Histologie umană

să păstreze starea de viață a structurilor;

să fie suficient de subțire și transparentă să o studieze sub microscop în lumină transmisă;

să fie contrast, adică structurile studiate trebuie definite clar sub microscop;







preparatele pentru microscopie ușoară ar trebui să fie conservate pentru o lungă perioadă de timp și utilizate pentru reexaminare.

Aceste cerințe sunt îndeplinite la pregătirea preparatului.

3. Următoarele etape ale preparării preparatului histologic

Luând un material (bucată de țesut sau organ) pentru a pregăti medicamentul. Acest lucru ia în considerare următoarele puncte: un material de gard ar trebui să se desfășoare cât mai curând posibil după moartea sau sacrificarea animalului și, dacă este posibil, din obiectul viu (biopsie) structura celulei, țesutul sau organul de a conservat mai bine; Eșantionarea pieselor trebuie efectuată cu un instrument ascuțit astfel încât să nu se deterioreze țesuturile; Grosimea plăcii nu trebuie să depășească 5 mm, astfel încât soluția de fixare să poată pătrunde în grosimea plăcii; marcarea unei bucăți este obligatorie (numele organului, numărul animalului sau numele persoanei, data gardului etc.).

Fixarea materialului este necesară pentru a opri procesele de schimb și pentru a păstra structurile degradate. Fixarea se realizează cel mai adesea prin imersarea unei bucăți în lichide de fixare, care pot fi simple alcooli și formalină și soluția complexă Carnoy, fixativul Zincera și altele. Fixatorul provoacă denaturarea proteinei și astfel oprește procesele metabolice și stochează structurile în starea lor intravitală. Fixarea poate fi, de asemenea, realizată prin congelare (răcirea într-un curent de CO2, azot lichid etc.). Durata fixării este selectată experimental pentru fiecare țesut sau organ.

Turnarea pieselor în medii de etanșare (parafină, celloidină, rășini) sau congelare pentru subțierea ulterioară.

Pregătirea secțiunilor pe dispozitive speciale (microtome sau ultramicrotom) cu ajutorul cuțitelor speciale. Secțiunile pentru microscopie ușoară sunt lipite în diapozitive și pentru microscopie electronică - montate pe rețele speciale.

Colorarea secțiunilor sau contrastului lor (pentru microscopie electronică). Înainte de etanșarea secțiunilor, mediul de etanșare (deparafinarea) este îndepărtat. Contrastul structurilor studiate se realizează prin colorare. Coloranții sunt împărțiți în bază, acide și neutri. Cele mai utilizate pe scară largă sunt coloranții de bază (de obicei, hematoxilina) și coloranții acide (eozina). Adesea folosiți coloranți complexi.

Iluminarea secțiunilor (în xilen, toluen), închisoare în rășini (balsam, polisterol), închidere cu alunecare.

După aceste proceduri efectuate în mod consecvent, preparatul poate fi studiat sub microscopul luminos.

În scopul microscopiei electronice, există anumite trăsături în etapele de pregătire a preparatelor, dar principiile generale sunt aceleași. Principala diferență constă în faptul că pregătirea histologică pentru microscopia luminoasă poate fi stocată mult timp și reutilizată. Secțiunile pentru microscopia electronică sunt utilizate o singură dată. În același timp, obiectele de interes sunt fotografiate mai întâi, iar structurile sunt studiate deja pe modelele de difracție electronică.

Din țesuturile de consistență lichidă (sânge, măduvă osoasă și altele), preparatele se fac sub formă de frotiu pe diapozitiv, care sunt, de asemenea, fixate, colorate și apoi studiate.

Din organe parenchimatoase casante (ficat, rinichi, etc.) sunt realizate în amprenta Preparatele sub forma corpului: după interstițiul fracturii sau organ la organ defectoscopie aplicat sticlă diapozitive pe care sunt lipite unele celule libere. Preparatul a fost apoi fixat, se colorează și studiat.

În final, unele dintre corpurile (mezenter, PIA) sau de preparate de țesut conjunctiv în vrac sunt realizate prin întindere a filmului sau zdrobirea între cele două geamuri și cu fixarea ulterioară, colorare și turnarea în rășină.







lumină microscopie (rezoluție 0,2 microni) este cel mai frecvent tip de microscopie;

microscopie ultravioletă (rezoluție 0,1 pm);

microscopie fluorescentă (fluorescentă) pentru determinarea substanțelor chimice în structurile avute în vedere;

microscopie cu contrast de fază pentru studierea structurilor în preparate histologice nevopsite;

polarizare microscopie pentru studiu, în principal de structuri fibroase;

microscopie într-un câmp întunecat pentru studiul obiectelor vii;

microscopie în lumină incidentă pentru a studia obiecte groase;

microscopie electronică (rezoluție de până la 0,1-0,7 nm), cele două versiuni translucide (transmisie) cu microscopie electronică și scanare sau microscopie raster oferă o afișare a suprafeței ultrastructurilor.

Histochimice și metode citochimice permite determinarea compoziției substanțelor chimice și cantitatea acestora, chiar și în structurile studiate. Metoda se bazează pe efectuarea reacțiilor chimice cu reactivii utilizați și substanțele chimice din substrat pentru a forma un produs de reacție (contrast sau fluorescență), care este apoi determinată prin lumina sau microscopie cu fluorescență.

Metoda de centrifugare diferențială permite studierea organelurilor individuale sau chiar a fragmentelor izolate din celulă. Pentru aceasta felie examinate organ se triturează, se toarnă soluție salină normală și apoi dispersată într-o centrifugă la viteze diferite (2-150 th.) Pentru a da fracțiuni de interes sunt apoi studiate prin diverse metode.

Metoda de interferometrie face posibilă determinarea masei uscate de substanțe în obiecte vii sau fixe.

Metode Immunomorfologichesky permite utilizarea reacțiilor pre-imune efectuate pe baza interacțiunii antigen-anticorp, pentru a determina o subpopulație de limfocite pentru a determina gradul de celule străinătății efectua tipizarea histologice a țesuturilor și organelor (determinarea histocompatibilitate) pentru transplantul de organe.

Metoda de cultură celulară (in vitro, in vivo) este creșterea celulelor într-un tub de testare sau în capsule speciale în organism și studiul ulterior al celulelor vii sub microscop.

Unitățile utilizate în histologie

Pentru a măsura structurile în microscopie luminoasă, se utilizează în principal micrometre: 1 μm este 0,001 mm; electron microscopie foloseste nanometri: 1 nm este 0.001 μm.

5. În histologia dezvoltării histologice se disting trei perioade convenționale:

Perioada Domikroskopichesky (în IV. BC. E. La 1665 YG) asociate cu numele lui Aristotel, Galen, Avicenna Vesalius, caracterizat uterină și încercările de izolare la animale și oameni de țesut neomogene (tare, moale, lichide și așa mai departe) și folosind metode de disecție anatomice.

O atenție deosebită a fost acordată studiului structurii celulei. Jan Purkinje a descris prezența "protoplasmei" (citoplasma) și a nucleului la animale, iar puțin mai târziu R. Brown a confirmat prezența nucleului în majoritatea celulelor animale. Botanistul M. Schleiden a devenit interesat de originea celulelor. Rezultatele acestor studii au permis T. Schwan, pe baza rapoartelor lor, să formuleze o teorie celulară (1838-1839) sub forma a trei postulate:

toate organismele vegetale și animale sunt alcătuite din celule;

toate celulele se dezvoltă în conformitate cu principiul general al citoplastiei;

fiecare celulă are o activitate vitală independentă, iar activitatea vitală a organismului este suma activității celulelor.

Cu toate acestea, în curând R. Virchow (1858) a clarificat faptul că dezvoltarea celulelor se realizează prin împărțirea celulei originale (orice celulă din celulă). Dispozițiile elaborate de T. Shvan, teoria celulelor sunt relevante pentru ziua de azi, deși este formulată diferit.

Teorii moderne ale teoriei celulare:

celula este cea mai mică unitate a celor vii;

celulele organismelor animale sunt similare în structură;

înmulțirea celulelor apare prin împărțirea celulei originale;

organismele multicelulare sunt ansambluri complexe ale celulelor și derivate ale acestora, unite în sisteme de țesuturi și organe, legate între ele de forme celulare, umorale și nervoase de reglementare.

Îmbunătățirea în continuare a microscoapelor, în special crearea obiectivelor achromatice, a făcut posibilă descoperirea în celule a unor structuri mai mici:

centrul celulelor Hertwig, 1875;

aparatul reticular sau complexul Golgi, 1898;

mitocondria Benda, 1898

Stadiul actual de dezvoltare a histologiei începe în 1950, când microscopul electronic a fost folosit pentru a studia obiecte biologice, deși microscopul electronic a fost inventat mai devreme (E. Ruska, M. Knoll, 1931). Cu toate acestea, pentru stadiul modern al dezvoltării histologice, introducerea nu numai a unui microscop electronic, dar și a altor metode este tipică: cito- și histochimie, istoriografia și alte metode moderne menționate mai sus. În acest caz, se folosește de obicei un complex de metode diferite, ceea ce face posibilă compilarea nu numai a unei imagini calitative a structurilor studiate, ci și pentru obținerea unor caracteristici cantitative exacte. În mod special utilizate pe scară largă în prezent sunt diferite tehnici morfometrice, inclusiv sisteme automate de prelucrare a informațiilor primite prin intermediul calculatoarelor.







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: