5.17. Electroforeza pe hârtie vă permite să separați aminoacizii în funcție de încărcătura lor electrică
Cea mai simplă metodă de separare a aminoacizilor este electroforeza pe hârtie (Figura 5-13). O picătură de soluție apoasă care conține un amestec de aminoacizi se aplică pe o bandă de hârtie de filtru umezită cu un tampon de acest pH. Mai mult, la această bandă se aplică o tensiune ridicată, creând un câmp electric puternic. Datorită diferențelor în valori, aminoacizii se deplasează de-a lungul benzii în această direcție sau în acea direcție și la rate diferite, în funcție de pH-ul sistemului tampon și de tensiunea aplicată.
Fig. 5-13. Separarea aminoacizilor prin electroforeză pe hârtie. În banda de hârtie se aplică o picătură care conține o soluție de amestec de acid amino. Se lasă să se usuce, după care banda de hârtie este umectat cu un tampon cu o valoare a pH-ului dat și interferează între plăcile de răcire. Capetele benzilor sunt scufundate într-o celulă cu electrozi, și includ o tensiune înaltă. In aceasta apare atunci când o constantă de aminoacizi de câmp electric sunt separate în funcție de sarcina lor electrică totală la pH-ul selectat. Aminoacizii care, atunci când această valoare a pH-ului sunt cationi migrează spre catod (polul negativ) și aminoacizi având anioni de formă se miște spre anod (polul pozitiv), așa cum se arată în schema care arată electroforetograma în timp. La finalul procesului (în schema în timp), hârtia se usucă, se pulverizează cu ninhidrină și căldură, rezultând în hârtie care prezintă pete corespunzătoare localizarea diverși aminoacizi, care pot fi identificate prin compararea pozițiilor lor cu poziția aminoacizilor autentici utilizați ca „martori“.
De exemplu, la pH 1,0 histidină, arginină și lizină, transporta o sarcină + 2 și a trece la catod încărcat negativ mai repede decât ceilalți aminoacizi, taxa este egală cu + 1. Pe de altă parte, la un pH de 6,0 aminoacizi încărcați pozitiv (lizină, arginină și histidină ) se deplasează spre catod și încărcat negativ (aspartic și acid glutamic) - la anod. Toți ceilalți aminoacizi sau rămân la locul de aplicare, sau muta numai pe distanțe scurte, deoarece, în plus față de gruparea a-amino și o grupare carboxil nu au alte grupări ionizabile; astfel încât punctul izoelectric al tuturor acestor aminoacizi sunt practic imperceptibile. Acest lucru este evidențiat de valorile date în Tabelul. 5-4. Pentru a stabili poziția de aminoacizi separați pe bandă de hârtie electroforetograma a fost uscată, prin pulverizare cu ninhidrină (vezi. De mai jos) și se încălzește. pete albastre sau violet a stat pe hârtie, indică prezența unui anumit aminoacid. În aceleași condiții ale probelor de electroforeză aminoacizi cunoscuți care servesc ca „markeri“ care permit determinarea caracteristicii pentru fiecare poziție de aminoacid din electrophoregram (vezi. Fig. 5-13).
Trimiteți-le prietenilor: