Structura managementului și a formelor de organizare a muncii pe

În Republica Belarus, s-a dezvoltat următoarea structură de gestionare a muncii privind transplantul de embrioni (Figura 5.7).

Fig. Structura managementului și a formelor de organizare a muncii pe







A. Principalul client. finanțarea lucrărilor privind transplantul de embrioni, este Ministerul Agriculturii și Alimentației.

Întreprinderea, care conduce sarcinile interpretului, este unificarea Belpelmzhiv.

B.Holovnymi întreprinderi care coordonează activitatea sunt centrele Zhodinsk, Grodno și Brest pentru transplantul de embrioni.

Datoriile lor includ:

- implementarea asistenței practice în organizarea lucrărilor de transplant în republică;

- crearea de embrioni cryobank;

-formarea și recalificarea specialiștilor în domeniul transplantului de câmp;

-implementarea tuturor lucrărilor științifice și metodologice din republică privind transplantul de embrioni.

V. Executorii lucrării sunt întreprinderile oblplem și fermele de reproducere, unde se concentrează populația de vaci de donatori de valoare înaltă și există puncte echipate pentru a lucra cu embrioni. Funcția lor principală:

a) Obținerea producătorilor de tauri pentru Gospplepredpriyatiy și animale tinere valoroase genetic pentru repararea efectivului de șepteluri de lapte ale acestor plante de reproducere.

b) Crearea de embrioni de tip cryobank de la vaci donatoare restante.

5.5. Metodele de transplant de embrioni.

Metoda chirurgicală de transplantare a embrionilor de porc.

Transplantul de embrioni în producția de porci deschide calea pentru utilizarea accelerată și mai largă a scroafelor de reproducție remarcabile în procesul de selecție.

Metoda este metoda de bază pentru obținerea de animale transgenice în laboratoare de profiluri modificate genetic în SUA, Canada, Anglia, Africa de Sud și altele.

Scopul lucrării este de a rezolva următoarele probleme ale biotehnologiei.

1. Creșterea intensivă a tipurilor și liniilor de animale cu genotipul dorit în funcție de caracteristicile creșterii și dezvoltării.

2. Crearea de animale rezistente la aceste sau alte boli și transmiterea acestei trăsături către descendenți.

3. Creșterea efectului progresului genetic pe baza selecției de la 1-2 la 7-10% pe an.

4. Deschiderea accesului la ovocite, zigoți și embrioni pentru necesitățile cercetării ingineriei genetice.

5. Schimbul între țările și continentele de embrioni provenind din punct de vedere al productivității, dar mai des, specii pitic exotice pentru întreținerea în condiții de locuit.

Metoda de extracție chirurgicală și transplant de embrioni la porcine este asociată cu particularitățile structurii organelor genitale. Acesta reprezintă un proces tehnologic clar organizat, format din 10 etape (Figura 5.8).

1. Selectarea donatorilor și a beneficiarilor în prima zi după înțărcarea purceilor.

2. Stimularea vânătorii de către GUSL după 24 de ore și sincronizarea poliovulării după 72 de ore cu gonadotropină corionică (choriogonină) după purceii înțărcați.

3. Inseminarea 24 și 48 de ore după injectarea corionică.

4. Realizarea unei anestezii generale de operare.

5. Obținerea embrionilor prin metoda laparotomiei cavitare în a 3-a zi după inseminare.

6. Cultivarea acestora în mediu Dulbecco conținând 20% ser fetal (nu mai mult de 3 zile).

7. Evaluarea microscopică a adecvării pentru transplant.

Fig. 5.8. Etapele aplicării metodei chirurgicale

transplantul de embrioni de porc

8. Transportul la locația destinatarilor.

9. Realizarea unei anestezii generale operaționale și a embrionilor transplanteri la scroafe-destinatari.

10. Să mănânc.

Ca material donator, sunt importate și utilizate embrioni de rase pitic decorative exotice de porc, concepute pentru întreținerea ulterioară în condiții domestice, ca animale de companie. Embrionii sunt transportați în tuburi de testare cu un mediu nutritiv, unde rămân viabile timp de aproximativ 3 zile.

Sincronizarea de vânătoare și poliovularea sunt cauzate de injecțiile de gonadotropină serică (GUS) în asociere cu gonadotropină corionică (HG). Doza optimă de GUS este de 11 UI / kg de greutate în viu. Injecția de choriogonină se efectuează la o doză de 5 UI / kg de greutate în viu la 72 de ore după înțărcarea purceilor. Rezultatele procesării sunt prezentate în Tabelul. 5.6.

Tabelul 5.6. Rezultatele stimulării polovovulării foliculilor la scroafe

Răspuns ovarian (număr de ovulații)

Premedicația (potențarea anesteziei generale operaționale) se realizează prin intermediul unei injecții intramusculare preliminare a unui tranchilizant de aminazină. Principala substanță narcotică în acest caz este o soluție de hidrat de clor (0,04 g / kg g / m) rectal. Preparatul este dizolvat anterior într-o pastă de amidon la consistența unui gel gros. Este necesară premedicația înainte de anestezie pentru a reduce doza de hidrat de clor la nivelul optim. Aminazina este administrată la o doză de 0,21 ml / kg greutate vie de două ori, la un interval de 40 de minute.

După introducerea aminazinei, efectul închiderii pleoapelor la animale are loc după 45 de minute. Efectul somnului profund anestezic după administrarea rectală de cloral hidrat se manifestă după 10 minute. Durata acestuia este de 55 de minute. Acest lucru este suficient pentru o operație de extragere sau transplant de embrioni, care durează în medie 25-35 de minute. Producția de scroafe din anestezie trece fără complicații. Animalele se deplasează independent de camera de operație în cutii individuale.

Durata anesteziei la scroafe în timpul transplantului este prezentată în Tabelul. 5.7.

La extracția chirurgicală a embrionilor se efectuează o laparotomie (disecția peretelui abdominal) de-a lungul liniei albe a abdomenului între a doua pereche posterioară de mamelon. Lungimea inciziei este de 8-10 cm. Prin aceasta, la rândul ei, oviducturile, ovarele și capetele coarnelor uterine sunt extrase alternativ din fiecare parte. Prin numărul de corpuri galbene din ovare se determină numărul de ovulații, precum și starea generală a organelor genitale.







Tabelul 5.7. Timpul de la introducerea medicamentelor înainte de debutul reflexului închiderii pleoapelor și a duratei somnului anestezic

Timp de la introducere

Durata somnului anesteziei, min.

aminazină până la închiderea pleoapelor, min

cloral hidrat înainte de culcare, min.

Spălați oviductul și capetele coarnelor uterine. În acest scop, introduceți din partea pâlnie a oviductului un cateter venos elastic cu un diametru exterior de 1 mm la o adâncime de 7-8 cm și fixați-l cu degetele. Prin puncția din peretele capătului cornului uterului, introduceți un cateter de lapte metalic și fixați-l aici într-o poziție statică.

Cea mai eficientă este clătirea regiunii uterine, la 72 de ore după inseminare, la o distanță de 10-15 cm de izmus, adică limitele articulației tubului uterin. Folosind această metodă, 90% dintre embrionii cu celule 4-8 pot fi îndepărtați pe donator, pe baza numărului total de ovulații. Dintre acestea, 89% sunt potrivite pentru transplant.

Există două metode de transplantare a embrionilor la porcine:

1. Un cateter venos cu un diametru de 1 mm la o adâncime de 8 cm în oviduct (o metodă fără sânge).

2. La capătul cornului uterului, prin puncția pre-chirurgicală a pereților (metoda acută).

Un procent mai mare de gestație (cu 17%, 55 față de 35) este stabilit la scroafele destinatarilor după transplantul de embrioni în oviduct.

Tabelul 5.8. Embrioni embrioni în funcție de locul de transplant

Metoda non-chirurgicală de transplantare a embrionilor la vaci.

Metoda non-chirurgicală a transplantului de embrioni cuprinde 7 elemente tehnologice consecutive:

1. Selectarea vacilor donatoare și de primire (pentru 1 donator 3 destinatari).

2. Inducerea hormonală a vânătorii și poliovulării în vacile donatoare. Sincronizarea vânătorii în recipiente.

3. Detectarea vânătorii și inseminarea de 3 ori a donatorilor. Destinatarii care și-au arătat vânătoarea nu sunt inseminați.

4. Extracția non-chirurgicală a embrionilor cu cateter cu 2 canale Foley.

5. Evaluarea calității embrionilor, crioconservarea, depozitarea și transportul acestora.

6. Selecția și pregătirea animalelor - destinatari care au prezentat sincronizare cu vânătoarea donatorilor (după stimulare hormonală sau spontan).

7. primitorilor de transplant nechirurgicale embrioni decongelate cateter metalic special după evaluarea microscopică preliminară a calității acestora, sau utilizând metoda de transplant direct (fără calitate evaluare) t. E. Imediat după decongelare paiele.

8. Obținerea și cultivarea vițeilor: vițe de taur pentru republica Gospplepredpriyatiy; puii - pentru a repara o cireadă de lapte în interiorul fermei.

Un alt factor determinant în selecția donatorilor este starea organelor de reproducere. În acest caz, involuția uterului trebuie completată și, în plus, corpurile galbene ale ciclului sexual sau foliculii în curs de dezvoltare se găsesc în ovare. Este recomandat pentru tratamentul hormonal să se selecteze animale nu mai devreme de 3 luni de la făt.

Ca destinatari, junincile sanatosi din punct de vedere clinic cu ingrasare, adica nu reprezinta o valoare de crestere, sunt mai des folosite la varsta de 16-18 luni. și greutatea în viu de 380-400 kg.

Pentru a provoca poliovulare, următoarele medicamente gonadotrope sunt utilizate în vacile donatoare:

1. Gonadotropina SLC numită folicon (Olanda) și legată de hormonii placentari (Tabelul 5.9).

2. hormon foliculostimulant, numit FSH-super (Rusia), care se referă la hormoni hipofizari (Tabelul 5.10).

3. Pentru sincronizarea ciclurilor sexuale, preparatele hormonale din seria de prostaglandine sunt de asemenea utilizate la donatori și la beneficiari: prosaltvin (Olanda), magestrofan (Rusia), la o doză de 2-3 ml pe 1 tratament.

Tabel. 5.9. Schema de tratament a vacilor donatoare cu folicon

Principalele metode tehnologice de lucru ale specialiștilor:

1. Evaluarea rectală preliminară a organelor genitale donatoare pentru prezența corpurilor galbene în ovare, care sunt deja palpate deja la 4 zile după ovulația foliculilor (adică evaluarea răspunsului la tratamentul hormonal).

2. Definiția stării uterului și a dimensiunii acestuia. După terminarea involuției, uterul are un răspuns contractil bine exprimat la palpare (rigiditate), o consistență densă și este bine capturat în mâna cercetătorului.

3. Prelucrarea meselor de lucru și a microscoapelor - 96% alcool - rectificat, iar mâinile specialiștilor - 70%. Sterilitatea în cutie este menținută cu ajutorul lămpilor bactericide. Preparatele sterile preparate, precum și hainele speciale și încălțămintea sunt folosite pentru muncă.

4. Extracția embrionilor se efectuează în ziua 7 după inseminarea vacilor donatoare. Pentru a face acest lucru, utilizați cateterul Foley.

5. Căutarea embrionilor sub microscop este efectuată la o mărire de 20 de ori, evaluarea finală fiind de 100 de ori mai mare. Lucrarea se desfășoară în condiții sterile într-o cameră specială - cutia unei stații de transplant fixă. Manipularea embrionilor din momentul primirii la transplant durează aproximativ 2 ore (Figura 5. 9).

6. Înainte de a transporta paiele de embrioni încărcate într-un cateter pentru transplant (Fig. 5.10), este plasat într-un capac sanitar și fixați sub haine, în special cusute în buzunarul interior al roba. Corectitudinea umplerii este controlată de căderea rezultată la capătul cateterului după apăsarea pistonului.

7. Transplantul non-chirurgical al embrionilor se efectuează în ziua 7 imediat după extragerea de la donatori. În această perioadă, organele sexuale ale animalului sunt cele mai sensibile la infecție, prin urmare, în timpul transplantului, trebuie să respectați cu strictețe regulile de asepsie.

8. Destinatarii sunt verificați pentru expresivitatea corpului galben din ovar, care este palpată sub forma unei ciupercități în formă de ciupercă pe suprafața sa. Dacă este slab exprimată sau absentă, atunci un astfel de animal este exclus din numărul de destinatari.

9. Înainte de transplantare animal face anestezie sacral, folosind 4 ml dintr-o soluție de novocaină 2% pentru prevenirea contracțiilor uterine în timpul transferului de embrioni.

Avantajele tehnologice ale metodei non-chirurgicale

Metoda non-chirurgicală din practica mondială este foarte promițătoare, deoarece oferă:

1. Posibilitatea de extragere a embrionilor direct pe fermă, mai degrabă decât în ​​încăperile de operare staționare.

2. Nu este nevoie de anestezie generală și de probabilitatea complicațiilor postoperatorii.

3. Simplitate în execuție.

4. Posibilitatea utilizării de vaci donatoare fără un risc special pentru viitoarea fertilitate.

Principalele elemente tehnologice ale pregătirii vacilor donatoare

și tehnologia de extracție a embrionilor:

1. Animalul este fixat într-un stand pe lanț, eliberând rectul din scaun.

2. Genitalia externă și partea interioară a cozii sunt spălate bine cu apă caldă și săpun, tratate cu o soluție de furacilină (1: 1000).

3. Pentru extragerea embrionilor din coarnele uterului, se utilizează un cateter Foley (Figura 5. 11).

Fig. 5. 11. cateter Foley pentru extragerea embrionilor de la vaci

Cateterul este format dintr-un tub de cauciuc (1), balonul gonflabil (2), patru găuri (3), amplasate la distanțe diferite pentru a asigura suprafață optimă de introducere și retragere a mediului de spălare. Sfârșitul părții de lucru a tubului (1) este umplut cu cauciuc (4), în interiorul cărora există un canal pentru fixarea vârfului metalic al stilet (5) și pentru a preveni posibila puncție-le o parte închisă a peretelui cateterului și țesutul corn uterin.

Un balon gonflabil (2), starea de funcționare a care este prezentat în fantomă, este plasat într-un tub de cauciuc cu dered sol- la capete (6) și canalul gonflabil (7) are o ieșire spre exterior (8). Partea finală a canalului gonflabil este realizată sub forma unei forme expandate (9). Capătul exterior al tubului de cauciuc este extins și în acesta este introdus un adaptor metalic (10) care are o blocareó(9) cu partea de capăt a adaptorului metalic introdusă în tub.

Factori care afectează viabilitatea embrionilor

atunci când le transplant la destinatari.

Diferențele semnificative în rezultatele embrionării embrionare în coarnele uterine sunt asociate cu următorii factori principali:

- Transferul de embrioni mai aproape de partea inițială a intrării în cornul uterin relativ dă performanțe scăzute grefarea lor în recipiente decât pentru transplant în vârful. Principalul motiv pentru aceasta ar putea fi o mare de aprovizionare de progesteron în zona uterului prin vasele de sânge, ceea ce contribuie la secreția glandelor uterine și asigură astfel o mai bună nutriție a embrionului în primele săptămâni de viață. Rezultatele transplantului în diferite zone ale uterului sunt prezentate în tabelul 5. 11.

Tabelul 5. 11. Eficacitatea transplantului de embrioni în funcție de locul de transplant

Vârsta embrionului, zile







Articole similare

Trimiteți-le prietenilor: