Diagnosticul criptosporidiozei

Principala metodă de diagnosticare a criptosporidiozei este identificarea microscopică a agentului patogen. În acest scop, se utilizează metode de diagnoză intravilă și postmortem.







Diagnosticul intravital al criptosporidiozelor la animale tinere din animalele de fermă se bazează pe identificarea acestor paraziți în masele fecale.

Prepararea preparatelor din fecale. Se aplică câteva picături de fecale lichide de animale bolnave (de preferință cu bucăți de mucus) pe alunecarea degresată și se aplică o frotiu subțire. Medicamentul este bine uscat, apoi fixat cu eter alcoolic sau metanol timp de 10 minute, uscat și de câteva ori transportat peste flacăra alcoolului.

Pentru a crește cantitatea de cryptosporidium, pot fi utilizate diferite metode de îmbogățire în materialul studiat. Una dintre ele este o metodă combinată de centrifugare utilizând soluții de flotare. Deoarece acestea din urmă pot fi utilizate cu soluții de densitate nitrat de amoniu de 1,3 (1500 g substanță în 1 litru de apă), acid sulfuric de zinc, cu o densitate de 1,24 (400 grame de sare la 1 litru de apă) de nitrat de sodiu cu o densitate de 1,38- 1,40 (1000 g de substanță pe 1 litru de apă), sulfat de magneziu cu o densitate de 1,26 (920 g sare pe 1 litru de apă) etc.

O probă de fecale cu greutatea de 3 g se pune într-un pahar și, amestecând constant, se adaugă 50 ml de apă. Suspensia a fost filtrată într-un tub de centrifugare și centrifugată timp de 1,5-2 minute la 3000 rpm. După aceasta, supernatantul este drenat, una din soluțiile de flotație este turnată în tub, un sediment este agitat cu o tijă de sticlă și centrifugat din nou. Apoi scoateți stratul superior de lichid din tubul de centrifugare cu o bucla de sârmă, transferați picăturile într-o sticlă bine degresată, acoperită în prealabil cu plasmă sau albumină și faceți o frotiu. Smeile sunt bine uscate, fixate și colorate.

Colorarea medicamentelor în conformitate cu Tsil-Nielsen. La început, fuchsinul carbolic este pregătit. Pentru a face acest lucru, luați fucsina principală 2 g, alcool etilic (96 °) 12 ml, acid carbolic 5 g și apă distilată la 100 ml.

Vopseaua preparată se aplică preparatului și se păstrează fără încălzire timp de 25-30 minute. După aceea, frotiul este spălat cu apă, soluția de acid sulfuric 8-10% este aplicată preparatului și menținută timp de 40-60 de secunde.

Produsul este spălat din nou cu apă și colorat timp de 3 până la 5 minute cu o soluție 5% de verde malachit în etanol 10%. Preparatul este spălat cu apă de la robinet, uscat și microscopat utilizând un sistem de imersiune.

Ca rezultat al colorării, ouășii de cryptosporidia cu diametrul de 4-5 microni au un colorat roșu strălucitor, iar microflora frotiului este pete verde. Preparatele preparate și colorate în conformitate cu această metodă sunt bine conservate.

Colorarea drogurilor de către Romanovsky-Giemsa. O soluție de 10% din vopseaua Romanovsky-Giemsa se aplică unui preparat fix. După 30 de minute, se clătește cu apă, medicamentul este uscat și microscopat. În acest caz, oochisturile criptosporidice sunt ușor colorate. În interiorul lor, uneori se pot găsi sporozoizi alungiți și curbați situați la periferia oochisturilor.

Colorarea drogurilor în funcție de Koester. Pregătiți o soluție de safranină. Pentru aceasta se adaugă 5 părți dintr-o soluție 5,6% de alcaline de potasiu în 2 părți dintr-o soluție apoasă saturată de safranină.

Un strat fix este aplicat vopselei preparate de safranină. După 5 minute, preparatul este spălat cu apă și acoperit cu 10% soluție de acid sulfuric 0,1%. Medicamentul este spălat în mod repetat cu apă și colorat timp de 12 zile cu o soluție de 5% de verde malachit, spălat cu apă, uscat și examinat cu un microscop cu un sistem de imersie.

Metoda lui Wilson. Tubul de centrifugare 1 ml obține fecale se adaugă 2 ml dintr-o soluție 2,5% de dicromat de potasiu și 5 ml de soluție de zaharoză (1,26 g în 1 ml) în apă distilată. Conținutul tubului este amestecat cu o tijă de sticlă și centrifugat timp de 10 minute la 800 rpm. Din meniscului de sus a buclei tubului scuti de câteva picături de soluție și de a le transporta pe o sticlă de diapozitive și să le acopere cu creșterea mikroskopiruyut X 400. Câmpul vizual al microscopului-oocyst-fluaj tosporidy luminoase pe un fundal întunecat al altor structuri.







Identificarea criptosporidiei utilizând un microscop fluorescent. Fecalele fecale sunt tratate cu o soluție de auramină cu acid carbolic. După aceea, ele sunt spălate cu apă și colorate timp de 8-10 minute cu o soluție de fuchsină carbolică. Produsul este spălat din nou cu apă, uscat și examinat cu un microscop fluorescent cu un sistem de imersiune. În acest caz, oochisturile de criptosporidie sunt detectate sub formă de discuri luminiscente fluorescente pe un fond roșu închis.

Pentru diagnosticul postmortem de criptosporidioză, se iau conținutul jejunului sau ileumului sau se fac ștergări din membranele mucoase ale acestora. Materialul este aplicat pe sticla degresată, se face o frotiu, se usucă, se fixează și se colorează în conformitate cu metodele descrise mai sus. Puteți, de asemenea, să luați 1 g din conținutul ileumului sau jejunului și să îl examinați în conformitate cu metoda Wilson descrisă mai sus.

Toxoplasmoza este diagnosticată cu ajutorul diferitelor metode de cercetare, inclusiv epizootice, clinice și de laborator. Studiile Ehpizootologicheskij arată animale cu etiologie incertă a bolii: .. Apariția fetuși născuți morți, avort, diverse malformații, etc. Toxoplasmoza poate clinic manifesta ca paralizie, pareze, conjunctivita, pneumonie, febră, tulburări ale sistemului cardiovascular și organe ale tractului gastro-intestinal .

Testele de laborator includ microscopia frotiurilor sau a secțiunilor histologice ale diferitelor organe și țesuturi: creierul, ficatul, rinichii, splina, plămânii, ganglionii limfatici, inima. Toxoplasmoza se regăsește și în băuturi alcoolice, ape de fructe, urină, fecale.

Pentru a diagnostica toxoplasmoza, se efectuează și o teste bioasă pe animale de laborator, studiile imunoserologice și co-prozactive ale fecalelor de pisică sunt efectuate pentru detectarea oochisturilor.

Dintre organismele de mai sus nu mai târziu de 2-3 ore după moartea animalelor pregătesc frotiurilor ficși alcool metilic lor (alcool etilic poate fi un amestec sau Nikiforov) timp de 8-10 min, colorate cu Romanowsky-Giemsa timp de 45 min. Preparatul este spălat cu apă, uscat și microscopat cu un sistem de imersiune.

Cea mai tipică formă de toxoplasm extracelular este forma arcuită sau semilunară a parazitului, în care un capăt este alungit și ascuțit, al doilea este lat și rotunjit. Tumoroplasma țesutului este de obicei rotundă sau ovală, rareori ca formă de semilună. Dimensiunile lor ajung la 4-7x2-4 microni.

Detectarea ouăcistelor Toxoplasma în fecalele pisicilor este menținută koproskopicheskim metoda folosind soluții centrifugare și flotație. Pentru a face acest lucru, luați 1 g de fecale a fost plasat într-un mojar, se adaugă 8,10 ml de apă, 3 picături de acid carbolic 1% și se triturează bine pistil. Amestecul a fost filtrat printr-un mojar de metal sau sita Capron într-un tub de centrifugare și se centrifughează la 2500 rot / min timp de 10 min. După aceea, se decantează supernatantul, la reziduu se toarnă o soluție de azotat de amoniu, cu o densitate de 1,3 (sau o altă soluție de flotație cu o densitate mai mare de 1,15), precipitatul a fost agitat cu o baghetă de sticlă cu soluție salină și re-centrifugate la 1500 rot / min timp de 5 min .

Apoi, 5-6 picături sunt îndepărtate de pe stratul de suprafață al lichidului din tubul de centrifugare cu o buclă de metal, aplicate pe un diapozitiv degresat și microscopate.

Bioanaliza este, de asemenea, una dintre principalele metode de diagnosticare a toxoplasmozei. Pentru a lua o mostră de implementare în felii de 1 g de creier, ficat, splina, ganglionii limfatici sau organe ale unui fetus avortat, plasat într-un mojar steril, s-au adăugat 3 ml de soluție salină și se triturează. Suspensia rezultată este injectată intraperitoneal în 0,5 ml de 4-5 șoareci albi. În prezența toxoplasmei în materia primă, au o formă severă a bolii la 5-7 zile după administrarea suspensiei. În acest caz, în cavitatea abdominală a șoarecilor se formează până la 3 ml de transudat care conține un număr mare de endozoiți. Pentru a detecta toxoplasmul, luați transudatul din cavitatea abdominală, pregătiți frotiuri, faceți frotiuri din creier. Preparatele preparate au fost fixate și colorate cu Romanovsky-Giemsa, se usucă și apoi prezența mikroskopiruyut endozoitov folosind sistemul de imersie, prezența preparatelor chisturi cu creșterea 7h20 navighează pe microscop.

Diagnosticarea imunologică a toxoplasmozei se efectuează cu ajutorul antigenului toxoplasmatic.

Se efectuează pe baza studiilor epizootologice, clinice, serologice și microscopice, conform datelor autopsiilor pathomorfologice.

Metoda compresorului de detectare a sarcocitelor. În acest scop, mușchi eșantionată diferitelor organe - esofag, diafragma, inima, mușchii scheletici și din fiecare probă de-a lungul fibrelor musculare sunt tăiate cu o valoare prag de 4 ovăz (II Vershinin, 1982). Secțiunile sunt așezate pe sticla compresorului, acoperite cu un al doilea geam și strânse cu șuruburi. După aceea, microscopia cu o creștere de 7x8.

Formulările pot nuanța cu vopsea soluție Romanowsky-Giemsa (2 picături de cerneală per 1 ml apă distilată) timp de 1 oră. După această preparare a fost decolorată cu amoniac apos.

De asemenea, puteți colora preparatele folosind altă metodă. Pentru a face acest lucru, se prepară prima vopsea: 30 ml dintr-o soluție 0,01% de alcaline potasiu se adaugă la 30 ml dintr-o soluție de albastru de metilen 10% și amestecul rezultat se diluează în mod egal cu apă distilată. Vopseaua rezultată poate fi colorată timp de 10 minute, urmată de decolorarea cu 25% soluție de amoniac (GV Kononenko, 1968).

Pentru detectarea merozoitilor, metoda cea mai convenabilă este M. Kozar (1971). Luați 2-5 g de țesut muscular, puneți-l într-un mortar de porțelan, adăugați 1 ml soluție fiziologică și triturați cu grijă. Apoi luați o picătură de suspensie rezultată, puneți-o pe un diapozitiv degresat, acoperiți-o cu un capac și microscopați-o într-un câmp întunecat. Merozoitele sunt vizibile sub forma formărilor bananoide.

Pentru diagnosticul intravital al sarcocișozei carnivore, se utilizează metode de centrifugare utilizând soluții de flotare.

Tabelul 8. Caracteristicile distinctive ale sarcosporidiei,







Articole similare

Trimiteți-le prietenilor: