Reproducerea virușilor în cultul celulelor. Efectul citopatic al virușilor
Selectarea liniilor celulare. care asigură creșterea optimă a virusului studiat, este de o importanță capitală. Unele virusuri se reproduc în aproape orice linie celulară și, invers, liniile celulare sunt cunoscute pentru a sprijini multiplicarea virușilor de o varietate de tipuri. În același timp, mulți viruși pot reproduce în celule doar un tip strict definit, deși în unele cazuri este posibil să se adapteze la alte tipuri cu ajutorul unor pasaje orbite repetate.
Culturile celulare sunt de obicei utilizate în trei scopuri principale: 1) izolarea primară a virusului; sensibilitatea ridicată a liniei celulare și efectul citopatic pronunțat (CPE) sunt de o mare importanță în acest caz; 2) producerea de vaccinuri, unde principala cerință este un randament mare al virusului și 3) studii biochimice, în care se preferă liniile celulare transplantabile care pot crește în suspensie. Aceste celule, dar sub formă de culturi monostrat, pot fi utilizate pentru determinarea infecțiozității; uneori culturi de celule primare sunt potrivite pentru acest scop.
Celulele. utilizate pentru a cultiva virusuri patogene pentru oameni, sunt descrise de Lennett și Schmidt (1969), în timp ce Andrews și Pereira (1972) oferă informații despre culturile folosite pentru toate virusurile animale. Mulți cercetători lucrează cu linii celulare speciale non-standard, care sunt cele mai potrivite pentru virusul pe care îl studiază.
Efectul citopatic al virușilor
Multiplicarea multor viruși în cultura celulară poate fi detectată utilizând un număr de metode biochimice care detectează macromolecule sau virioni virale în interiorul celulei. În plus, există metode mai dure care sunt utilizate pe scară largă în diagnosticarea virușilor; unele dintre aceste metode sunt, de asemenea, folosite în munca experimentală.
Efectul citopatic (CPE). Mulți, dar nu toți, virusii ucid celulele în care se înmulțesc și, deoarece virionii nou formați captează un număr tot mai mare de celule, se acumulează treptat modificări ale celulelor monostratului infectat, care pot fi detectate prin tehnici histologice. Aceste modificări se numesc efecte citopatice (CPE), iar virușii care le provoacă sunt citopatici. În cele mai multe cazuri, CPE poate fi observată în culturi nefixate, nevopsite, cu o creștere mică a microscopului.
Deoarece celulele sunt translucide, pentru a obține un contrast mai mare, condensatorul trebuie să fie coborât și diafragma irisului parțial închisă. Cu o anumită experiență, în culturile vii se pot distinge mai multe tipuri de CPE, dar pentru a lua în considerare detalii, de exemplu corpuri de incluziune sau sincițiu, este necesară fixarea și colorarea monostratului. Pentru a recunoaște antigenele virale în cultura celulară, colorarea cu anticorpi fluorescenți este larg utilizată, așa cum este descris mai jos.
CPE este importantă în diagnosticarea și izolarea virusurilor de la bolnavi sau animale infectate. Anumiți viruși se reproduc cu ușurință în culturile celulare în timpul izolației primare. Timpul apariției primelor modificări citopatice distincte depinde în parte de numărul de virioni care conțineau eșantionul, dar într-o măsură mult mai mare este determinat de rata de reproducere a virusului studiat. De exemplu, enterovirusurile și virusul herpes simplex, caracterizat printr-o perioadă scurtă de latență și producând un randament ridicat, de obicei determină CPE discertabilă în 24-48 ore și distrug complet monostratul după aproximativ 3 zile.
Cu toate acestea, citomegalovirusurile. virusul rubeolei și unele adenovirusuri cu creștere lentă nu produc CPE timp de câteva săptămâni. Întrucât în acest timp, culturile de celule suferă o degenerare nespecifică, celulele infectate și mediul de cultură trebuie transferate într-un monostrat proaspăt. După un astfel de "pasaj orb", se manifestă adesea CPE, care se poate datora creșterii titrului de virus sau selecției unei variante mai adaptate la această cultură celulară.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: