În microbiologie, sunt utilizate pe scară largă diferite metode de colorare a bacteriilor. Desigur, puteți face observații fără aceste manipulări complexe, dar atunci când microscopia nu veți vedea aproape nimic, deoarece indicele de refracție a luminii de bacterii se apropie de indicele de refracție al lichidului în care trăiesc. Pentru ca bacteriile sau unele dintre structurile lor interne sau externe să se evidențieze în mod clar față de fundal, se folosesc diferite coloranți. Astăzi vom examina tehnica picturii în funcție de Gram, dezvoltată în 1884 de către doctorul danez Hans Christian Gram.
Executarea procedurii începe cu pregătirea unui frotiu fix de cultură a microorganismelor. O picătură de soluție fiziologică se aplică la diapozitiv, în care bacteriile studiate sunt introduse de o bucla microbiologică, arse în flacăra arzătorului. Aceasta poate fi fie o răzuire instantanee, fie o frotiu sau o colonie pre-crescută. Toate etapele trebuie efectuate în condiții aseptice, de preferință în zona de flacără a arzătorului. Metoda demonstrată de efectuare a procedurii este destinată numai să reflecte secvența de aplicare a substanțelor necesare pentru colorare și să clarifice rolul fiecărei etape.
Esența tehnicii în separarea vizuală a bacteriilor în două grupuri este Gram-pozitiv și Gram-negativ. În primul rând, ca rezultat, diferențierile arată ca o culoare albastră sau violetă sub microscop, iar ultima în roz. Principala diferență dintre acestea este că bacteriile gram-negative percep colorantul mai rău din cauza structurii mai complexe a cochiliei. În special, ele au o membrană suplimentară deasupra peretelui celular, care împiedică pătrunderea substanțelor inutile. Stratul de peptidoglican este mai subțire decât bacteriile gram-pozitive. Aceste caracteristici le permit să manifeste patogenitatea. În microbiologia medicală, bacteriile gram-pozitive sunt greu studiate, deoarece foarte puține dintre ele sunt capabile să provoace boli.
Frotiul aplicat pe sticlă este uscat în aer sau în înălțime deasupra flăcării arzătorului pentru a preveni fierberea și denaturarea proteinei și apoi fixat trecând prin flacără pentru o perioadă scurtă de timp. În acest fel, microorganismele mor și aderă fiabil la geam.
Acum vine momentul aplicării colorantului. În primul rând, culoarea este gentianviolet. Acesta este principalul colorant al seriei trifenilmetan: un amestec de penta- și hexametilparazaniline cu o cantitate mică de dextrină și fucsină. Este folosit în medicină nu doar ca colorant, ci și ca antiseptic. Proprietățile antimicrobiene sunt explicate prin permeabilitate ridicată prin cochilii bacterieni și prin expunerea la procesele de oxidare-reducere.
Colorarea durează 1-2 minute, după care gentianvioletul este drenat și probele sunt umplute cu soluția de Lugol. Această substanță, cred, este binecunoscută tuturor - tratează gâtul cu angina. Soluția Lugol este combinația de iod cu iodură de potasiu, care îi conferă o bună solubilitate în apă. Conectarea cu piese de gentianviolet, care au pătruns în pereții celulari ai bacteriilor, iodul formează o culoare albastru violet. Reacția durează de asemenea 1-2 minute.
Acum a sosit timpul pentru diferențiere, adică separarea bacteriilor gram-pozitive și gram-negative. Pentru aceasta, sticla murdară este imersată de mai multe ori într-un vas cu 96% alcool etilic până când picăturile de picurare corespund culorii alcoolului din sticlă. În această procedură, complexul albastru-violet este spălat departe de pereții bacteriilor gram-negative, rămânând doar în pereții bacteriilor Gram-pozitive.
Pentru a se asigura că bacteriile gram-negative nu par incolore, frotiul este spălat cu apă și în plus colorat cu o soluție apoasă de magenta pentru aceleași minute magice de 1-2 minute. Întrucât există deja un colorant în peretele de bacterii Gram-pozitive, acestea nu pată cu magenta. Gram-bacteriile negative dobândesc o culoare roz. Frotiul este în cele din urmă spălat cu apă, uscat și preparatul este pregătit pentru microscopie.
Gram-bacterii negative (x1600):
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: