Determinarea hormonilor gonadotropici în urină, metode de cercetare

Determinarea hormonilor gonadotropici în urină vă permite să studiați funcția gonadotropică a glandei pituitare. Metoda de determinare a gonadotrofinei hormoni in urina GS Stepanova pe baza adsorbției lor pe adsorbant molecular - caolin din urină într-un mediu acid, eluție alcalină de caolin și precipitarea unui volum de cinci ori de acetonă rece.







Ca procedură de detoxificare, a fost sugerată spălarea de trei ori a precipitatului cu acetonă pură, urmată de o spălare triplă cu eter pentru anestezie. Urina zilnică colectată fără conservant, depozitată la frigider. Depozitarea pe termen lung este nedorită. Din cantitatea zilnică de urină, 1 L se ajustează cu acid acetic concentrat la pH 4 (dacă diureza zilnică a fost mai mică de 1 L, se adaugă până la 1 L cu apă distilată). La urină acidificată se adaugă 50 ml dintr-o soluție de 20% dintr-o suspensie apoasă de caolin și amestecul este agitat timp de o oră pe un aparat de agitare. Kaolinul cu hormon gonadotropic adsorbit pe acesta este colectat într-un tub de centrifugare de 500 ml prin centrifugare timp de 10 minute la 2500-3000 rpm. Supernatantul care conține substanțe toxice solubile în apă și săruri anorganice este aruncat.

70 ml de acid clorhidric 0,1 N se toarnă în precipitatul de caolin într-un tub de centrifugare. soluție de hidroxid de sodiu, precipitatul este triturat cu atenție până la obținerea unei suspensii omogene. Verificați pH-ul și, dacă este necesar, aduceți-l până la 10 litri de acid acetic. Suspensia este centrifugată timp de 15 minute la 2500-3000 rpm. După centrifugare, supernatantul (extractul alcalin) se toarnă într-un cilindru cu o plută de 500 ml conținând 350 ml de acetonă răcită. Cilindrul este plasat în frigider timp de 18-20 ore pentru a precipita complet gonadotropinele, care cad sub formă de fulgi de culoare brun deschis. După 18-20 ore, supernatantul limpede de acetonă este drenat. Reziduul de acetonă și precipitatul este transferat într-un tub de centrifugare cu o capacitate de 25-50 ml și centrifugat timp de 10 minute la 3000 rpm.







Ca procedură de detoxificare, spălarea triplă a restului de caolin-acetonă se efectuează cu 20-25 ml de acetonă pură și de trei ori cu 20 ml de eter pentru anestezie. După spălare cu eter, precipitatul se usucă într-o baie de apă la o temperatură de 30-40 ° C pentru a se îndepărta urmele de eter. Un astfel de extract uscat poate fi depozitat în frigider timp de 12 luni sau mai mult (depozitate în aceleași eprubete în care sa efectuat spălarea). Precipitatul uscat este o pulbere brun deschis, cântărind 450-950 mg.

Extractul HCG este injectat sub piele o dată pe zi, timp de trei zile, imature șoareci albi femele la vârsta de 20-22 de zile, cu o greutate de 7-9 g la 72 ore după prima injecție, animalele au fost decapitate. Uterul și ovarele sunt excizate, sunt eliberate din lichid prin disecție, uscate cu hârtie de filtru și cântărite rapid pe cântare de torsiune. Pentru control, se utilizează greutatea uterului animalelor intacte (5,6-7,8 mg). Fiecare extract "principal" este determinat în diluții 2-4.

Greutatea uterului sub influența hormonului gonadotropic crește de 7-9 ori. Rezultatele studiilor sunt determinate în unitățile de master-șoarece (MME). 1 MME este egală cu cantitatea de hormon gonadotropic care este capabilă să mărească greutatea uterului femelelor imature de șoareci albi la 100% față de control.

La femeile cu un ciclu menstrual-ovarian normal, eliberarea zilnică de hormoni gonadotropi variază de la 7 la 174 MIU, cu menopauză - 274 ± 11,5 MIU.







Articole similare

Trimiteți-le prietenilor: