Metodă de diagnosticare a intoleranței la medicamente

G01N33 / 48 - materiale biologice cum ar fi sânge, urină (G01N 33/02-G01N 33/14, G01N 33/26, G01N 33/44, G01N 33/46 prevalează; definiția de germinare A01C 1/02); dispozitive de numărare și măsurare celulelor sanguine (hemocitometru) (hemograma, distribuite pe întreaga suprafață prin scanarea suprafeței G06M 11/02)








Proprietarii brevetului RU 2292550:

Smirnov Andrey Yurievich (RU)
Smirnova Olga Ivanovna (RU)

Invenția se referă la domeniul medicinei, și anume la diagnosticarea în laborator. O metodă de diagnosticare dozare intoleranta de medicamente individuale sau amestecuri ale acestora se realizează prin evaluarea gradului de rezistență a hematiilor atunci când sunt expuse la medicamente in vitro la concentrații molare mici (10 -6 M / l), care acționează asupra membranei plasmatice a celulelor roșii din sânge plasate într-un mediu hipotonic. Invenția se referă la un mod universal, integral și fiabile, care să permită determinarea tolerabilității și combinații ale acestora pentru terapia ulterioară, precum și pentru a determina cauza si semnificative de droguri, care a cauzat sau ca o reacție secundară. 3 bolnavi. 1 tab.

Invenția se referă la domeniul medicinei, și anume metodele de diagnosticare în laborator.

În literatura internă și străină există o mulțime de informații despre încercările de a diagnostica adevărata intoleranță la medicamente (LN) cu ajutorul metodelor individuale. Tabelul 1 prezintă metodele cele mai informative pentru diagnosticarea LN.

Metode cunoscute de diagnosticare a intoleranței la medicamente

Fradkin V.A. Alergologie in vitro. M. 1975, p. 73-80.

Pentru a diagnostica reacțiile alergice reale asociate cu stadiul imunologic, există metode imunoenzimatice moderne pentru determinarea anticorpilor IgE și IgG specifici pentru anumite medicamente din serul de sânge. Detecția anticorpilor specifici la medicamente este dificil, fie din cauza schimbărilor constante în titrului lor, fie din cauza lipsei lor completă, deoarece multe medicamente nu sunt alergen sau au o mulțime de metaboliți, toate acestea pot funcționa independent. De asemenea, trebuie remarcat faptul că multe reacții adverse la medicament sunt fie pseudoalergice, fie toxice sau farmacologice, în care nu se formează anticorpi specifici. În plus, medicamentele nu sunt alergeni. Chiar dacă ele formează haptene, ele nu pot avea proprietățile necesare răspunsului anticorp al organismului. Și, în sfârșit, prezența anticorpilor deseori nu conduce la manifestări clinice ale unei reacții alergice și nu o indică. Prin urmare, aceste metode nu trebuie considerate diagnostic.

În literatura de specialitate nu există date privind valoarea preventivă utilizate LN metode de diagnostic.

În practica terapeutică, terapia complexă utilizată în prezent, constând dintr-un număr de medicamente care au diferite puncte de aplicare, deci trebuie să determinați efectul efectelor combinate ale medicamentelor.

Prin urmare, metoda de diagnosticare a intoleranței la medicamente trebuie să fie universală, integrală, permițând să se determine medicamentele tolerate înainte de tratament și efectele acțiunii lor combinate, luând în considerare interacțiunile intermediare. Arsenalul medicamentelor ar trebui să fie suficient de larg (cel puțin 1000).

Prototipul metodei revendicate este selectată erythrograms metoda cu acid (IF Terskov Gitelzon II Metoda chimică (acid) erythrograms Biofizică - .. 1957 - Vol.2, S.259-266), care este utilizat pentru boala radiatii diagnostic si severitatea ei , hepatită, diverse otrăviri pentru rezistența eritrocitelor la hemoliticul chimic.

Metoda revendicată se realizează după cum urmează:

1. Un sânge heparinizat diluat 1: 1000 în soluție salină în cantități de 2 ml.

2. Sângele diluat este adăugat la medicament la o concentrație de 1 x 1000B7, 10-6 M / L în cantitate de 0,2 ml și introdus în termostat la t 24 ° x000B0 ° C timp de 10 min.

3. După termostatare, se adaugă 2 ml de soluție hemolitică de lucru (0,004 N HCI) și cuva este instalată în FEC. Fotometria se efectuează la o lungime de undă de 670 nM. Contorul de timp începe la fiecare 30 de secunde de la momentul injectării hemolitice până la atingerea a doi indicatori coincidenți până când hemoliza este completă.

4. Utilizeaza de intrare fotometrie la un calculator și prelucrate în conformitate cu programul nostru, care permite de a primi „histograma“, cu un interval de încredere, care să permită să se estimeze precizia rezistenței eritrocitelor hemolitice sub influența drogurilor, comparativ cu expunerea la ser fiziologic (de control).

Prototipul are o serie de dezavantaje semnificative:

1. Nu se intenționează introducerea unui medicament în mediul de reacție (in vitro).

2. Are informativitate redusă și precizie a diagnosticării.

3. Probele au o informație scăzută.

4. Nu oferă o evaluare a efectului complex al mai multor medicamente.







Toate dezavantaje sunt eliminate în metoda în care în sânge administrate medicamente investigate la concentrații molare scăzute (10 -6 M / l) care să măsoare cu acuratețe portabilitatea lor, folosind procedeul ca indicator al gradului de hemoliză rezistența membranei eritrocitare sub efectul substanței de testat.

Am dezvoltat o procesare computerizată a rezultatelor fotometrie crește conținutul de informații și acuratețea diagnosticului.

Reproductibilitatea ridicată a rezultatelor este asigurată datorită setării corecte a controlului, computerizării. Ca probă de control, se utilizează sângele aceluiași pacient, în care se adaugă soluție salină în locul medicamentului și în prototipul - sânge donator.

Am studiat mai intai efectul antibioticelor si vitaminelor in concentratii de 10 -2 -10 -22 M / L in experimente preliminare cu sange de donatori practic sanatosi (fara nici un semn de LN din istorie). Rezultatele au arătat că medicamentele în concentrații de 10 -6 -10-8 M / L au fost neutre pentru eritrocitele umane sănătoase.

În studii suplimentare s-au utilizat preparate în concentrații de 10-6 M / l (sub formă de substanță activă), care, probabil, corespundeau mai mult concentrațiilor terapeutice reale ale medicamentelor din sângele pacientului.

Am studiat mai întâi mecanismul de interacțiune a medicamentelor cu membrana eritrocitară în concentrații moleculare. Constă în aceea că în membrana plasmatică a celulelor roșii din sânge plasate în mediu hipoton (mediu hemolitic în metoda revendicată), în prezența unor concentrații scăzute de medicamente - 10 -6 M / l violare are loc transportul ionilor (creșterea curentului de ioni în celulă) și, respectiv, crește permeabilitatea membranară și accelerarea hemolizei eritrocitelor. La un pacient cu intoleranță la un medicament, hemoliza are loc mai repede decât la donatorii sănătoși. În același timp, nu există schimbări în membrana eritrocitelor și chiar mai mult în distrugerea acesteia.

Metoda se efectuează după cum urmează. Înregistrarea modificărilor în cinetica hemoliză produsă în instalație, care este baza de colorimetru fotoelectric concentrație microprocesor - KFK-2 MP. Se folosește o grosime de 20 mm. Celula de lucru injectat 2 ml de sânge amestecat uniform într-o diluție de 1: se adaugă la același medicament la o concentrație de 10 -6 M / l într-o cantitate de 0,2 ml, amestecată bine 1000. Cuva este plasată timp de 10 minute într-un termostat la o temperatură de 24 # x000B0; C. După 10 minute, se adaugă 2 ml de soluție hemoliză de lucru (0,004 N HCI). Cuveta este instalată în FEC, pe o cuvă cu apă distilată. Fotometria se efectuează la o lungime de undă de 670 nm. Timpul începe (când microprocesorul și în același timp un cronometru), la fiecare 30 de secunde din momentul administrării pentru a obține Lyse doi indici coincidente, adică până la hemoliză completă. Extincția la sfârșitul hemoliza ajunge la 0 (zero), datorită absorbției luminii de hemoglobină din eritrocite, care sub influența acidului clorhidric a fost transformată în hematină acid clorhidric.

Evaluarea rezultatelor este după cum urmează. Ca rezultat, un număr de probe obținute prin scăderea extincție, fiecare dintre care corespunde gradului de hemoliză intervalul de timp. Indicațiile de intrare fotometrie la un calculator și prelucrate în conformitate cu programul nostru, rezultând într-o „diagramă bară“, împreună cu un interval de încredere (# x000B1 5%, ca metoda coeficientului de variație determinat în experimentul nu depășește 5%) pentru a evalua precizia rezistentei hemolitice eritrocite sub influența medicamentelor în comparație cu efectul salinei (control). Reducerea rezistenței eritrocitelor cu 10% poate fi considerată fiabilă, indicând intoleranța la un medicament.

Un exemplu obținut prin prelucrarea pe un calculator este prezentat în fig.

SPSE - indicatorul total al rezistenței eritrocitelor - aria de sub curba de distribuție. Figura 1 arată că preparatele: bitsillin, vibromitsin, kanamicina, lincomicină, cloramfenicol nu portabil, ca bare albe și intervalele lor de încredere de sub inferioare barele limită de încredere - saline spațiu (hașurare oblic). Restul drogurilor sunt portabile. Pentru acest pacient, gentamicina a fost recomandată și este selectată. Tratamentul cu acest antibiotic a trecut fără complicații.

În practica clinică, se întâmplă de multe ori să se ocupe de utilizarea unui complex de medicamente. Metoda propusă de diagnosticare a LN ajută la determinarea celor mai bine tolerate combinații de medicamente.

Iată câteva exemple clinice:

Astfel, metoda revendicată face posibilă determinarea celei mai exacte medicamente cu semnificație cauzală, pentru a face o alegere preventivă a medicamentelor destinate terapiei, pentru a determina combinații tolerabile de medicamente în aplicarea complexă a acestora.

Au existat 800 de pacienți au fost examinați cu LN, fiecare pacient a fost determinată de toleranță nu mai puțin de 10 preparate (examinate preparatele 8000). Reacțiile folosite medicamente sunt 40 clase de compuși chimici: antibiotice - 52%, anestezice locale - 25%, vitamine - 14%, sulfonamide - 12%, derivați de pirazolonă - 9%, pentru anestezie intravenoasa - 7%, antihistaminice - 5% , insuline - 6%, glucocorticoizi - 5%, agenți cardiovasculari - 4%, psychotropics - 3%, și altele.

Rezultatele studiului au arătat că acuratețea metodei este de 97%. Aceasta înseamnă că, în 97% din cazuri, preparatele selecționate profilactic nu au cauzat complicații în timpul terapiei ulterioare. În 80% din cazuri, a fost detectat retrospectiv un medicament semnificativ din punct de vedere etiologic sau o combinație de diferite medicamente.

Utilizarea medicamentelor nerezolvate a condus la apariția reacțiilor nedorite (au fost raportate 9 cazuri).

Astfel, metoda propusă de diagnosticare a intoleranței la medicamente in vitro este universală, integrală, permițând identificarea medicamentelor intolerante înainte de tratament și efectele acțiunii lor combinate combinate. Este ieftin, economic avantajos. Disponibil, fiabil și poate fi efectuat în orice unitate medicală.

O metodă de diagnosticare de droguri hipersensibili individuale de medicamente sau medicamente amestecuri, caracterizat prin aceea că acesta cuprinde următoarele etape: prelevarea unei probe de sânge de la pacient și a probei menționate diluat cu ser fiziologic în raportul 1: 1000; a adăugat medicament sau amestec de medicamente pentru a fi studiate, la concentrații de 10 -6 M / l de proba diluată la sânge; amestecul a fost incubat probe de sânge și medicament sau amestec de medicamente timp de 10 min la 24 # x000B0; C; soluție hemolysing administrată cu o concentrație de HCI 0,004 N la un amestec termostatată de probe de sânge și medicament sau amestec de medicamente; evalua rezistența eritrocitelor prin fotometrie numitului amestec de probe de sânge și medicament sau amestec de medicamente, la o lungime de undă de 670 nm de la introducerea soluției hemolyzing până hemoliza este completă, în care o scădere a rezistenței eritrocitelor cu 10% indică intoleranță respectivul pacient a spus medicament sau amestec de medicamente, atunci când acest lucru este utilizat ca o probă de control al sângelui pacientului diluat cu soluție salină.







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: