Temperatura lichidului care trebuie distribuit și dozatorul trebuie să fie aceleași
- Setați volumul necesar de lichid utilizând butonul de operare (nu puteți seta volumul dincolo de intervalul dozatorului)
- Puneți vârful și umeziți-l înainte de administrarea de 3-5 ori cu lichidul care va fi luat.
- Apăsați degetul mare pe butonul de operare până la prima oprire.
- Coborâți vârful dozatorului în soluție la o adâncime de 2-3 ml și eliberați încet butonul (în timpul setului de lichide, distribuitorul trebuie ținut vertical)
- Evacuați soluția din vârful tubului dozator prin apăsarea butonului operație până când degetul mare de oprire (dozare lichid pentru a atinge peretele tubului al vârfului, prevenind stropirea cu spumare și dozare lichidă)
- Îndepărtați vârful apăsând degetul mare de pe dispozitivul de îndepărtare a vârfului
- La sfârșitul lucrării, distribuitorul este instalat într-un trepied
- Setați volumul necesar de lichid utilizând butonul de operare (nu puteți seta volumul dincolo de intervalul dozatorului)
- Puneți vârful și umeziți-l înainte de administrarea de 3-5 ori cu lichidul care va fi luat.
- Utilizați degetul mare pentru a apăsa butonul de operare până la capăt.
- Coborâți vârful dozatorului în soluție la o adâncime de 2-3 ml și eliberați încet butonul (în timpul setului de lichide, distribuitorul trebuie ținut vertical)
- Evacuați soluția din vârful tubului dozator prin apăsarea butonului de operare pentru primul degetul mare de oprire (dozare lichid pentru a atinge peretele tubului al vârfului, prevenind stropirea cu spumare și dozare lichidă)
- Îndepărtați vârful apăsând degetul mare de pe dispozitivul de îndepărtare a vârfului
- La sfârșitul lucrării, distribuitorul este instalat într-un trepied
1 litru = 1000 ml
1 mol = 1000 mmol
1 mmol = 1000 pmol
Reacții calitative la proteine (culoare)
Aceste reacții sunt utilizate pentru a recunoaște compozițiile de aminoacizi în diverse fluide biologice, și anume:
- Determinarea cantității de proteine din plasma sanguină
- Determinarea aminoacizilor în sânge și urină
- Pentru detectarea tulburărilor metabolice ereditare sau dobândite la nou-născuți
Reacțiile de culoare includ:
- Reacția biuret. Aceasta este o reacție calitativă la legătura peptidică. Această reacție este universală pentru toate proteinele, deoarece dezvăluie prezența a cel puțin 2 legături peptidice în proteină. Reacția biuret bazată pe capacitatea legăturile peptidice într-un mediu alcalin pentru a forma sulfat de cupru CuSO4 colorate compus complex a cărui culoare depinde de lungimea lanțului polipeptidic. O soluție proteică (nativă) dă o pată albastră-violetă.
- Reacția de xantoproteină. Aceasta este o reacție calitativă la aminoacizii ciclici conținute în proteină. Când se adaugă o soluție concentrată de acid azotic HNO3 la soluția proteinei și se încălzește, apare o culoare galbenă, care se transformă în portocaliu în prezența alcalinei. Esența acestei reacții este că, în prezența aminoacizilor ciclici, apare o culoare galbenă în proteină datorită inelului benzen nitrat cu formarea compușilor nitro care precipită în precipitat.
- Reacția lui Fole. Această reacție calitativă a aminoacizilor sulfului acizi din proteina (cisteină, cistină, metionină). Esența acestei reacții este că aminoacizii care conțin grupări sulfhidril -SH, supus la hidroliză alcalină pentru a forma Na2S sulfură de sodiu, care formează săruri cu un plumb de sulfură de plumb PbS precipitat negru sau maro. Această reacție are loc în două etape: prima etapă are loc scindarea SH-grupe de aminoacizi și trecerea de compuși organici cu sulf la anorganic; în a doua etapă, detectarea calitativă a ionilor de sulf în soluție.
- Reacția ninhidrină. Această caracteristică de răspuns pentru grupările amino -NH2 în alfa-poziție și datorită prezenței acizilor alfa-amino în molecula de proteină. Când proteina este încălzit cu o soluție apoasă de ninhidrina are loc amino descompunerea în dioxid de carbon și amoniac, corespunzătoare aldehida aminoacizi și ninhidrină redusă, care este apoi condensat cu okislonnoy și amoniacul său pentru a forma o formație de produs colorat, adică. E. Pentru a se forma condens purjat cu amino violet ninhidrină albastru sau roșu-violet. Acest produs se numește dicetohidrinideniden-diketohidrinamină (DIDA). Această reacție este utilizată pe scară largă în laboratoarele biochimice pentru cuantificarea aminoacizilor în fluide biologice (sânge, urină, fluid cerebrospinal, etc.), și, de asemenea, pentru determinarea cantitativă a proteinelor și peptidelor.
Lucrarea de laborator "Chimia proteinelor"
Scop: Studiul compoziției proteinelor. Reacții de culoare pentru detectarea proteinelor și a aminoacizilor
Material de testare: soluție 1% de ou alb
Prepararea materialului de testare: proteina albă din ou este filtrată prin tifon și apoi diluată cu apă distilată la un raport de 1:10
Echipamente: baie de apă, termostat
Ustensile de lucru: un trepied cu tuburi de testare, droppers.
Experiența numărul 1. Reacția biuret la legătura peptidică.
Principiul reacției: reacția se bazează pe capacitatea legăturilor peptidice într-un mediu alcalin de a forma un compus complex de culoare albastru-violet cu sulfat de cupru.
Reactivi: soluție 1% de sulfat de cupru, soluție de hidroxid de sodiu 10%
Progresul lucrării: În tub, se adaugă cinci picături de soluție de ou alb, apoi se adaugă 1 picătură de soluție de sulfat de cupru, 3 picături (exces) de soluție de hidroxid de sodiu și se amestecă. Conținutul tubului va avea o culoare albastru-violet
Sarcina: Prezentați experiența ca un desen și trageți o concluzie.
Experiența numărul 2. Reacția xantoproteinei la aminoacizii ciclici
Principiul reacției: nitrarea inelului benzenic al aminoacizilor ciclici în proteină cu acid azotic la încălzire pentru a forma compuși nitro care precipită într-un precipitat galben.
Reactivi: acid azotic diluat
Progresul lucrării: în eprubeta, se adaugă cinci picături de soluție de ou alb, apoi se adaugă trei picături de acid azotic și se încălzește într-o baie de apă. Va apărea un precipitat galben.
Cesiune: Prezentați experiența ca un desen și trageți o concluzie. Scrieți ecuația reacției de nitrare a tirozinei.
Numărul de experiență 3. Reacția lui Fole la aminoacizii cu conținut de sulf
Principiul reacții: aminoacizi care conțin o grupare sulfhidril -SH, supus la hidroliză alcalină sub încălzire pentru a forma sulfura de sodiu Na2S, care formează săruri cu plumb de sulfură de plumb PbS precipitat negru sau maro.
Reactivi: soluție de 5% acetat de plumb, soluție de hidroxid de sodiu 30%
Progresul lucrării: În tub, se adaugă cinci picături de soluție de albus de ou, se adaugă 1 picătură de soluție de acetat de plumb, 5 picături de soluție de hidroxid de sodiu și se încălzește o baie de apă. După fierbere intensă, apare un precipitat negru sau maro.
Alocare: prezentați experiența sub forma unei imagini și trageți o concluzie. Scrieți ecuațiile reacției la cisteină.
Lucrări de laborator. Subiect "Chimia proteinelor"
Scop: Studierea proprietatilor proteinelor. Reacții de depunere
Proteinele din soluție sunt conservate în starea nativă (naturală) datorită factorilor de stabilitate, și anume: încărcarea moleculei de proteină și prezența învelișului hidrat (apă) în jurul acesteia. Baza reacțiilor de depunere este îndepărtarea încărcăturii de la molecula de proteină și îndepărtarea membranei apoase din jurul acesteia.
Experiența numărul 1. Inversarea precipitatiilor de proteine "salting out"
Principiul metodei. Recipitarea reversibilă a proteinelor este aceea că, atunci când factorii de precipitare sunt îndepărtați, proteinele precipitate se dizolvă din nou în apă și își dobândesc proprietățile native, fapt confirmat de reacția biuret.
Salatarea se face cu ajutorul soluțiilor neutre de săruri concentrate de metale alcaline și alcalino-pământoase. Pierderea diferitelor proteine în sediment depinde de greutatea moleculară și de mărimea moleculelor lor, pe baza lor.
În timpul sării, în primul rând, moleculele de proteine mari și dense (globuline) cad la o concentrație mai scăzută de săruri din precipitat, iar albuminele sunt precipitate prin soluții mai concentrate de săruri.
Materialul de testare: albus de ou nediluat.
Reactivi: soluție saturată de clorură de sodiu, pulbere de clorură de sodiu, soluție de sulfat de cupru 1%, soluție de hidroxid de sodiu 10%.
Progresul lucrării: se toarnă 30 de picături de albus de ou nediluat într-un tub de testare și se adaugă 30 de picături dintr-o soluție saturată de clorură de sodiu. Se formează un precipitat. După 5 minute, se filtrează precipitatul. Cu o tijă de sticlă, scoateți precipitatul din filtru într-un tub de testare, dizolvați-l, adăugați cinci picături de apă distilată și efectuați reacția biuret. Într-un tub cu filtrat adăugați pulbere de clorură de sodiu până când soluția este complet saturată, adică până când dizolvarea sării încetează. Se formează un precipitat. Precipitatul este filtrat, îndepărtat din filtru, dizolvat în apă și biuret cu el.
1. Care este numele de precipitare a proteinelor reversibile?
2. Ce proteine sunt precipitate mai întâi?
3. Ce sa întâmplat cu albul de ou în timpul săpunului?
4. Ce reacție demonstrează că proteina nu și-a pierdut proprietățile native în timpul sărăciei, cum se desfășoară această reacție și ce determină în proteină?
5. Ce soluții metalice sunt folosite pentru sărare?
6. Datorită a ce factori de stabilitate proteine rămân în starea nativă?
Experiența nr. 2 "Precipitații ireversibile la fierbere"
Principiul metodei. precipitarea ireversibila a proteinelor este că eliminarea depunerilor de proteine factorii își pierd proprietățile lor native datorită structurii proteinei încălcare profundă (secundară și terțiară), adică denaturarea proteinelor are loc.
Cea mai completă și rapidă precipitare este observată la punctul izoelectric, adică la valoarea pH a mediului, când sarcina totală a moleculei de proteină este zero.
Atunci când proteina este încălzită la o temperatură mai mare de 50-60 °, apare denaturarea termică, care constă în desfășurarea lanțului polipeptidic și distrugerea cochiliei hidratate. Soluția proteică devine tulbure.
Proteina de pui are proprietăți acide, are o încărcare negativă și precipită într-un mediu slab acid (punctul izoelectric este egal cu pH 4,8).
În proteine puternic acide și puternic alcalin mediu denaturat nu precipită, ca într-o proteină puternic mediu de acid capătă o sarcină pozitivă într-un mediu puternic alcalin și o sarcină negativă a creșterilor de proteine.
Material de testare: soluție 1% de albus de ou
Echipamente: baie de apă, trepied cu tuburi de testare, picături.
Reactivi: soluție de hidroxid de sodiu 10%, soluții de acid acetic 1% și 10%
Proceedings: Trepiedul instala patru tuburi de supratensiune numerotate și fiecare tub 10 picături dintr-o soluție de 1% din albuș de ou. Apoi, într-o baie de apă: primul tub este încălzit la fierbere, un al doilea tub se adaugă o picătură de soluție 1% acid acetic și se încălzește la fierbere într-un al treilea tub se adaugă o picătură de soluție 10% acid acetic și se încălzește la fierbere într-un al patrulea tub se adaugă o picătură de 10 % soluție de hidroxid de sodiu și se încălzește la fierbere. Analizați conținutul tuturor tuburilor după ce le-ați încălzit. (Prima și a doua tuburi - proteina ondulată în a treia și a patra. - nu)
Alocarea: indicați în ce epruvetă proteina a precipitat și în care tuburi nu a fost observată precipitarea proteinei. Explicați și trageți o concluzie.
Numărul de experiență 3. Precipitarea ireversibilă a proteinelor de către sărurile metalelor grele
Principiul metodei: Proteinele interacționează cu sărurile de plumb, cupru, mercur, argint denaturat și precipitat. Acest proces se bazează pe adsorbția metalului pe suprafața moleculei de proteină pentru a forma un complex insolubil.
Cu un exces de anumite săruri (sulfat de cupru), precipitatul rezultat este dizolvat. Acest lucru se datorează faptului că pe suprafața proteinei denaturate există o acumulare de ioni metalici și apariția unei încărcări pozitive asupra moleculei de proteină. Cu un exces de săruri de argint, mercurul nu dizolvă proteina.
Material de testare: soluție 1% de albus de ou
Reactivi: soluție 10% de sulfat de cupru, soluție 5% de acetat de plumb, soluție 5% de azotat de argint.
Proceedings: în rack set trei tuburi, numerotate și fiecare tub surge cinci picături de soluție de proteine albe 1% ou. Apoi, primul tub, se adaugă 1 picătură de soluție de sulfat de cupru, într-un al doilea tub, 1 picătură de soluție de acetat de plumb în 1 picătură de soluție de azotat de argint treilea.
Se observă precipitarea în tuburile de testare. Apoi, la precipitatul rezultat, se adaugă: un prim tub 10 picături de sulfat de cupru, al doilea tub 10 picături de soluție de acetat de plumb, al treilea tubul 10 picături de nitrat de argint. Observați în ce tuburi de testare soluția se dizolvă (se dizolvă numai în prima).
Sarcina: Indicați când excesul de săruri de metal este dizolvat în sedimente. Explicați și trageți o concluzie.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: