Ca etichetă se utilizează izotopi radioactivi.
În funcție de tehnica de stabilire, se disting două metode de RIA.
1) Tehnica "fazei lichide" (RIA clasic). Neajunsul acestei tehnici este nevoia
separarea specială a antigenelor (sau anticorpilor) marcate liber și legat.
2) Tehnica "fazei solide".
AH sau AT cu specificitate cunoscută se leagă pe sorbenți (fază solidă) - pereții unui puț de polistiren sau dintr-un tub de plastic. Pe AG (AT) imobilizat, componentele rămase ale IR sunt sorbate succesiv.
În funcție de natura reacției, se disting următoarele metode:
1) Metoda competitivă - o metodă bazată pe competiția AG.
Componente ale reacției:
a) determinată de AH (materialul de studiu - sânge, spută etc.);
b) un antigen marcat cu un radioizotop identic cu AG-y studiat;
c) AT-LA specific de concentrație cunoscută legată de sorbent;
d) standard AH (control);
e) Soluție tampon.
2) Metoda neconcurențială.
Componente ale reacției:
a) determinat de AH;
b) o AT specifică - o concentrație cunoscută, legată
pe sorbent;
c) anticorpi identici cu anticorpul legat, marcat
radioizotop;
d) AG standard;
e) Soluție tampon.
La AT legat, se adaugă AG investigat. În timpul incubării pe sorbent se formează complexe de AG-AT. Sorbentul este spălat din componentele libere și se adaugă AT-uri marcate, care se leagă de valențele libere ale AG-na ca parte a complexului. Cantitatea de radioactivitate este proporțională cu concentrația AG investigată.
3) Metoda "metoda sandwich" (metoda indirectă) este cea mai obișnuită metodă.
componente:
a) serul de test (sau testul AG);
b) AG-uri legate de adsorbantul (sau AT-la conectat la adsorbantului în determinarea AG-A);
c) anticorpi de diagnostic împotriva imunoglobulinelor marcate cu radioizotopi;
d) seruri de control (sau AG);
e) soluții tampon.
Testul-și AT (sau AG-uri) reacționează cu fază solidă-AH în E (AT-E), după care incubatul este îndepărtată și reacția se administrează marcat antiglobulină anticorpi care se leagă la complexele specifice AG-AT pe suprafața sorbentului. Amploarea reacției este direct proporțională cu cantitatea de radioactivitate a anticorpilor de testare (sau hipertensiune).
Avantajele RIA:
1) specificitate și sensibilitate ridicată;
2) simplitatea tehnicii de stabilire;
3) acuratețea evaluării cantitative a rezultatelor;
4) este ușor de automatizat.
Dezavantaj: utilizarea izotopilor radioactivi.
Niciun material similar (
Trimiteți-le prietenilor: