Metode pentru crearea condițiilor anaerobe pentru cultivarea bacteriilor

LF, FIU, PF. Lecția # 5
5A. Dispoziții de bază
Metode de creare a condițiilor anaerobe pentru cultivarea bacteriilor.

În funcție de metoda de creare a unui mediu lipsit de aer, toate metodele pentru a crea condiții anaerobe pentru cultivarea bacteriilor sunt împărțite în fizice (de exemplu, utilizarea anaerob), chimice (de exemplu, îndepărtarea oxigenului într-un volum închis prin reacții chimice) și biologice (co-cultivare într-un volum închis culturi aerobe și microorganisme anaerobe); în afară este metoda Kitty Tarotstsi care combina procesele biologice fizice, chimice și pentru crearea unui mediu fără aer de microorganisme: bacterii sunt cultivate in vitro cu BCH glucozei umplute cu ulei si cu feliile de ficat pe partea de jos.






Diagrama schematică a metodei de cercetare a culturii.

Toate tipurile de bacterii sunt identificate și identificate printr-un singur algoritm, constând în trei etape: obținerea unei creșteri izolate, acumularea culturii pure, identificarea finală a culturii pure; când sunt izolate bacteriile sportive (bacili și clostridia), semințele sunt încălzite într-o etapă preliminară pentru a ucide formele vegetative ale bacteriilor.
Semnele culturale ale bacteriilor.

Caracteristicile culturale ale bacteriilor includ cerințele nutriționale, mediul nutritiv optim, temperatura de cultivare, condițiile de aerare, rata de creștere, modelul de creștere pe suporturi lichide și nutritive dense.
Dispozitive automate pentru identificarea culturilor bacteriene și particularitățile de a lucra cu acestea.

Când utilizați dispozitivul de identificare automată a culturilor bacteriene (de exemplu, ca gemokultivatora BACTEC) medic bacteriolog eliberat din exploatație multe repetitive și necesită mai multe costuri de proceduri de timp, cu toate acestea, și în acest caz, principiul metodei culturii de investigare complet coincide cu cele de mai sus în această secțiune, doar al doilea iar a treia etapă se desfășoară fără participarea omului - ele sunt aproape complet automatizate.
Studiul proprietăților biochimice ale bacteriilor (pe baza exemplelor de enterobacterii).

Proprietățile biochimice ale enterobacterii începe să studieze simultan cu eliberarea materialului de cultură de însămânțare diferențială mediu nutritiv diagnostic Endo, Levin Ploskireva (pentru a determina capacitatea bacteriilor de a recicla lactoza), după care cultura pură se acumulează pe acumulare și medii de diferențiere primară (Russell Kligler, Olkenitskogo) în care, în afară de utilizarea lactozei, a determinat capacitatea bacteriilor de a utiliza glucoza, uree și produc hidrogen sulfurat; în al treilea pas pe suport Hiss estimat activitatea saccarolitic și capacitatea lor de a lichefia gelatină - activitate proteolitică; În plus, în ultima etapă, se efectuează teste pentru prezența unei culturi identificabile a enzimelor hoteliere.
Definiția termenului "bacteriofag".

Bacteriofagul este un virus care infectează o celulă bacteriană.
Descoperirea bacteriofagului.

Bacteriofagul a fost descoperit de d'Erell.
Nomenclatura bacteriofagului.

Nomenclatorul fagilor se bazează pe denumirea speciei gazdei.
Structura bacteriofagului.

Structura bacteriofagului poate fi în principiu descrisă ca un acid nucleic înconjurat de o acoperire de proteine, ca în cazul tuturor virusurilor, poate exista un singur tip de acid nucleic într-un bacteriofag - fie ADN sau ARN.
Tipuri morfologice de bacteriofagi.

În funcție de prezența și natura principalelor componente structurale - capul și procesul - bacteriofagii sunt împărțiți în tipuri morfologice, în cadrul cărora, la rândul lor, sunt posibile diferite variante.
Clasificarea bacteriofagilor în funcție de spectrul de acțiune.

Bacteriofagele care afectează mai multe specii de bacterii se numesc polifage, un tip de bacterii - monofagi (specii fagi), o variantă de bacterii în fagii de tip specie.
Clasificarea bacteriofagilor în funcție de efectul acțiunii asupra celulei bacteriene.

Particularitățile interacțiunii cu o celulă sensibilă sunt virulente (lizând celula cu eliberarea unui număr mare de particule de fag) și un fag bacterian ușor care intră în genom (adică lizogenizează-l); În plus, bacteriofagul poate înlocui complet sau parțial genomul său cu genomul celulei gazdă bacteriene: astfel de bacteriofagi sunt numiți defecți.
Interacțiunea unui fag cu o celulă bacteriană.

Phage adsorbit pe suprafața bacteriilor din interiorul din urmă pătrunde numai acidul nucleic al fagului, care interacționează cu genomul celulei bacteriene, determinând celula începe să producă proteine ​​și acizi nucleici ai fagilor, după care au fost colectate în particule de fagi în și în afara celulelor (în cazul fagului virulent - infecție productivă) sau acid nucleic al fagului se integrează în ADN-ul bacterian, replicarea în compoziția sa, la fiecare diviziune celulară (în cazul fagului moderat - lysogenization).
Aplicarea practică a bacteriofagilor.

Fage utilizate în diagnosticare (pentru identificarea bacteriilor selectate) terapie (întotdeauna administrat local bacteriofagi parenteral distrus de anticorpi produși împotriva acestuia) și prevenirea (aplicații per os, de exemplu, febra tifoidă și bacteriofagii dizenterie).
Izolarea bacteriofagului.

Materialul din care este alocat un bacteriofag (obiect ambiental sau cultură bacteriană), se filtrează printr-un filtru bacterian și filtratul a fost plasat într-un mediu lichid, care este însămânțat sensibil pentru a secreta cultură bacteriană a fagului, după incubarea se realizează experiență păstrarea: creșterea bacteriană indică absența unui material de testat bacteriofag căutând, lipsa creșterii bacteriene indică faptul că prezenta bacteriofag dorită în materialul.






Fagoindikatsiya.

fagi specific este utilizat pentru a identifica tipul de bacterii: după însămânțare gazon cultură identificabilă într-un vas Petri pe suprafața sa picurat bacteriofag specific - dacă la care nu se observă locul de creștere a picăturilor de bacterii, bacteria aparține speciei.
Metode de titrare a fagului.

Titrarea (de exemplu determinarea cantității sale în materialul de testare) bacteriofagei se efectuează fie pe un mediu lichid (metoda lui Appelman), fie pe un mediu dens (metoda Grazia).
Fagotiparea bacteriilor.

tulpina typeable inoculat cu gazon pe agar placă inoculează apoi picături de picurare suprafață de însămânțare tipic ceașcă bacteriofagi este incubat într-un incubator și permite o experiență de înregistrare „pete sterile“ sau „placi“ - locuri fără creștere la locul picăturilor bacteriofag, care este sensibil la această variantă a speciilor bacteriene.

5B. Curs de curs

5V. Material teoretic


8. Propagarea bacteriilor și a principiilor cultivării lor

8. DIGITIZAREA BACTERIALĂ ȘI PRINCIPIILE CULTURII LOR
8.7. Metode pentru crearea condițiilor anaerobe pentru cultivarea bacteriilor

În funcție de metoda de creare a unui mediu fără aer, toate metodele de creare a condițiilor anaerobe pentru cultivarea bacteriilor sunt împărțite în fizică, chimică și biologică. Metoda Kitt-Tarozzi se deosebește, combinând metodele fizice, chimice și biologice de a crea un habitat fără aer pentru microorganisme.

A. Aerul, mai exact oxigenul aerului, poate fi îndepărtat din mediul de cultivare a bacteriilor prin metode fizice.

1. Puteți folosi anaerostatul - un vas cu un capac ermetic, de unde aerul este aspirat cu o pompă. Într-un astfel de vas a fost plasat vase Petri cu însămânțare și după evacuând pus (dacă este în dimensiunea sa îi permite să facă - o astfel anaerobă mică numită mikroanaerostatami) într-un cuptor, unde are loc cultivarea bacteriilor.

2. Există, de fapt, o varietate de anaerostați în care aerul îndepărtat este înlocuit cu un anumit gaz inert, de exemplu - în aparatul lui Kip - cu hidrogen.

3. Una din cele mai comune metode de a crea condiții anaerobe în cultivarea bacteriilor este folosită în așa-numitele tuburi Viñal-Villon. Această metodă este ușor de implementat și nu necesită niciun echipament special. În tuburile Vinyal-Villon se desfășoară cultivarea profundă a bacteriilor. Pentru a face acest lucru, cultura bacteriană este diluată într-un mediu nutritiv topit și răcit (în eprubete sau pipete - de aici numele "tubului"), astfel încât celulele bacteriene se află la o distanță considerabilă una de cealaltă. Când mediul nutritiv se solidifică, celulele bacteriene se dovedesc a fi "imature" în grosimea lor și în timpul cultivării fiecare dintre ele formează o colonie separată (în mod natural, fără acces la oxigen din aer).

4. Sunt create condiții anaerobe pentru cultivarea bacteriilor și dacă sunt injectate în coloana înaltă de agar semi-lichid. Locul injecției este strâns imediat și bacteriile cresc în grosimea mediului nutritiv.

5. Este posibilă îndepărtarea aerului dizolvat într-un mediu nutritiv lichid prin fierbere. Când lichidul este încălzit, aerul dizolvat în el părăsește atmosfera, pe care o observăm sub forma de "barbotare". Acest proces se numește regenerarea mediului nutritiv. Ulterior, cu răcire lentă, aerul nu se dizolvă din nou în bulionul de nutrienți, se răcește foarte repede (de exemplu, sub un curent de apă rece).

6. Pentru a minimiza difuzia aerului atmosferic în mediul nutritiv, suprafața sa este acoperită cu un strat de ulei lichid (de exemplu, vaselină). În acest caz, vorbesc despre "cultivarea sub un strat de ulei".

7. Cu cultivare profundă, este dificil să accesați colonia potrivită și să o extrageți din mediul nutritiv. Această metodă este facilitată de metoda Peretz. un mediu de agar nutritiv topit și răcit, amestecat cu o cultură bacteriană, este turnat în vasul Petri, care este atent plasat pe suprafața culisei, care este ușor presat în agarul nutritiv. Acele colonii care cresc direct sub acest pahar, după îndepărtarea acestora, devin ușor accesibile.

B. Metodele chimice pentru crearea condițiilor anaerobe pentru cultivarea bacteriilor sunt împărțite în două grupe.

1. oxigen obligatoriu în aer poate fi efectuată într-un volum închis (de exemplu, într-un desicator cu un capac la sol) reacția chimică care are loc cu absorbție a aerului.

a. În metoda lui Aristovski în acest scop, se folosesc ingrediente pierdute. În dezvoltarea acestei metode Industria modernă microbiologică produce truse speciale, cu care pentru a crea un amestec de gaz ca absenta completa a oxigenului și prezența acestuia, precum dioxidul de carbon și azot în anumite concentrații necesare pentru cultivarea bacteriilor din „non-standard“ cerințele privind condițiile de aerare.

b. În această metodă Omelyansky folosește ingrediente lichide (pirogalol și potasiu caustic).

2. Este posibil să se adauge agenți de legare a oxigenului în mediul nutritiv lichid. Astfel de substanțe se numesc reduceri. Acestea includ, de exemplu, glucoza, acidul tioglicolic și o serie de alții.

B. Ca metodă biologică pentru a crea condiții anaerobe pentru cultivarea bacteriilor este cea mai extinsă (în diferite versiuni) Metoda Fortner. Principiul său constă în aceea că într-un spațiu închis (de exemplu, capsulă Petri cerat) sunt anaerobi cultivate simultan și așa-numitele „aerobi lacomi“ - tip de bacterii absoarbe puternic oxigen în timpul creșterii. Deoarece acesta din urmă este folosit cel mai des enterobacterii marcescens Serracia. Aerobă distruge tot oxigenul într-un volum închis, creând astfel condiții pentru creșterea anaerob.

Metoda G. ~ Kitty Tarotstsi este de a utiliza același nume pentru cultivarea mediului de cultură anaerob. Miercuri Kitty Tarotstsi constă din carne de vită de bulion conținând glucoză (ca agent de reducere), iar distribuția recuperat stratul de ulei, este plasat pe partea de jos a pieselor tubulare organ parenchimatos (adesea - ficat) pentru adsorbția aerului dizolvat într-un bulion de carne-peptonă.

A. Context Semnele morfologice ale bacteriilor
Semnele morfologice ale bacteriilor includ: pata Gram, forma, dimensiunea, prezența sporiilor, prezența capsulelor, mobilitatea, localizarea.

Grupuri de antibiotice. clasificare
Clasificarea generală a antibioticelor le împarte în două "tabere" principale: medicamentele cu spectru larg sunt extrem de eficiente.

Proiectul Legii federale "Cu privire la o evaluare specială a condițiilor de muncă" (pregătit de Ministerul Muncii din Rusia)
Această lege federală stabilește baza juridică și organizatorică pentru efectuarea unei evaluări speciale a condițiilor de lucru, a procedurii.

Instrucțiuni metodice Bara de stare StatusBar
Dobândirea abilităților de a crea forme Visual Basic și de a crea diverse elemente de control asupra lor

Instrucțiuni pentru completarea formularului de raportare privind efectuarea unei evaluări speciale a condițiilor de muncă
Un raport privind desfășurarea unei evaluări speciale a condițiilor de muncă, a cărui formă este prevăzut în Anexa 3 (în continuare - Raportul), este formalizat de organizație.

Număr lecție practică 12
Obiectiv: Studierea metodologiei de creare și folosire a unei hărți la scară mică și a metodologiei de creare și utilizare a unui card de referință

Discipline anterioare
Modul de conținut: boli de inimă dobândite. Clasificare. Diagnostic. Indicatii pentru tratamentul chirurgical si metodele sale.







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: