figura 9, 10).
Secțiunile congelate și celloidină sunt incolore fără tratament prealabil.
Secțiunile de parafină sunt lipite pe un diapozitiv și sunt deparafinate.
Cea mai obișnuită metodă de lipire a secțiunilor de parafină este așa-numita metodă "japoneză" cu ajutorul ouălor de ou.
Reteta pentru lipici pentru taierea felii
Proteină din ou - 2 h. Glicerină - 1 h. Camfor (timol) - 1 cristalin (agent antipark).
1. Degresarea diapozitivelor se efectuează prin tratarea suprafeței: alcool-eter sau săpun.
2. Aplicați o picătură de adeziv, frecați-l cu degetul pe suprafața diapozitivului până când se simte uscat.
3. Coagulați proteina pe flacăra arzătorului.
4. Tăierea din apă este prinsă pe sticlă sau tăierea uscată este așezată pe un tobogan și câteva picături de apă caldă sunt turnate în ea sub o pipetă. Aceasta elimină faldurile tăieturii.
5. Uscați tăierea de sticlă la temperatura camerei sau într-un termostat.
Secțiunile inserate pot fi stocate pe o perioadă nedeterminată.
Deparafinarea este îndepărtarea parafinei din felia lipită.
Deparafinarea se face imediat înainte de vopsire.
1. Sticla cu o tăietură este coborâtă în solventul de parafină (xilen, toluen, benzen) până când marginile de parafină sunt îndepărtate în jurul tăieturii.
2. Îndepărtați solventul de parafină prin imersarea geamului cu o tăietură în alcool-rectificat sau alcool absolut.
3. Clătiți sticla în apă.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: