TEHNOLOGIA DE OBȚINERE A CULTURILOR DE LACTOBACTERIA
IV TIKHONOV, Yu.S. OVSYANNIKOV, V.G. KOMOSCO, S.A. SHVETSOV, V.E. romanele
FSEI HPE "Academia de Stat de Medicină Veterinară din Moscova și Biotehnologia numită după K.I. Scriabin »
În ultimii ani, în Federația Rusă sa înregistrat o deteriorare accentuată a situației epidemice și epizootice. Se observă o creștere a proporției dysbacteriosis cauzată de deteriorarea situației ecologice, utilizarea necontrolată a antibioticelor și a diverșilor agenți chimioterapeutici, hormoni etc. în medicina veterinară. precum și factori și condiții de stres, o scădere a calității apei potabile și a hranei pentru animale.
Se crede incontestabil că disbacterioză la animalele de fermă și păsări devin pe scară largă, deoarece, în absența unei corecții în timp util a normomikroflory foarte probabil sa le dezvolte grele, boli infecțioase recurente, imunodeficienta, diverse allergopaty, anemie, gastro-intestinale și alte boli, inclusiv restante Prywes , o scădere a eficienței producției.
Dysbacterioza netratată este periculoasă atât pentru populația tânără, cât și pentru populația reproductivă a animalelor de fermă și a păsărilor. Creșterea bolilor infecțioase ale etiologii bacteriene, virale și alte este dominată în mare măsură de nivelul inferior al rezistentei nespecifice a animalelor și păsărilor ™ organism datorită încălcări dysbiotic exprimate.
În legătură cu cele de mai sus, prevenirea și tratamentul bolilor infecțioase și dysbacteriosis a animalelor și a păsărilor agricole sunt, în prezent și în viitorul apropiat, priorități pentru medicina veterinară. Soluția lor este posibilă în cazul în care punerea în aplicare a unui set de măsuri antiepizootice relevante, inclusiv dezvoltarea, producția în serie și introducerea de noi agenți terapeutici și profilactice pentru prevenirea și tratamentul bolilor infecțioase și disbacterioses care îndeplinesc standardele internaționale moderne. În același timp, metodologia adecvată și uniformă de utilizare a medicamentelor terapeutice și profilactice adecvate este foarte importantă pentru asigurarea eficacității sistemului acestor activități. Acestea, la rândul lor, necesită pregătirea, aprobarea și livrarea către o gamă largă de specialiști veterinari a unor documente metodologice și de referință privind problemele menționate mai sus.
În același timp, există o nevoie clară de aprofundare a lucrărilor privind probioticele în ceea ce privește căutarea unor noi tulpini de microorganisme cu acțiune probiotică, îmbunătățirea existenței și crearea de noi preparate de acest tip pentru creșterea eficienței acestora.
Având în vedere numărul mic de publicații privind acțiunea eubioticheskom de bacterii producătoare de acid lactic în literatura de specialitate internă sunt studii reale ale mecanismelor acțiunii lor antagoniste și a condițiilor pentru conservarea, menținerea și amplificarea proprietăți utile. Rezultatele obținute pot servi drept bază pentru dezvoltarea probioticelor moderne eficiente moderne, bazate pe lactobacili, în scopuri veterinare.
În procesul de realizare a cercetării științifice în acest domeniu, este necesară pentru a identifica tulpini de bacterii producătoare de acid lactic, pentru a exercita capacitatea maximă de a suprima dezvoltarea enteric, piogenică și microorganisme kolipatogennyh, examinează mecanismul acțiunii lor antagoniste, termenii întreținerea și păstrarea tulpinilor. Pentru a determina raportul optim dintre tulpinile selectate din produs, pentru a dezvolta o metodă de preparare a medicamentului, oferind-o cu performanța necesară și desfășurarea procesului său privind animalele de fermă și păsări de curte.
Analiza datelor din literatură în domeniul selecției microorganismelor și dezvoltarea tehnologiei de obținere a preparatelor cu acțiune probiotică și utilizarea lor a făcut posibilă determinarea principalelor linii de cercetare:
- cercetarea și evaluarea proprietăților biologice ale tulpinilor noi de microorganisme cu acțiune probiotică;
- dezvoltarea culturilor asociate pe baza lor;
- dezvoltarea metodelor de preparare și întreținere a culturilor de lucru de referință și însămânțare ale tulpinilor de microorganisme cu acțiune probiotică;
- dezvoltarea unui mediu nutritiv lichid care asigură acumularea intensivă de biomasă a lactobacililor în procesul de cultivare profundă dinamică periodică dinamică;
- studiul regularității creșterii populației bacteriene în condiții aerobe și anaerobe;
- selecția parametrilor optimi pentru cultivarea profundă a microorganismelor cu acțiune probiotică pentru a-și păstra proprietățile biologic utile;
- dezvoltarea unei forme gata preparate a medicamentului cu acțiune probiotică bazată pe tulpini de lactobacili, posibil în combinație cu alte bacterii;
- evaluarea reproductibilității tehnologiei de preparare cu efect probiotic;
- studiul siguranței și toxicității specifice medicamentului pe animalele de laborator;
- verificarea eficacității utilizării asocierii probiotice dezvoltată în practicarea creșterii animalelor și a păsărilor.
Materiale și metode de cercetare. Am folosit tulpini de microorganisme din genul Lactobacillus (Lactobacillus plantarum №3 și Lactobacillus buchneri №4) din colecția de culturi Institutul de Cercetare de Microbiologie al Federației Ruse.
Pentru cultivarea tulpinilor lactobacili pentru a evalua proprietățile lor biologice preparate mediu nutritiv bazat pe media MPC-1 și IFA-4 în conformitate cu procedura stabilită în FS pentru „Lactobacterin uscat“.
O cultură de lucru de însămânțare a lactobacililor a fost obținută printr-o serie de încrucișări ale unei culturi de referință uscate în medii nutritive standard ale MPC. În ultima etapă, s-a preparat o cultură de agar, spălată cu un crioprotector, urmată de congelare și depozitare la minus 20 ° C.
Cultivarea lactobacililor a fost efectuată în sticle de 20 de litri cu un mediu nutritiv lichid MRS-1. Culturile Lplantarum L.buchneri în sticle și cultivate prin cultivarea adâncă periodică cu aerare fără agitare, la o temperatură de (37 ± 1) ° C timp de 48 și 72 de ore.
Mediile au fost monitorizate prin indicatori fizico-chimici și biologici.
Rezultatele studiului. Pentru prepararea culturilor de sămânță de lucru a tulpinilor de lactobacili utilizate tulpini de referință svezhepereseyannuyu ale culturii lactobacili pe medii de cultură MRS. Pentru această buclă au fost selectate coloniile bacteriene izolate din MRS mediu nutritiv solid, suspendat în ser fiziologic și subcultivate în mediu lichid MRS în flacon. Culturile au fost incubate la o temperatură de 36,3 ° C timp de 48 de ore. Culturile Bulion au fost apoi subcultivate pe saltea teșit solid nutritiv IFA mediu la rata de cultură de 5,0 ml într-o singură saltea. Culturi în saltele incubate la o temperatură de 36. 38 ° C timp de 48 de ore pentru tulpina L.plantarum 3 și 72 de ore pentru tulpina L.buchneri 4. După perioada de incubare cultura agar a fost utilizată pentru prepararea unei culturi de semințe de lucru. În acest scop ROE formate pe gazon microbiană a fost spălată cu 10,0 ml de 1,5% soluție tărie poliglyukina.
Având în vedere activitatea biochimică ridicată a tulpinilor de lactobacili, înregistrarea tradițională a mediului protector în timpul înghețării (zaharoză-gelatinoasă) nu a putut fi utilizată. În legătură cu aceasta, a fost utilizat un poliglucin crioprotector neutru și suficient studiat.
Suspensia microbiană preparată cu poliglucin a fost turnată în 5 ml în tuburi și depozitată la minus 20 ° C.
Rezultatele evaluării supraviețuirii tulpinilor de lactobacili în compoziția culturilor de semințe proaspăt preparate și stocate sunt prezentate în tabelul nr. 1.
Analiza datelor prezentate în tabelul nr. 1, indică faptul că cultura microbiană a tulpinilor de Lactobacillus în compoziția crioprotectorul de contact selectat au o rezistență suficient de mare pentru congelare și depozitare la -20 ° C, Cel mai mare număr de microbi vii înregistrați în 6 luni de stocare a culturilor în stare congelată. În activitatea noastră ulterioară, am folosit culturi de semințe de lucru păstrate la minus 20 ° C timp de cel mult 6 luni.
Caracteristicile culturilor de semințe de lactobacili proaspăt preparate și depozitate la -20 ° C (X ± Ig5, n = 5)
Pe baza caracteristicilor și calea de administrare a probiotic tehnologia necesară acțiunea veterinară pentru producerea formularea medicamentului, care ar permite să-și păstreze activitate antagonistă ridicată cel puțin un an și capacitatea formatoare de acid, pentru a fi inofensiv, confortabil în utilizare. Rezultatele testelor sunt tulpinile lactobacili din industria avicolă, obținute în cursul studiilor a arătat că concentrația minimă de celule lactobacili vii în forma finită a preparatului trebuie să fie cel puțin în ZhYu9 ml.
Pentru a obține un medicament terapeutic-profilactic cu o concentrație dată, tehnologia trebuie să includă o serie de etape consecutive pentru acumularea de biomasă suficientă de lactobacili. Procesul tehnologic de acumulare a biomasei provenite din semănarea culturilor de lucru în studiile noastre a constat în următoarele etape:
- obținerea de culturi de însămânțare;
- obținerea celei de-a doua recolte de semănat.
Datele prezentate în tabelul. 1, indică faptul că microbii tulpinilor de lactobacili în culturile congelate stabilizate au o rată de supraviețuire suficient de ridicată și pot asigura concentrația necesară pentru obținerea culturilor de însămânțare I ale replantării.
Pentru culturile de inocul I pasaje culturi de lactobacili lucru după decongelare flacoanele subcultivat pe mediu de creștere solid teșite MRS-4 saltele. Culturile au fost incubate la o temperatură de 37 ± 1 ° C timp de 48 de ore. Concentrația lactobacililor în inocul a fost determinată prin numărarea celulelor în camera lui Goryaev.
Rezultatele Determinarea concentrației lactobacili în semințele de cultură Trecerile I prezentate în tabelul. 2.
Tabelul 2
Concentrația celulară în culturi de bacterii producătoare de acid lactic cultivate în saltelele I subcultivarea agar teșite
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: