Tehnica histologică

Tehnica histologică este tehnica de pregătire a preparării histologice. Specimenul histologic poate fi o tăietură a organului, a țesutului, a unei frotiuri, a unei amprente, a unui preparat de film, a unei culturi de țesuturi. În toate cazurile, preparatul histologic trebuie să îndeplinească următoarele cerințe:

1. Fiți transparenți, adică să curgă un curent de lumină. Pentru a face acest lucru, fabricați secțiuni destul de subțiri ale organelor, țesuturilor, celulelor.

2. Contrast, care se obține prin colorarea medicamentului.

3. Să fie permanent, adică rămân pentru o lungă perioadă de timp și servesc ca un fel de document.

Toate aceste cerințe pentru o preparare histologică sunt efectuate în cursul tehnicii histologice.

Tehnica histologică include mai multe etape: 1. Luarea materialului:

- în timpul operațiunii;

- de la animale experimentale;

- prin biopsie cu puncție;

- luarea de sânge, măduvă roșie prin puncție;

- prepararea amprentelor (din cavitatea orală, vaginul etc.). 2. Fixarea materialului.

Fixarea materialului histologic obținut este impactul asupra acestuia a substanțelor chimice, precum și factorii fizici care împiedică distrugerea în continuare a țesuturilor obiectului, păstrează structura sa. Factori fizici de fixare - congelare (dioxid de carbon solid, azot lichid, oxigen etc.), expunere la temperaturi ridicate, iradiere cu raze X. Toți acești factori determină moartea bacteriilor și inactivează propriile enzime tisulare, contribuind la conservarea materialului histologic. Fixatoarele chimice provoacă, de asemenea, moartea microbilor și a enzimelor tisulare proprii, stabilizează structura obiectului. Există fixative chimice simple și complexe. Fixatoarele simple constau dintr-o singură substanță chimică (de exemplu, formalină, alcool, acid acetic etc.). Aceste fixative, totuși, duc la anumite tulburări în structura materialului histologic. Astfel, formalinul provoacă încrețire, o diminuare a dimensiunilor. Oțetul de oțet, dimpotrivă, provoacă umflarea. Prin urmare, se folosesc adesea agenți de fixare complexe, în care efectul negativ al fixatoarelor simple este egalat. De exemplu, fixatorul PCF constă din 4 părți formilină, 1 parte alcool și 0,3 părți acid acetic. Acest fixator produce schimbări foarte ușoare în structura obiectului. Sunt cunoscute multe alte fixative.

Pentru a spăla fixatorul din țesuturi, utilizați apă sau alte substanțe (alcool).

Din obiect, apa este îndepărtată prin plasarea acesteia în alcooli cu concentrație crescătoare și apoi în cloroform.

Se efectuează pentru a face secțiuni subțiri din obiect. Se efectuează prin turnarea în parafină, celloidină sau celloidin parafină. Este posibilă compactarea materialului și prin înghețarea în azot lichid, care este utilizat în histochimia enzimelor. În același timp, toate enzimele rămân intacte.

6. Efectuarea de felii.

Această etapă se realizează cu ajutorul dispozitivelor MICROTOMES (Figura 2.8). Ei folosesc cuțite foarte ascuțite, care sunt fixe nemontate. Un obiect de parafină, se deplasează înainte în timpul fiecărui ciclu al doilea (revoluție) pentru o anumită distanță (3-10 mm) și cu felii sale putere metal ited tăiat de aceeași grosime (microtom rotativ). In alte modele microtomice (microtoame sania) fixedly înțepeni Urati să creeze un obiect și deplasează cuțitul înainte și înapoi în mod liber, în plan orizontal, și după fiecare ciclu de mișcări este coborâtă la un predeterminat tol-schinu felii producătoare.

Îndepărtarea parafinei din felii.

Secțiunile sunt plasate pe un diapozitiv, uscate și plasate într-un solvent parafinic - xilen, toluen, benzen sau alte substanțe.

Prin intermediul colorării, se obține contrastul preparatelor. Pentru a face acest lucru, utilizați coloranți. În funcție de sursa de producție, ele sunt împărțite în vopsele de origine animală, vegetală și sintetică. În plus, toate coloranții sunt împărțiți în acizi (formați de acizi), bazici (formați de baze) și neutri.

Un exemplu de colorant acid este eozina, care este un colorant sintetic. Un exemplu de colorant de bază este hematoxilina. Se obține din coaja unor specii de copaci (kampeshevo).

Coloranții sunt de asemenea împărțite în citoplasmatice (pătată tsitop LASMA celule, cum ar fi eozină) și nucleare (nucleu pătat, de exemplu, hematoxilină, azuriu și colab.).

PROPRIETĂȚI TINCTICE A FABRICELOR. Prin proprietăți tinctare înțelegem capacitatea țesuturilor și a celulelor de a pata cu coloranți. Următorii termeni sunt utilizați pentru a indica proprietățile tipului:

1. OXIFILIA este capacitatea celulelor și a țesuturilor de a pata cu coloranți acide. Structurile în sine au proprietățile de bază. De exemplu, eritrocitele au oxifiloză datorită conținutului proteinei principale de hemoglobină din ele.

2. EOSINOPHILIA (varianta de oxyphylia) - capacitatea structurilor de a se pata cu un eozin colorant acid. Eozinofilia posedă citoplasma multor celule.

3. Acidofilia este identică cu cea a oxifiliei.

4. BAZOFILIA - capacitatea structurilor de colorare cu coloranți de bază. În acest caz, structurile în sine trebuie să aibă o reacție acidă. De exemplu, acizii nucleici (ADN și ARN) posedă o bazofilie, deoarece conform legilor chimice, bazele colorante se pot lega. Datorită acestui fapt, nucleul oricărei celule este mai mult sau mai puțin bazofil. Citoplasma celulelor care sintetizează proteine ​​are, de asemenea, o bază-filia datorită ARN-ului conținut în numeroase ribozomi.

5. POLICHROMATOFILIA - capacitatea structurilor celulare de a pata cu coloranți acide și bazici. Această calitate este, de exemplu, granule de leucocite neutrofile. Cu toate acestea, termenul NEUTROPHILY este utilizat ca sinonim.

6. METHECHROMASIA - capacitatea structurilor histologice de a lega un colorant pentru a-și schimba culoarea. În acest caz, structurile în sine sunt colorate în culori, care diferă de culoarea vopselei din soluție. Cel mai adesea, compușii carbohidrați au metahromasie, iar apariția metacromazei indică prezența carbohidraților complexi în celulă sau țesut.

7. ARGENTOFILIA - capacitatea structurilor de a fi colorate cu săruri de argint.

8. CHROMOFILIA - capacitatea structurilor de a fi vopsite cu săruri de crom.

9. Concluzii sau conservarea felii.

O bucată de mediu sintetic sau balsam canadian este aplicată tăieturii și apoi acoperită cu o alunecare a capacului. După uscarea balsamului, preparatul este transparent, poate fi supus studiului sub microscop, metoda este stocată mult timp și poate fi folosită ca un fel de document.

PROCESAREA OBIECTELOR PENTRU MICROSCOPIA ELECTRONICĂ DE TRANSMISIE

instalații de prelucrare pentru histologici microscopie electronică de transmisie, în principiu, este alcătuit din aceleași etape așa cum este descris mai sus tehnici histologice: luarea materialului, precum și fixarea acestuia, încorporarea, secționare și colorarea sau colorare. Aceste etape au propriile caracteristici. Materialul luat nu trebuie să depășească 2 mm (de obicei o bucată de organ de formă cubică cu lungimea coastei de 1 mm). Materialul obținut este fixat în unele aldehide (glutarald-guide) cu fixare suplimentară (postfixare) într-o soluție de tetroxid de osmiu. În timpul postfixării, structurile sunt simultan colorate.

Se umple materialul este produs sintetic (epoxi) QS-LY :. Araldite, Epon etc. FABRICARE secțiuni ultrasubțiri 30-50 se efectuează pe ele la o grosime ultratome unitate folosind sticlă sau diamant cuțite speciale-TION. La început, secțiunile semi-subțiri sunt pregătite pe ecografie, pe care (după colorare) în microscopul de lumină găsesc secțiunile necesare pentru a studia în microscopul electronic. În plus, acestea produc o "ascuțire" a obiectului - îndepărtează excesele din acesta, lăsându-le pe cele necesare. Se pregătesc apoi secțiunile finale (ultrathin). Colorarea (se numește contrastul) se realizează cu ajutorul sărurilor metalelor grele (uraniu, plumb, osmiu etc.). Aceste săruri sunt asociate cu diferite structuri ale obiectului în grade diferite, ceea ce oferă o densitate electronică diferită (contrastul) celui din urmă. După colorare, secțiunile ultra-subțiri sunt plasate pe o plasă de metal și apoi examinate într-un microscop electronic.

„Pentru studiul histologic al obiectului într-un microscop electronic de baleiaj, este supus mai întâi fixarea și apoi se usucă. Apoi, pe suprafața obiectului pulverizat metale, cum ar fi aurul, astfel încât să reflecte fasciculul de electroni.

Articole similare

• Nu funcționează contactele cu tehnica curată

• Sfaturi privind tehnica și tactica tenis de masă, platforma de conținut

• Diferența dintre meditația de la hipnoză, tehnicile de relaxare, sfatul unui psiholog online

Trimiteți-le prietenilor: