A61K39 / 08 - Clostridium, de exemplu tetanosul Clostridium
Proprietarii brevetului RU 2428202:
Instituția federală de stat "Centrul Federal pentru Securitatea Toxicologică și Radiație a Animalelor" (FSUE "FTPRB-VNIVI") (RU)
Invenția se referă la domeniul microbiologiei veterinare. Vaccinul a conținut următoarele componente într-un raport de 1 litru de vaccin: Suspensia de celule tulpina №28 tip Cl.perfringens A în mediul de cultură la o concentrație de 3,5 10 12 -4.0 × 10 12 cm 3 - 140,0-160,0 ; tulpină suspensie celulară №392 Cl.perfringens tip C în mediul de cultură la o concentrație de 3,5 10 12 -4.0 × 10 12 cm 3 - 140,0-160,0; o suspensie de celule de tulpină # 213 de tip C.perfringens de tip D într-un mediu de cultură la o concentrație de 3,5 x 10 12 -4,0 x 10 12 cm3 - 140,0-160,0; Celulele de suspensie ale tulpinii de E. coli KB-1, care cuprinde o soluție salină K99 antigen adeziv la o concentrație de 10 12 -120 100 * 10 12 cm 3 - 25,0-30,0, celulele de suspensie ale tulpinii de E. coli PP-3 conținând antigenul A20 adeziv în soluție salină fiziologică cu o concentrație de 100,10 12 -120,10,12 cm3 - 25,0-30,0; hidroxid de aluminiu, 6%, cm3 - 200,0-250,0; formalin, cm3 - 4,0-5,0; anatoxine termolabile și termostabile de tulpini de E. coli K99 și E. coli PZ-3 în raportul 1: 1 în mediul de cultură cu un titru în RDP: 1: 8-1: 16, L: până la 1 L. Vaccinul provoacă formarea unei imunități obositoare la animale tinere și animale adulte de 12 luni cu dublă vaccinare. La vițeii obținuți din vaca vaccinată, după administrarea de colostru se formează imunitate colostrală de până la 1,5 luni. 2 tab.
Invenția se referă la domeniul microbiologiei și biotehnologiei veterinare, în special la producerea și utilizarea agenților biologici împotriva enterotoxemiei anaerobe și a diareei escherichia de viței.
Ehsherihiozom - ostroprotekayuschih boli infecțioase tinere manifestată prin septicemie, toxemia și enterită, deshidratare, leziuni ale sistemului nervos, creșterea depresie și slăbiciune, și, uneori, pneumonie si artrita. Boala cauzată de tulpini enterotoxigenă de Escherichia coli (E. coli), sintetizarea antigene de adeziune K88, K99, 987R, F41, A20, Att25. Viței mai mult de 80% din cazuri ehsherihiozom cauzate de bacterii E. coli, care produc adeziunea Antigenii A20 și K99. Pentru prevenirea ehsherihioza în Rusia a folosit „vaccin polivalent împotriva gidrookisalyuminievaya colibaciloză (ehsherihioza) purcei, viței, miei“, „Vaccin ehsherihioza agricole Permise „Coley-Wack“ care conțin antigene adezive K99, K88, 987R, F41, reactivitatea TL, TC-anatoxine și antigene somatice ale serotipurilor 078, 0141. Aceste vaccinuri au sporit pentru vite datorită conținutului său de tulpini extrem de toxice de E. coli, antigene care produc adeziune K88 și 987R, nu cauzează boala la viței.
Vaccinul împotriva enterotoxemiei anaerobe a vițeilor din Federația Rusă nu a fost dezvoltat și nu este produs.
Se știe că enterotoxemia anaerobă la viței se manifestă adesea ca o infecție mixtă cu escherichioză. Prin urmare, este urgentă dezvoltarea unui vaccin asociat împotriva enterotoxemiei anaerobe și a diareei escherichia vițeilor.
Incapacitatea de a utiliza acest vaccin pentru imunizarea vițeilor este spectrul său îngust antigenice (absenta in antigenele vaccin tipurile Cl. Perfringens A, D, și antigenul adeziv A20 E. coli, care provoacă frecvent boala la viței), reactivitatea ridicată datorită conținutului său de tulpini foarte toxice care produc antigene adezive E. coli K88 și 987R, nu provoacă boala la viței.
Obiectivul invenției este creșterea activității antigenice și imunogene, lărgirea spectrului de acțiune și a efectului protector al vaccinului, precum și reducerea reactogenității acestuia.
Problema este rezolvată prin aceea că vaccinul contra anaerobă și esherihioznoy ENTEROTOXIEMIE vițel diareea asociată care cuprinde antigene clostridiană, antigene de Escherichia, inactivator formalina și un adjuvant al unei antigene clostridiană conține toxina B și celulele de suspensie ale tulpinii №28 Cl. perfringens tip A, toxină B și suspensie celulară din tulpina nr. 392 CI. perfringens tip C, toxina B și celulele de suspensie ale tulpinii №213 Cl. antigeni D perfringens tip de Escherichia - suspendarea celulelor KV-1 având K99 antigen adeziv în ser fiziologic tulpina E. coli, celulele de suspensie ale tulpinii E. coli PL-3, care cuprinde antigenul adeziv A20 în termolabile saline și anatoxine termostabile în cultură medie obținută prin cultivarea tulpinilor de E. coli KV-1 și PP-3 în mediul de cultură al adjuvanților - gelul de hidroxid de aluminiu, cu următorul raport de componente per 1 litru de vaccin:
Suspensia celulelor din tulpina # 28 Cl. perfringens tip A într-un mediu de cultură cu o concentrație de 3,5 × 10 12 -4,0 × 10 12 cm3 - 140,0-160,0.
Suspensia celulelor din tulpina nr. 392 Cl. perfringens tip C într-un mediu de cultură cu o concentrație de 3,5 × 10 12 -4,0 × 10 12 cm3 - 140,0-160,0.
Suspensia celulelor din tulpina # 213Cl. perfringens de tip D într-un mediu de cultură cu o concentrație de 3,5 × 10 12 -4,0 × 10 12 cm3 - 140,0-160,0.
O suspensie de celule de E. coli KB-1 conținând un antigen K99 de adeziune în soluție salină fiziologică la o concentrație de 100 x 1012-120 x 10 12 cm3 a fost de 25,0-30,0.
O suspensie celulară de tulpină E. coli PZ-3 conținând antigenul A20 adeziv în soluție salină fiziologică la o concentrație de 100 x 10 12 -120 x 10 12 cm3 este de 25,0-30,0.
Hidroxid de aluminiu, 6%, cm3 - 200,0-250,0.
Formalin, cm3 - 4,0-5,0.
anatoxine TC- și tulpinile de E. coli TL KV-1 E. coli și PP-3 într-un raport de 1: 1 într-un mediu de cultură cu un titru în DSA 1: 8-1: 16, l. - Până la 1.
Agenții clostridiotici sunt obținuți din tulpinile de Cl. perfringens Nr. 28, Nr. 392, Nr. 213, referindu-se la serogrupurile A, C și D.
Tulpinile au următoarele proprietăți. Pe mediul Kitta-Tarozzi, bacteriile produc o creștere rapidă, cu o turbiditate uniformă puternică a bulionului și o producție abundentă de gaze. În frotiurile de cultură, bacteriile sunt bastoane Gram-pozitive scurte, groase, cu capete tăiate fără spori. Pe agar de sânge de glucoză, bacteriile formează colonii mari, netede, convexe cu marginile drepte, înconjurate de o zonă de hemoliză puternică opacă (incompletă). Culturile sunt toxice, cauzând moartea soarecilor albi timp de 12 ore.
antigenele Esherihioznye epiteliotropnyh preparate din tulpini de Escherichia coli enterotoxigenă «KB-1" și«PP-3», izolat din intestinul subțire al pacienților cu diaree vițeilor nou-născuți.
Tulpinile au următoarele proprietăți.
Proprietățile morfologice: barele polimorfe, gram-negative, nu formează un spor, sunt localizate numai în frotiuri.
Proprietățile culturale: o carne-peptonă tulpini bulion provoca turbiditate intensă, pe formă agar carne-peptonă suculent, lucios, convex, margini netede cu colonii netede formă rotunde. Pe mediul endo, coloniile sunt colorate cu zmeură cu nuanță metalică.
Proprietățile enzimatice: glucoza fermentată, lactoza, manitolul, xiloza și alți carbohidrați, nu lichefiază gelatina, nu formează un indol, nu formează hidrogen sulfurat.
Proprietăți serologice: au activitate antigenică ridicată în RA, au antigeni specifici pentru grupuri și specii specifice, tulpina KV-1 sintetizează antigenul adeziv K99, tulpina "P3-3" - antigenul adeziv A20.
Includerea în compoziția antigenelor vaccinului asociate în cantități eficiente asigură un efect sinergie, manifestat în creșterea intensității și duratei imunității.
EXEMPLUL 1 Pentru producerea componentelor clostridiei ale unui vaccin asociat, tulpinile de producție Cl. perfringens №28, №392, №213 cultivate pentru mediu de carne hepato-cazeină în reactor timp de 5-6 ore la temperatura de 37-38 ° C, înainte de celule de depozitare de cel puțin 4 miliarde / cm3 microbiene. Toxicitatea culturii crescute este verificată pentru șoarecii albi, care trebuie să moară după injectarea intravenoasă a culturii de 0,5 cm3 timp de până la 24 de ore.
Pentru a produce vaccinul, se utilizează culturi care conțin cel puțin 6.000 DLM / cm pentru șoarecii albi. În reactor s-a adăugat formalină la o concentrație de 0,7%, menținut 8 zile la o temperatură de 37-38 ° C, s-a adăugat 6% hidroxid de aluminiu procente la concentrația de 10%, menținută 3-5 zile și a îndepărtat 50% din volumul total de supernatant lichid, setați pH-ul la 7,2-7,4.
Exemplul 2: Componentele de escherichioză sunt obținute din tulpinile KB-1 și P3-3 ale E. coli care sintetizează antigenii de adeziune K99 și, respectiv, A20. Aceste tulpini provoacă moartea șoarecilor albi care cântăresc 14-16 g timp de 24 de ore după infecția intraperitoneală într-o doză de 500 milioane mc.
Agarul de peptonă din carne (pentru tulpina P3-3) și mediu Mink (pentru tulpina KB-1) sunt utilizați pentru a obține masa bacteriană E. coli. În acest scop, aceste medii nutritive sunt turnate în matrice de 300 cm3 și sterilizate la 0,5 atm (110 ° C) timp de 15 minute. După ce mediile se solidifică, se inoculează culturi de suspensii de 3,0 cm 10 miliarde. Culturile sunt păstrate într-un termostat la o temperatură de 37-38 ° C. După 24 de ore, coloniile crescute de culturi de E. coli sunt spălate cu o soluție sterilă de clorură de sodiu 0,85% și suspensia este preparată la o concentrație de 100-120 de miliarde de metri cubi. în 1 cm3 pentru un standard de turbiditate bacteriană sau optică GISK. Tarasevich.
Inactivarea suspensiei bacteriene se efectuează cu formalină. Pentru a face acest lucru, se adaugă formalină în suspensie la 0,5% din concentrația finală și se menține timp de 4-5 zile într-un termostat la o temperatură de 37-38 ° C. Verificați apoi completarea inactivării prin însămânțarea pe mediile nutritive adecvate.
Pentru fiecare tulpină toxoid E. coli au fost însămânțate în reactor separat de Hottinger bulion, cultivate 5-7 zile la 37-38 ° C Determinați concentrația toxinelor TL-, TC în reacția de precipitare prin difuzie (RDP). Titrul toxinelor TL-, TC în lichidul de cultură trebuie să fie de cel puțin 1: 4-1: 8. Apoi se adaugă la cultura la 0,4-0,5% formalină și menținut la o temperatură de 37-38 ° C, timp de 10-12 zile, apoi se adaugă 6% hidroxid de aluminiu procente la concentrația de 10%, a menținut timp de 3 zile și s-a îndepărtat 50% din volumul total al supernatantului, a stabilit pH-ul la 7,2-7,4.
Exemplul 3. Controlul vaccinului pentru sterilitate, inofensivitate și activitate imunogenică. Pentru a verifica sterilitatea 6 flacoane din fiecare serie de vaccin pentru a face culturile BCH IPA, MPPB sub ulei mineral și agar Saburo 2 tuburi pentru fiecare flacon. Culturi cu media incubate la o temperatură de 37-38 ° C, și Saburo Agar - la o temperatură de 22-23 ° C, timp de 15 zile. În acest caz, mediul nutritiv trebuie să rămână steril.
Pentru a verifica nocivitate selectat 10 șoareci albi de 16-18 g greutate corporală și administrată la o doză de vaccin au 0,5 cm 3 subcutanat. Vaccinul este considerat inofensiv dacă mouse-ul timp de 10 zile de la administrarea vaccinului să rămână în viață și sănătos clinic. Vaccinurile de control imunogen efectuat pe 3 iepuri care medicamentul se administrează intramuscular de două ori la un interval de 15 zile la o doză de 4 cm3 după 20 de zile după a doua injecțiile în fiecare iepure serul sanguin titrului de anticorpi antitoxice determinat CI toxina reacție de neutralizare. perfringens pe șoareci albi. Vaccinurile sunt considerați activi împotriva ENTEROTOXIEMIE dacă serul sanguin al iepurilor imunizați protejează șoarecii de cel puțin două dintre cele trei făcute în expertiză, cu moartea tuturor șoarecilor din grupul de control. Activitatea imunogen a unui vaccin pentru a testa pentru Escherichia 40 șoareci albi cântărind 16-18 g 20 vaccin este administrat la șoareci (experimental) subcutanat de două ori cu un interval de 10 zile, la o doză de 0,3 cm 3 și 20 de șoareci (control) nu au fost vaccinate. 15 zile după a doua administrare a vaccinului administrat la animale intraperitoneal podtitrovannuyu doză letală de cele două tulpini de control de E. coli (K99 și A20), folosind pentru fiecare tulpină de E. coli 10 și 10 animale nevaktsinirovanngh vaccinate. Vaccinul este considerat activ împotriva E. coli de supraviețuire cu cel puțin 7 din 10 vaccinate și moarte de cel puțin 8 nevaktsinirovanngh șoareci albi.
EXEMPLUL 4 Eficacitatea vaccinului a fost evaluată de numărul de bolnavi și morți prin anaerobă și esherihioznoy ENTEROTOXIEMIE diaree la viței economie nefavorabilă a acestor infecții. Producția de testare a seriei experimentale de vaccin asociat realizat în SKHPK „Dzevyatouski“ regiune Laishevo Tatarstan dezavantajate permanent de esherihioznoy ENTEROTOXIEMIE anaerobă și diaree. Experimentele au fost efectuate la 46 de vaci glubokostelnyh și 60 de viței 30-35 de zile de varsta. Vacile vaccin a fost administrat subcutanat la o doză de 10 cm 3 de două ori 50-60 zile înainte de fătare până la 15-18 zile interval. Vițeii au fost imunizați la vârsta de 18-20 de zile și de două ori cu un interval de 15-18 zile într-o doză de 4 cm 3. În urma studiilor au stabilit că vaccinul este inofensiv pentru animale, nu provoacă complicații la animale și produce imunitate postvaccinare activă. De exemplu, într-un grup de viței nou-născuți derivate de la vaci vaccinate, incidența a fost de 13,1%, siguranța - 89,9%, în timp ce în grupul de viței provenite de la vaci nevaccinate, aceste cifre au fost 78,8 și 77,7%, respectiv. În grupul vițeilor în vârstă vaccinați cu vaccinul asociat, incidența esherihioznoy enterotoxemia anaerobă și diareea a fost de 8,3%, siguranța 91,6%, în timp ce în grupul de viței nevaccinate, aceste cifre au fost 21,9 și 73,9%. De aceea, un vaccin împotriva anaerob și esherihioznoy ENTEROTOXIEMIE diareea vițeilor are o activitate imunogenă suficient de mare. Aplicarea ei ca o măsură profilactică pentru economie permanent disfunctionale, care a redus incidența vițeilor nou-născuți de 6,4 ori, viței mai mari - în 2,63 ori, îmbunătățind astfel siguranța vițeilor nou-născuți cu 12,2%, vițeii mai în vârstă - 17,7 % (a se vedea tabelul 2).
Exemplul 5. Informații generale privind proprietățile biologice, ordinea de aplicare a vaccinului asociat cu enterotoxemia anaerobă și diareea escherichia de viței.
Vaccinul este un lichid opac de culoare galben-paie, cu un precipitat abundent cenușiu, care, atunci când este agitat viguros, se rupe ușor, formând o suspensie omogenă.
Flacoanele cu vaccin sunt ambalate în cutii de placaj, pentru a asigura integritatea, flacoanele sunt înfășurate cu hârtie sau aliniate, în sezonul rece - cu bumbac sau alte materiale termoizolante. În fiecare cutie, puneți 3 copii. instrucțiuni privind utilizarea vaccinului.
Vaccinul este transportat și depozitat într-un loc uscat, protejat de lumină, la o temperatură de 4 până la 8 ° C. Perioada de valabilitate a vaccinului este de 12 luni de la data fabricației, în condițiile de transport și depozitare.
Vaccinul cu integritatea ruptă a sticlei și expus la congelare, fără etichete, prezența impurităților străine, precum și nefolosite în ziua deschiderii flaconului, este aruncat. Vaccinul respins este fiert timp de 15 minute.
Componentele active ale antigenilor vaccin sunt bacterii Clostridium perfringens tipuri de antigene A, C, D, și Escherichia coli K99 sintetizare adeziv, A20 și lor și TC-TL-toxoizi. Toate componentele vaccinului sunt inofensive, foarte imunogene și pe deplin compatibile.
Vaccinul, administrat de două ori cu un interval de 18-20 zile în doze adecvate, cauzează formarea unei imunități intense timp de 12 luni la bovinele tinere și adulte. La vițeii obținuți din vaca vaccinată, după administrarea de colostru se formează imunitate colostrală de până la 1,5 luni.
Cum să utilizați vaccinul
Vaccinul este utilizat în scopuri profilactice în fermele amenințate și permanent disfuncționale pentru enterotoxemia anaerobă și diareea escherichia de viței.
Vaccinările sunt supuse animalelor sănătoase din punct de vedere clinic. În ferme, nefavorabile pentru anaerobă și ehsherihioza ENTEROTOXIEMIE, începe cu imunizarea preventivă specifică a vacilor gestante și juninci, care vaccinul este într-o doză de 10 cm3 se injectează subcutanat de două ori timp de 50-60 de zile înainte de fătare la zile intervale de 14-15. Vițeii au fost obținute de la vacile vaccinate au fost vaccinați la vârsta de 18-20 de zile într-o doză de 3 cm3, de două ori cu un interval de 14-15 zile.
Înainte de utilizare, flacoanele cu vaccin trebuie agitate bine și la rece, încălzite într-o baie de apă la 37-38 ° C.
Laptele și produsele de sacrificare obținute de la animale vaccinate în orice moment după vaccinare sunt puse în aplicare fără restricții.
Când efectuați vaccinările, trebuie să respectați regulile de asepsie și antiseptice. Locul administrării vaccinului este dezinfectat cu soluție de etanol 70%. Seringile și acele sunt sterilizate prin fierbere înainte de utilizare, pentru fiecare animal se utilizează un ac separat.
Odata cu vaccinarea animalelor, este necesar sa se efectueze masuri veterinare si sanitare care vizeaza distrugerea bolii infectioase.
Contraindicații:
- Nu vaccinați animale bolnave și slabe;
- Nu utilizați seruri hiperimune sau imunosupresoare timp de o lună după vaccinare.
Măsuri de prevenire personale
La efectuarea vaccinării, este necesar să se respecte normele de igienă personală adoptate la lucrul cu medicamentele. În locurile de muncă, trebuie să existe un kit de prim ajutor pentru prim ajutor.
Dacă vaccinul lovește părțile expuse ale corpului sau ale membranelor mucoase ale ochilor, gurii, nasului și după terminarea lucrului, mâinile și alte zone expuse ale corpului sunt spălate cu săpun și apă.
Vaccinul după data de expirare nu este supus aplicării. Vaccinul trebuie ținut la îndemâna copiilor.
Trimiteți-le prietenilor: