După evaluarea viabilității, embrionii sunt spălați de două ori în tampon de fosfat al Dulbecco, cu adăugarea de antibiotice absorbite în minipayet împreună cu o cantitate mică de mediu. Pentru utilizarea transplantului în primele 2-4 ore după extracția din tractul genital al donatorului.
Necesitatea de a menține viabilitatea embrionilor pentru o perioadă mai îndelungată apare în următoarele cazuri: lipsa unui număr suficient de destinatari adecvați; calitatea dubioasă a embrionilor spălați; crearea unei bănci de embrioni pentru implementarea programelor de reproducere pe termen lung; schimbul bazei genetice între țări și continente pe o bază comercială. Există mai multe modalități de stocare a embrionilor: pe termen scurt din organism, pe termen scurt în organism, pe termen lung în gaze lichefiate. În dezvoltarea metodei de stocare pe termen scurt a embrionilor în afara corpului, sa folosit experiența țesutului și culturii celulare. Cel mai potrivit mediu a fost TCM 199 suplimentat cu 20% ser de embrion de cerb. Embrionii sunt depozitați într-o atmosferă îmbogățită cu dioxid de carbon, la o temperatură constantă de 37 de grade. În astfel de condiții, ele rămân viabile timp de 24-48 de ore. Există rapoarte că scăderea temperaturii la 10 grade permite prelungirea viabilității acestora până la 5-6 zile.
Timp de 3-4 zile, embrionii pot fi depozitați în canalele de ouă ale iepurilor, rata de supraviețuire fiind de 73% medie. În prezent, această metodă nu se aplică.
Până în prezent, există două modalități de înghețare profundă a embrionilor: într-un mod programabil (înghețarea pasului); o etapă (vitrificare).
Când înghețarea de embrioni primă metodă selectate (calitate excelentă și bine) sunt realizate succesiv prin soluții krioprotektera (glicerol sau dimetilsulfoxid) concentrații crescătoare preparate în soluție salină tamponată cu fosfat, Dulbecco suplimentat cu ser fetal 20%. Ulterior, embrionii sunt transferați în flacoane sau fiole (fiecare 1-4) cu 0,3 - 0,4 ml mediu cu crioprotectori. Containere sigilate cu embrioni (eprubete sigilate cu folie fiole sigilate) și plasate într-o cameră de congelare, unde se răcește la -7 grade în modul de 1 grad pe minut. După atingerea acestei temperaturi, mediul cristalizează. În acest scop, zona de margine superioară a coloanei respective medie (fiole) tuburi de perete în forceps cu azot lichid. răcire suplimentară (până la -28 sau -35 grade) sunt la 0,5 grade pe minut, atunci rata este redusă la 0,1 grade pe minut; după 10 minute, se aduce la temperatura finală prin imersare în azot lichid.
Congelare simultană (vitrificare) - întărire cu vâscozitate extrem de ridicată a mediului, care conduce la formarea de structuri vitrificate. Acest lucru este posibil cu o concentrație mare de crioprotector și răcire rapidă.
Eficacitatea transplantului de embrioni de bovine este în mare măsură determinată de condițiile de depozitare a zigoturilor. Cea mai eficientă și promițătoare metodă de conservare a embrionilor este înghețarea lor profundă (crioconservare) în azot lichid la o temperatură de -196 de grade. Dezvoltarea unei metode de stocare pe termen lung a embrionilor crioconservați extinde semnificativ posibilitățile de transplant. Numai în acest caz poate fi o bază biotehnologică fiabilă pentru programul de selecție.
Depozitarea pe termen lung a embrionilor congelați profund are mai multe avantaje. Eliminând nevoia de întreținere a turme mari sau grupuri de destinatari, ca transplanturile pot fi efectuate în orice moment, indiferent de momentul capturării embrionilor de la donatori, care crește în mod semnificativ profitabilitatea transplantului. In plus, embrion crioconservare vă permite să creați embriobanki de la animale valoroase genetic, precum și pentru a menține fondul genetic al speciilor rare și pe cale de dispariție și transporta embrioni în orice țară din lume. Potrivit experților, crioprezervarea embrionilor este justificată din punct de vedere economic, exclude derivarea genetică, adică schimbarea frecvenței genelor într-o populație cauzată de cauze accidentale. Sub rezerva corespunzătoare supraviețuirii biotehnologiei embrion este de 90% și destinatar sarcina vaci după transplant nechirurgical este în intervalul 50-55%. Cu toate acestea, în condiții de producție de multe ori nerespectarea cu congeiaredecongelare tehnologia embrion de supravietuire scade, ceea ce reduce considerabil profitabilitatea crioconservare. Este dovedit faptul că utilizarea embrionilor crioconservate într-un mediu de producție este rentabilă numai dacă supraviețuirea embrionului după decongelare nu este mai mică de 80%, iar procentul de vaci de sarcina recipient va fi 55-60%.
În conformitate cu tehnologia adoptată în Rusia, embrioni congelați utilizarea de dispozitive automate care asigură reglarea vitezei de răcire în moduri prestabilite. După sigilarea containerului cu embrioni fiole sau flacoane marcate, apoi este răcit la -6 la 20 de grade la 1 grad pe minut, cristalizarea este efectuată, un loc răcoros în jos, la 0,3 grade pe minut și imersate în azot lichid. Se aplică și un alt mod: răcire de la -7 la -35 grade la o rată de 0,3 grade pe minut; de la -35 la -38 grade la o viteză de 0,1 grade pe minut și imersare în azot lichid. Dezghețarea embrionii produși pe o baie de apă cu o temperatură de 25 sau 37 de grade timp de 10-12 secunde. Pentru depozitarea și transportul embrionilor congelați, se folosesc nave de Dewar de diferite tipuri.
Practica de crioconservare a embrionilor de bovine sugerează că supraviețuirea embrionilor este afectată în mod semnificativ nu numai tehnologia de congelare și decongelare, dar, de asemenea, calitatea lor și de stadiul de dezvoltare. Pentru crioconservare cu succes a embrionilor trebuie să fie colectate fără tulburări morfologice în stadiul de morulă tarziu sau blastocist devreme.
Nevoia de selectare a embrionilor este, de asemenea, dictată de faptul că 10% dintre ele prezintă o dezvoltare malformată, în timp ce crioconservarea determină deteriorarea în medie a 25% din celulele blastocistului. Astfel de embrioni suferă o mare reducere a blastomerelor intacte, ca urmare a faptului că experiența și dezvoltarea ulterioară după îngheț și decongelare sunt în mod semnificativ încălcate.
Dacă observați o eroare în text, selectați cuvântul și apăsați Shift + Enter
Trimiteți-le prietenilor: