Scopuri și metode de izolare a culturilor pure
Cultura pură se referă la o cultură care conține microorganisme din aceeași specie [7, p. 64].
Izolarea culturi pure de bacterii - o etapă necesară de cercetare bacteriologice în diagnosticul de laborator al bolilor infecțioase, în studierea diverse contaminarea microbiană a mediului și, în general, la orice lucrare cu microorganisme [7. 64].
Materialul de testare (puroi, spută, fecale, sânge și alte materiale de la pacienți, carne de apă, sol, aer, alimente, animale și umane, purtători) conține de obicei asociații microbiene.
Izolarea culturii pure permite studierea caracteristicilor morfologice, culturale, biochimice, antigenice și de altă natură, care împreună determină speciile și tipul de apartenență ale agentului patogen, adică identificarea sa este efectuată.
Pentru a izola culturile pure de microorganisme, se folosesc metode care pot fi împărțite în mai multe grupuri [7, p. 64].
Metoda lui Pasteur este diluarea secvențială a materialului de testare într-un mediu nutritiv lichid până la concentrația unei celule din volum (are semnificație istorică).
Metoda lui Koch ( „placă de cabluri“) - o diluție în serie a materialului de testat în agar topit (temperatura 48-50 ° C), urmată de umplerea într-un vas Petri unde agar se solidifică.
Semănarea se face, de regulă, din ultimele trei sau patru ultime diluții, unde există mai puține bacterii și, în viitor, când cresc pe feluri de mâncare Petri, apar colonii izolate, formate dintr-o celulă maternă singură părinte. Din colonii izolate în adâncul agarului, o cultură pură de bacterii se obține prin replantare în medii proaspete.
Metoda Shukevich este utilizată pentru a obține o cultură pură a proteinei și a altor microorganisme care posedă o creștere "târâtoare". Semănarea materialului de testare se efectuează în apa de condensare la baza agarului tivit. Mijloacele mobile (proteas) sunt capabile să urce în sus pe agarul de tocat, formele imobiliare rămân să crească în loc de însămânțare. Prin transplantarea marginilor superioare ale culturii, se poate obține o cultură pură.
Metoda lui Drigalsky este utilizată pe scară largă în practica bacteriologică, în timp ce materialul de testare este diluat într-o eprubetă cu soluție salină sterilă sau bulion.
O singură picătură de material este introdusă în prima farfurie și o spatulă de sticlă sterilă se întinde pe suprafața mediului. Apoi, cu aceeași spatula (fără a le arde în flacăra arzătorului), faceți aceeași însămânțare în a doua și a treia ceașcă. Cu fiecare însămânțare a bacteriilor pe spatulă, rămân mai puțin și mai puțin și, când sunt semănate în a treia ceașcă, bacteriile vor fi distribuite separat pe suprafața mediului nutritiv.
După 1-7 zile. care deține cupe într-un cuptor (în funcție de rata de creștere a microorganismului) în a treia cupa dă fiecare clonă de celule bacterie izolată formatoare de colonii care subcultivat pe agar înclinat pentru a se acumula o cultură pură.
Dificultăți speciale apar în izolarea culturilor pure de anaerobe obligatorii. Dacă contactul cu oxigenul molecular nu provoacă imediat moartea celulelor, atunci cultura este produsă prin metoda Drigalsky, dar după aceea paharele sunt plasate imediat în anaerostat. Cu toate acestea, utilizați mai frecvent metoda de reproducere. Esența sa constă în faptul că diluțiile materialului investigat sunt efectuate în mediu nutritiv agar topit și răcit la 45-50 ° C.
S-au realizat 6-10 diluții succesive, apoi mediul din tuburile de testare este răcit rapid și suprafața este acoperită cu un strat de amestec de parafină și ulei de petrol pentru a împiedica pătrunderea aerului în mediul nutritiv. Uneori, mediul nutritiv după însămânțare și amestecare este transferat în tuburi sterile Burri sau pipetă capilară Pasteur, ale căror capete sunt etanșeizate.
Cu o diluție reușită în flacoane, tuburi Burri, pipete Pasteur, colonii izolate de anaerobe cresc.
Pentru a face coloniile izolate bine vizibile, utilizați medii nutritive clarificate. Pentru a extrage izolat tub colonii anaerobi încălzit ușor se rotește în flacără, cu agar, adiacent pereților, iar conținutul tubului se topește ca o coloană de agar alunecă într-un vas Petri sterilă. Plăcuța de agar este tăiată cu pensete sterile, iar coloniile sunt îndepărtate printr-o buclă. Coloniile extrase sunt plasate într-un mediu lichid favorabil dezvoltării microorganismelor secretate (de exemplu, mediul Kitt-Tarozzi). Mediul agarizat din tubul Burri este suflat, trecând gazul printr-o plută vată.
Metoda Hangate - când doresc să obțină colonii izolate de bacterii cu o sensibilitate deosebit de ridicată la oxigen (aerobi stricți) utilizează metoda de rotire a tuburilor Hangate.
Pentru a face acest lucru, mediul agar topit este inoculat cu bacterii la un curent constant printr-un tub de testare a unui gaz inert eliberat de o impuritate de oxigen. Apoi, tubul este închis cu un dop din cauciuc și plasat orizontal în clemă, rotind tubul, mediul este distribuit uniform pe pereții tubului și solidificat cu un strat subțire. Utilizarea unui strat subțire într-un tub de testare umplut cu un amestec de gaze face posibilă obținerea unor colonii izolate care sunt vizibile cu ochiul liber.
Izolarea celulelor individuale cu un micromanipulator. Micromanipulatorul este un dispozitiv care permite o celulă din suspensie să fie extrasă cu o micropipetă specială sau micro-bucla. Această operație este monitorizată sub microscop. O cameră umedă este plasată pe scena microscopului, în care este plasat preparatul "drop drop" [7, p. 70].
În suporturile trepiedelor de operare, sunt fixate micropipete (microblocuri), mișcarea acestora din câmpul de vedere al microscopului se efectuează cu o precizie micronă datorită unui sistem de șuruburi și pârghii. Cercetătorul, analizând microscopul, extrage celule individuale cu micropipete și le transferă în tuburi de testare cu un mediu lichid steril pentru a obține o clonă de celule.
Metoda principală este metoda bacteriologică, care constă în izolarea culturii pure a agentului patogen (o populație care conține bacterii dintr-o specie) și identificarea sa.
Identificarea microorganismelor implică studierea proprietăților acestora pentru a stabili apartenența la un anumit grup sistematic (gen, specie).
Metoda bacteriologică este un studiu în mai multe etape. Datorită faptului că materialul investigat conține cel mai adesea un amestec de microorganisme, baza metodei bacteriologice este izolarea culturii pure a agentului patogen, produsă în prima etapă a studiului. În acest scop, însămânțarea materialului de testare se face, de regulă, pe medii nutritive dense, a căror alegere este determinată de proprietățile patogenului presupus.
Aplicat cât mai mult posibil medii elective pe care se dezvoltă doar un anumit tip de bacterii sau medii de diagnostic diferențiate care fac posibilă diferențierea patogenului suspectat de alte microorganisme.
De exemplu, mediul telurit este utilizat pentru izolarea bacilului difteric, pentru diagnosticul bacteriologic al infecțiilor intestinale - mediul Endo, agarul de sulfit de bismut.
Când se izolează microorganismele patogene condiționate, materialul este însămânțat în medii nutritive universale, de exemplu, agar de sânge. Toate manipulările legate de însămânțare și de izolarea culturilor bacteriene sunt efectuate asupra flăcării arzătorului.
Material Crop pe medii nutritive produce o buclă bacteriană sau sticlă sau spatula de metal, astfel încât să se disperseze în materialul sunt bacterii pe o suprafață de mediu nutritiv, prin care fiecare celulă bacteriană cade pe o porțiune a mediului. Când o cultură pură de izolare a agentului cauzal al materialului patologic contaminat în mare parte microfloră străine, uneori folosesc o metodă biologică de izolare a unei culturi pure: materialul test sensibil la animalele de laborator patogen Infect.
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: