Pentru a crea un mediu fără oxigen, se folosesc metode fizice, chimice și biologice.
1) însămânțarea în medii nutritive profunde (sânge sau agar de zahăr): a) însămânțarea cu o înjunghiere într-o coloană înaltă de agar (anaerobii cresc în adâncime de însămânțare); b) însămânțarea în tuburile Vinyal-Veyon;
2) cultivarea pe mediu special: pe mediu Kitta-Tarozzi (mediu nutritiv lichid - glucoză 0,5%, bucăți de țesuturi de origine animală, de exemplu, ficat, care leagă oxigenul). Înainte de însămânțare, mediul este fiert și răcit rapid. După însămânțare, se toarnă un strat de ulei de vaselină steril.
c) creșterea în anaerostați - un vas special, din care se îndepărtează oxigenul.
Anaerostatul este un cilindru metalic cu pereți groși, cu un capac bine împământat, cu garnitură de cauciuc. În el puneți farfuriile Petri (cu capacul) cu culturi și îndepărtați aerul sau înlocuiți-l cu un gaz inert.
Metodele chimice sunt absorbția oxigenului în aer într-un vas etanșat ermetic (aparatul Aristovsky) prin substanțe chimice (cum ar fi pirogalol alcalin sau hidroxid de sulfat de sodiu).
Metode biologice (metoda lui Fortner) - cultivarea în comun a anaerobelor și aerobilor. După semănarea vaselor Petri sunt sigilate ermetic cu lut sau parafină. La început, aerobii se înmulțesc în vasul Petri și când se utilizează tot oxigenul, anaerobii încep să crească.
Izolarea unei culturi pure de bacterii aerobe și anaerobe.
O cultură pură a microorganismelor este o populație de celule (creștere vizibilă) a unei specii. crescute pe un mediu nutritiv steril.
Izolarea culturii pure este o metodă bacteriologică. Această metodă este principala metodă de diagnosticare a infecțiilor bacteriene.
Pentru a obține o cultură pură, este necesar să se separe celulele bacteriene din diferite specii unul de celălalt. Cel mai adesea se folosesc metode mecanice de separare celulară - metode speciale de inoculare:
a) însămânțarea cu o spatulă pe Drygalsky în trei vase Petri; pe cea de-a treia ceașcă devin colonii separate; fiecare colonie este o specie, pentru că colonia este descendența unei celule;
b) buclă cu "lovituri" sau "ochiuri": fac recolte cu lovituri intermitente; în locul în care un număr mare de celule microbiene se lovește de agar, creșterea va avea loc sub forma unui accident vascular cerebral continuu, iar în cazul stroke cu un număr mic de celule vor crește coloniile separate;
Astfel, cu ajutorul metodelor speciale de inoculare, se obțin colonii izolate de diferite specii bacteriene.
Alocarea culturii pure se desfășoară în trei etape:
Prima etapă (prima zi):
a) din material (un amestec de bacterii de diferite specii) pregătește un frotiu. Gram și microscopie;
b) se face însămânțarea materialului (amestec de bacterii) pe vas Petri cu MPA prin metoda punctată sau prin metoda Drigalsky și se pune un termostat la 37 ° C timp de 24-48 ore.
A doua etapă (ziua 2):
a) să se observe culturile și să se descrie coloniile diferitelor specii (dimensiunea, forma, culoarea, suprafața, forma marginii, structura, consistența);
b) Se prepară colonii și se lipește în conformitate cu Gram (colonia trebuie să conțină un fel de bacterie);
c) realizează diferite colonii în diferite tuburi cu MPA înclinat pentru a acumula o cultură curată; sunt crescute într-un termostat la 37 ° C timp de 24 de ore.
A treia etapă (a treia zi): identificați (cultura) culturii și verificați puritatea culturii. Pentru a determina speciile, sunt studiate proprietățile morfologice, culturale, tinctoriale și biochimice:
a) notați modelul de creștere al culturii nete izolate în IPA (vizual, caracterizat printr-o creștere uniformă);
b) pregătiți un frotiu. Gram și microscopie; dacă cultura este pură, atunci ei găsesc aceleași celule morfologice și tinctoriale;
c) face o însămânțare în mediul Giss și BCH pentru studiul proprietăților saccharolitic și proteolitic ale culturii pure; sunt lăsate într-un termostat la 37 ° C timp de 24 de ore.
Combinația dintre proprietățile morfologice, tinctoriale, culturale și biochimice face o concluzie cu privire la speciile aparținând culturii bacteriene pure izolate. Dacă este necesar, studiul și alte semne (factori de virulență, structura antigenică, sensibilitatea la fagi etc.).
În practica bacteriologică, stabilirea tipului de agent patogen permite diagnosticarea bolii, astfel încât izolarea și identificarea culturii pure - aceasta este metoda bacteriologică pentru diagnosticarea bolilor infecțioase. Formularea acestei metode implică în mod necesar determinarea sensibilității culturii pure izolate a agentului patogen la antibiotice (definiția antibioticogramei).
Izolarea culturii pure de bacterii anaerobe este de asemenea realizată în trei etape. Mai mult, se obține o cultură pură dintr-o singură celulă, iar microorganismele cresc sub forma coloniilor izolate, urmate de reintroducerea și identificarea acestora.
Caracteristica lucrării privind alocarea culturii pure anaerobe este utilizarea diferitelor metode de creare a condițiilor anoxice (a se vedea mai sus).
Prima zi. Se fac însămânțări (sol, puroi) pe mediul lui Kitt-Tarozzi.
A doua zi. pentru a obține coloniile se realizează prin copierea din mediul Kitt-Tarozzi în conformitate cu metoda Zeissler, metoda Weinberg și metoda Peretz.
A treia zi. coloniile sunt transferate într-o eprubetă cu noul mediu Kitt-Tarozzi pentru a acumula o cultură curată; Identificați cultura pură a anaerobilor în funcție de proprietățile morfologice, culturale, tinctoriale, biochimice și antigenice.
Semănarea prin metoda Zeissler. O picătură (buclă) de material din mediul Kitta-Tarozzi este însămânțată succesiv în trei vase Petri cu sânge de agar. Culturile sunt puse într-un anaerostat sau aparatul lui Aristovski, care este plasat într-un termostat. A doua zi în cea de-a treia ceașcă devin colonii separate. Ei fac acest lucru prin relocarea acestor colonii în mediul Kitt-Tarozzi pentru a acumula o cultură pură, pentru a-și studia proprietățile și pentru a determina cu precizie tipul de microorganisme.
Însămânțarea metodei lui Weinberg. materialul de transfer de pipetă Pasteur din secvențial mediu Kitty Tarotstsi 3-5 tuburi înguste cu diabet IPA, cufundarea în pipetă agar topit pe fundul tubului. Tuburile au fost răcite rapid sub jet de apă rece. Agar se intareste si separa celulele microbiene in profunzimea agarului. Din aceste celule cresc colonii sunt trecute la un nou mediu de Kitty Tarotstsi acumula cultura pură și identificate.
Articole similare
-
Metode pentru crearea condițiilor anaerobe pentru cultivarea bacteriilor
-
Metode și mijloace de protecție împotriva atacurilor la distanță prin Internet - Studopedia
Trimiteți-le prietenilor: