Ingineria genetică este o știință experimentală care studiază modelele de construcție in vitro și comportamentul în celulele receptorilor a moleculelor funcționale active ale ADN-ului recombinant.
Obiectul cercetării ingineriei genetice sunt genele - segmente ADN care codifică sinteza anumitor proteine.
Principiul creării unui vaccin prin inginerie genetica este ca gena de interes (responsabil pentru sinteza proteinelor virusului imunitar) „tăiat“ din ADN-ul viral utilizând enzime (endonucleaze de restricție) și inserat folosind enzime (ligazele) în ADN-ul vector (de exemplu, plasmidă E. coli - un ADN circular autonom de 4-6 mii de perechi de baze, capabile de a se replica în celulele de E. SOI) .. Apoi, ADN-ul recombinant este introdus în celule de E. coli, în care miezurilor de ADN recombinant (replicate) și gena inserată este exprimată, t. E. Sinteza proteinei corespunzătoare (codificate de genomul viral integrat).
Celulele bacteriene E. coli sunt cultivate într-un mediu nutritiv și "timpul de alergare" al proteinei imunogene a virusului are loc și este izolat și, după o purificare adecvată, folosit ca material pentru vaccin. Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că multe proteine virale sintetizate cu succes în microorganisme au activitate imunogenică foarte scăzută. Motivul pentru aceasta este particularitățile formării structurii proteinelor virale. De regulă, ele sunt glicozilate, au o structură complexă terțiară sau cuaternară. Astfel, hemaglutinina virusului gripal este în virion sub forma unui trimer, care este format din polipeptide monomerice din celulele animale. Nu este posibilă obținerea unei astfel de structuri funcționale hemaglutinină in vitro. Imunogenitatea hemaglutininei din virion este de câteva mii de ori mai mare decât polipeptida monomerică sintetizată în bacterii.
La prepararea vaccinurilor prin inginerie genetica ca vectori alte Fagii decât sunt utilizați plasmide, drojdii, virusuri animale (virusul vaccinia, adenovirusuri, Bakula - și herpesvirusuri).
Cel mai mare efect a fost obținut cu virusul vaccinia utilizat ca vector. Acest virus are un genom mare (aproximativ 187 mii de perechi de nucleotide). Din aceasta, puteți elimina o parte semnificativă (aproximativ 30 de mii. Bp), care nu este esențială pentru reproducerea virusului în celule, iar în locul ei a construi gene străine ale acestor virusuri împotriva cărora este pregătit vaccinul. Astfel, ADN-ul recombinant obținut poate replica în vaccinată și induce formarea imunității nu numai împotriva variolei, ci și împotriva virusului a cărei genă este integrată în genomul său. Utilizarea virusului vaccinia ca vector pentru vaccinare are mai multe avantaje: abilitatea de a se multiplica în celulele animalelor din mai multe specii; pentru a exprima mai multe gene; induce imunitate umorală și celulară; stabilitate termică; producția economică și ușurința de utilizare. Deficiențele identificate anterior ale vaccinului vaccinic asociate cu reactivitatea au fost în mare măsură eliminate prin manipulare genetică. Posibilitatea de a include mai multe gene care codifică imunogeni corespunzători face posibilă vaccinarea simultană a animalelor împotriva mai multor boli virale. Cu toate acestea, trebuie să se țină seama de faptul că indivizii deja imune la virusul Vaccinia, vaccinarea cu virusuri recombinante nu au nici un efect din cauza absenței supraviețuirii sale.
In ultimii ani, medicamentele preventive obținute dintr-o tulpina de virus vaccinia recombinant, conținând gene care codifică glicoproteinele de suprafață ale virusului gripal, rabie, sincitial respirator, boala Aujeszky, rinotraheita infecțioasă bovină, și altele.
Distribuiți un link cu prietenii
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: