Un ghid pentru lecții practice în domeniul microbiologiei
O metodă bazată pe obținerea creșterii microorganismului direct pe un diapozitiv permite observarea microscopică a proceselor de creștere și dezvoltare, influența agenților toxici și a altor agenți asupra acestor procese. Preparatele nu distrug aranjamentul natural al celulelor din coloniile în creștere. Pregătirea "drop drop". O picătură de suspensie de microorganisme printr-o buclă sau un stilou convențional este aplicată pe geamul acoperit, care este întors în jos și plasat pe un tobogan special, cu o gaură (gaură) în centru. Picătura ar trebui să se prindă liber, fără a atinge marginile și partea inferioară a soclului. Marginile găurilor sunt pre-lubrilate cu vaselină. Picătura este sigilată într-o cameră umedă, ceea ce face posibilă observarea obiectului timp de mai multe zile. Pentru observațiile pe termen lung se utilizează ochelari sterili și suspensia de microorganisme se prepară într-un mediu nutritiv lichid.
NII. Creșterea poate fi efectuată în condiții aerobe sau anaerobe (sub acoperire).
Filmul de agar poate fi aplicat pe geamul de acoperire și se pregătește un preparat de "picătură suspendată". Pe un astfel de preparat se poate observa mișcarea bacteriilor prin tipul de alunecare.
6.2.2. Preparate de celule fixe colorate de microorganisme
Prepararea preparatelor colorate fixe include următoarele etape: prepararea frotiului, uscarea, fixarea și colorarea.
Pregătirea unui frotiu. O picătură mică de apă de la robinet este plasată pe un pahar degresat cu alcool și o cantitate mică de material de testare este transferată în ea printr-o buclă, ca în cazul preparatului "picătură zdrobită". Suspensia rezultată este uniform diluată cu o bucla pe o suprafață de 1-2 cm2, posibil într-un strat mai subțire. Frotiul trebuie să fie atât de subțire încât să se usuce după gătit.
Uscarea frotiului. Cel mai bine este să uscați produsul finit la temperatura camerei în aer. Un frotiu subțire bine pregătit se usucă foarte repede. Dacă frotiul se usucă încet, preparatul poate fi ușor încălzit într-un jet de aer cald deasupra flăcării arzătorului, păstrând frotiul de sticlă în sus. Această operație trebuie efectuată cu grijă, fără supraîncălzirea frotiului, altfel celulele microorganismelor sunt deformate.
Fixarea medicamentului are mai multe scopuri: de a ucide microorganismele, adică de a se asigura un tratament suplimentar cu ni-i? asigura o adeziune mai buna a celulelor la sticla; Faceți o frotiu mai susceptibil la colorare, deoarece celulele moarte sunt colorate mai bine decât celulele vii. Cea mai obișnuită metodă de fixare este tratamentul termic. Pentru aceasta, preparatul se efectuează de obicei de trei ori prin partea cea mai fierbinte a flacării arzătorului, menținând glisiera în poziție cu un accident vascular cerebral. Nu supraîncălziți frotiul, deoarece acest lucru este însoțit de schimbări bruște în structurile celulare și, uneori, de apariția celulelor, de exemplu, încrețirea lor. Pentru a studia structura fină a celulelor recurge la fixarea cu diferite substanțe chimice (vezi Anexa). Lichidul de fixare este turnat cu un chit, sau preparatul este imersat într-un pahar cu un fixer pentru o anumită perioadă de timp.
Colorat. Celulele microorganisme sunt colorate în principal cu coloranți anilinici. Distingeți între vopselele acide și cele de bază. Pentru coloranții acide sunt aceia în care ionul de colorare (cromoforul) este un anion. Principalul colorant cromofor este un cation. Un exemplu de coloranți acide este eozina, eritrozina, nigrozina, fucsina acidă; toate aceste coloranți se leagă intensiv de citoplasma prin componentele etice ale celulei. Principalele coloranți - albastru de metilen, purpuriu de bază, violet de gențian, violet cristalin, safranin - se leagă mai intens la componentele nucleare ale celulei. Concentrația ridicată a ADN-ului și a ARN-ului ribozomal în celula bacteriană o face mai sensibilă la coloranții de bază. În acest sens, în practica microbiologică se folosesc aproape exclusiv coloranți de bază.
Distingeți între metodele simple și diferențiale de colorare a microorganismelor. Cu o simplă colorare, întreaga celulă este colorată, astfel încât forma și dimensiunile sale să fie clar vizibile. Culoarea diferențială implică colorarea nu a întregii celule, ci a anumitor structuri. Cu ajutorul colorării diferențiale, sunt identificate anumite structuri celulare și substanțe de rezervă.
Pentru colorarea simplă a celulelor de microorganisme, fucsinul, violetul de gențian, albastrul de metilen sunt cele mai des folosite. Preparatul fix este plasat pe plăci de sticlă paralele situate deasupra cuvei și umplute cu vopsea timp de 1-3 minute. Asigurați-vă că în timpul vopsirii, soluția de colorant nu se usucă pe frotiu. Dacă este necesar, se adaugă noi doze de colorant pe frotiu.
Până la sfârșitul preparării culorii se spală cu apă, atâta timp cât apa curgătoare este incoloră. Formularea este apoi uscată în aer sau uscate ușor cu hârtie de filtru, este plasat pe picătură frotiu pătat de ulei de imersie, și vizualizate cu lentilele 90H- Pentru a obține preparate mai pure de colorant este turnat pe hârtie de filtru acoperit cu frotiu. Metoda de colorare albastră în modificarea permite utilizarea soluțiilor de colorant în loc de hârtie de filtru îmbibată în prealabil într-un colorant.
Într-un preparat bine colorat și bine spălat, câmpul de vizibilitate este luminos și pur, numai celulele de microorganisme sunt colorate. Fix și culoare pot fi, de asemenea, droguri "tipărite". Preparatele fixe colorate pot fi stocate mult timp.
Forma celulelor și combinații ale acestora (lanțuri, prize, pachete, și așa tetrad. D.) Reveal, de regulă, preparatele „picătură strivita“ în câmp luminos sau microscop cu contrast de fază. Pentru a determina forma de celule mici bacterii în formă de tijă, cum ar fi marcescens, prepararea de medicamente fixate și colorate celule într-un mod simplu. Celule bacterii mici având protuberanțe (Stella genuri, Caulobacter, Prosthecomi-crobium), este oportun să se examineze într-un câmp întunecat. aranjament natural al celulelor din colonie de microorganisme și spori și sporoforilor actinomicete și fungi filamentoși studiu pe droguri „amprenta“.
Trebuie amintit că vârsta culturii, compoziția mediului și condițiile de cultivare afectează în mod semnificativ morfologia și citologia microorganismelor.
6.2.3. Determinarea dimensiunilor celulelor de microorganisme
Celulele microorganisme sunt măsurate sub microscop cu ajutorul unui conducător ocular - micrometru sau micrometru ocular. Pentru măsurare, este mai bine să se utilizeze celule vii decât celule fixe, deoarece fixarea și colorarea celulelor conduc la o anumită modificare a dimensiunilor lor reale. Este convenabil să se determine dimensiunea unei celule utilizând un dispozitiv de contrast de fază. Dacă celulele sunt mobile, preparatul este ușor încălzit sau se adaugă o picătură de soluție apoasă de agar de 0,1% la picăturile suspensiei de testat. Dimensiunile celulelor sunt exprimate în micrometri (μm).
Micrometrul ocular este o placă de sticlă rotundă cu o riglă lungă de 5 mm gravată în centru. Lemnul este împărțit în 50 de părți. Micrometrul ocular este introdus în ocular. Pentru a face acest lucru, deșurubați lentila oculară a ocularului, așezați micrometrul ocular pe diafragmă cu fise în jos și înșurubați obiectivul. Cu toate acestea, mărimea micrometrului ocular nu poate măsura direct mărimea celulei, deoarece acestea sunt văzute prin lentile și ocular și diviziunea riglei doar prin lentilele superioare ale ocularului. Prin urmare, înainte de a începe măsurarea dimensiunii celulelor, trebuie să determinați prețul împărțirii micrometrului ocular pentru o mărire dată a microscopului, care se face cu ajutorul unui micrometru obiectiv.
Un micrometru obiectiv (Figura 53) este o placă metalică cu o gaură în centru. Un pahar este introdus în orificiu, pe care se aplică o riglă cu o lungime de 1 mm. Se împarte în 100 de părți, adică diviziunea micrometrului obiectiv corespunde cu 0,01 mm sau 10 μm. Pentru a determina prețul diviziilor micrometrice ale ocularilor, micrometrul obiectiv este plasat pe scena microscopului și focalizat la mărirea mică. Imaginea conducătorului este mutată în centrul câmpului vizual și numai după aceea
schimbați obiectivul cu cel la care vor fi determinate dimensiunile celulelor. Deplasând masa microscopului și întorcând ocularul, setați micrometrele astfel încât balanțele lor să fie paralele și una să se suprapună peste cealaltă. Prețul divizării micrometrului ocular este determinat pe baza principiului vernier, adică combinând una dintre diviziunile scalei micrometrelor oculare și obiective și găsind următoarea lor aliniere (Figura 54). Determinați câte divizări ale micrometrului obiectiv corespunde unei divizări a ocularului
Figura 54 Determinarea prețului divizării obiectivului
micrometru / divizare a micrometrului obiectiv; 2 - divizarea micrometrului ocular
m micrometru. De exemplu, două divizii de micrometru de obiect (20 microni) corespund la 5 diviziuni cu micrometru ocular, de aceea 1 divizare a micrometrului ocularului este de 4 microni (20: 5). Dacă acum plasăm un preparat cu celule de microorganisme pe masa de microscop și o considerăm la aceeași mărire, atunci putem măsura dimensiunea celulei. Pentru a face acest lucru, determinarea numărului de diviziuni ale riglei oculare corespunde valorii obiectului măsurat și înmulțiți acest număr cu prețul de divizare al micrometrului ocular.
Este convenabil să se determine dimensiunea celulelor utilizând un micrometru ocular cu șurub MOB-1-15. Micrometrul ocular cu șurub este fixat pe tubul microscopic, având înlăturați anterior ocularul. În ocularul micrometrului cu șurub există o scală fixă cu o valoare de divizare de 1 mm pentru a determina dimensiunea obiectelor mari și o placă de sticlă mobilă cu o cruce. Placa este conectată cu microscopul
Trimiteți-le prietenilor: