Umplerea mediilor

Pentru a obține secțiuni histologice subțiri (de până la 6 microni), un material fix și spălat trebuie turnat într-un mediu dens, care a fost impregnat cu bucăți de țesut. În funcție de metoda de dizolvare, toate mediile de turnare sunt separate în solubile în solvenți organici și solubili în apă. Printre acestea se numără parafina, polimerii din plastic pe bază de parafină, celloidină, al doilea - gelatină, polietilenglicoli, poliesteri, unele metacrilați.








Parafina - un amestec de hidrocarburi cu masă moleculară mare, produs de distilare a uleiului; este dizolvat în anilină, benzen, ulei de bergamot, celosolvent, cloroform, decalin, dioxan, butanol, propanol, toluen, tricloretilenă, xilen. Fiecare dintre acești solvenți poate fi utilizat ca mediu intermediar între alcool și parafină.
Punctul de topire al diferitelor parafine este în intervalul de la 27 până la 62 ° C. În tehnica histologică se utilizează parafină cu un punct de topire de 56 ° C.
O serie de firme străine produc o parafină specială pentru studii histologice, conținând diferiți polimeri plastici, cum ar fi dimetilsulfoxidul (Paraplast, Histoplast C, Hystoses). În mod separat, ar trebui să identificăm un nou mediu de umplere a parafinei omogenizate pentru Histomix®, conținând în compoziție ceară naturală și aditivi de polimer sintetic.
Din punct de vedere al tehnicii histologice, condițiile de solidificare a parafinei la turnarea obiectului sunt foarte importante. Când ceara topită începe să se solidifice, există o peliculă pe suprafața sa sub forma de nori Fulgii, și apoi începe să formeze cristale, care este format din ceară de parafină. Această modificare a stării parafinei atrage după sine o scădere a volumului cu aproximativ 5-10%, ceea ce determină deformări constante ale țesutului încorporat în parafină. Cristalele de parafină au forma de plăci sau ace mai mult sau mai puțin subțiri, în funcție de răcire. Răcirea este mai lentă, cu atât mai subțiri sunt cristalele. Trebuie remarcat faptul că cristalele care cad în spațiile de țesut atunci când obiectul este încorporat în parafină nu exercită un efect de deformare datorită mărimii lor mici. Atunci când parafina începe să se solidifice - este opacă, apoi devine transparentă, cu o suprafață lucioasă. În acest moment, compresia parafinei încetează.






Un rol foarte important în solidificarea parafinei este dizolvat în aer. Când un anumit volum de parafină este răcit, stratul său de suprafață se solidifică mai întâi. Deoarece solubilitatea aerului din parafina înghețată este redusă, aerul este eliberat în punctul de contact dintre parafina lichidă și stratul de solidificare. O parte din acest aer se dizolvă în masa centrală mai caldă și încă lichidă, în timp ce cealaltă parte rămâne în stare gazoasă între cristalele de parafină. În acest fel pot fi create cavități umplute cu aer. Acest lucru determină o apariție granulară în centrul blocului după solidificare. Pentru a evita o astfel de granulare a parafinei în timpul închiderii obiectului, pot fi utilizate diferite mijloace. Bucăți mici de material (2-3 mm) pot fi închise pe sticla de ceas într-o cantitate mică de parafină, care este turnată încet printr-o pipetă. Pentru obiecte mai mari, rezultate bune se obțin prin turnarea într-un vas profund și îngust; în timp ce solidificarea parafinei începe în profunzime și se extinde în sus, iar aerul eliberat este eliberat pe suprafață.
Pentru turnarea în parafină, obiectul trebuie să fie mai întâi deshidratat, apoi să fie trecut printr-un mediu intermediar, solubil atât în ​​parafină, cât și în alcool.
Astfel, în procesul de turnare a unui obiect în parafină, se disting patru etape principale:
- deshidratare cu alcool,
- impregnarea cu un mediu intermediar (xilen, toluen, benzen, etc.)
- impregnarea cu parafină,
- concluzia finală în parafină.

Celloidina este o nitroceluloză care se dizolvă bine în eter. În practica histologică se utilizează 2%, 4% și 8% soluții de celloidină, care sunt preparate din plăci cu celloidină sau spălate din emulsie și din peliculă de raze X uscate.
Turnarea țesuturilor în celloid este în prezent mai puțin populară decât parafina și este folosită în principal pentru turnarea țesuturilor greu de tăiat și a obiectelor de dimensiuni mari, din care este dificil să se obțină secțiuni de parafină bune. Celloid de umplere este, de asemenea, utilizat în cazurile în care este necesar să se evite expunerea la materialul studiat la temperaturi ridicate. În plus, turnarea materialului în celloidină face posibilă obținerea unor rezultate mai bune atunci când există cavități mari, lacune și straturi de consistență diferite în obiecte.
Eterul și celloidul uscat sunt inflamabile, așa că trebuie să aveți grijă când le manipulați.

Turnarea în celloidin-parafină recomandat pentru tratamentul obiectelor care sunt ușor comprimate când piesa turnată ceară, de exemplu hematopoieză, țesut mezenchimal, precum și de organe și țesuturi, care are o structură multistrat (trahee, piele, etc.). În acest caz, se folosesc aspectele benefice ale ambelor metode.

Turnând în gelatină este utilizat pe scară largă pentru a studia obiecte, ușor de dezintegrare în tăiere la criomicrotom, în fabricarea secțiunilor cu organe bogate în țesut conjunctiv, studiul obiectelor embrionare, precum și de grăsime și incluziuni lipidice. Se utilizează gelatină alimentară transparentă cristalină, din care se prepară soluții de 25% și 12,5%.

Turnarea în materiale plastice solubile în apă sa dovedit în histochemie, în special pentru detectarea lipidelor și a enzimelor. Sunt utilizate materiale plastice sintetice - polietilen glicol, polivax, metacrilat de metil, etc.







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: