Cultivarea virușilor

Virușii sunt paraziți intracelulare stricți, deci pot fi crescuți numai în celule vii. Pentru cultivarea virușilor, se utilizează animale de laborator, embrioni de pui și culturi celulare.







Animale de laborator: șoareci albi (pentru virusurile gripale, Coxsackie), iepuri (virusul rabiei). Indicarea, adică detectarea virusului, se efectuează pe baza dezvoltării semnelor tipice de boală și a modificărilor în organele animalului.

Embrionii de pui 5 - 19 zile de incubație sunt potriviți pentru cultivarea majorității virusurilor: Avantajele metodei: sterilitatea și absența infecțiilor virale ascunse, posibilitatea de a obține virusuri în cantități mari, simplitatea tehnicii. În funcție de scopul și tipul virusului, materialul se aplică membranei chorion-alantoice, cavității alantoice, sacului de gălbenuș și cavității amniotice. Indicarea virușilor se efectuează în funcție de natura coloniilor de virusuri pe membrana alanto-corionică. În lichidul alantoid, virusii sunt detectați prin reacția de hemaglutinare. Această reacție se bazează pe capacitatea virusului gripal și a altor virusuri de a aglutina (lipici) celulele roșii din sângele de pui.

Cultura celulară este celule din organul unui animal sau om care trăiește și se reproduce în afara corpului într-o soluție nutritivă (în mediu 199 sau în mediul Hanks). Cultivarea în cultura celulelor este una dintre metodele cele mai comune în virologie. Cel mai des se utilizează culturi de celule cu un singur strat atașate la pereții tuburilor de testare sau a sticlelor plate. Există mai multe tipuri de culturi.

1) tripsină primară, care sunt obținute prin prelucrarea țesuturilor pe bază de tripsină, de exemplu rinichi de maimuță sau țesut embrionic uman. Cultura celulară este utilizată o singură dată.

2) culturile celulare transplantabile sunt capabile să se înmulțească în culturi multiple cu medii nutritive proaspete. Acestea pot fi menținute în laborator prin transplanturi permanente de zeci de ani. Multe laboratoare utilizează culturi transplantabile obținute din țesuturi canceroase umane: HeLa, IEP-2, etc.

3) Culturile celulare semi-transplantate sunt, de exemplu, celule diploide din fibroblaste embrionare umane capabile de reproducere pentru 40-50 de pasaje, păstrând în același timp setul original diploid de cromozomi.

Detectarea virușilor în cultura celulară. Virușii din cultura celulară sunt detectați prin acțiunea citopatică (CPD), care cauzează numeroși viruși, de exemplu, virusul poliomielitei. CPD se manifestă prin degenerarea și distrugerea celulelor sau prin formarea de celule multinucleare.







CPD poate fi detectat dintr-o mostră de culoare. Pentru a face acest lucru, utilizați celule plasate într-un mediu de cultură cu un indicator, de exemplu roșu de metil. La înmulțirea celulelor neinfectate, se formează produse metabolice acide, iar indicatorul schimbă culoarea în galben. Dacă celulele sunt infectate cu un virus, metabolismul celular normal este întrerupt, iar culoarea mediului nu se schimbă.

Reproducerea virusului în celulă poate fi, de asemenea, detectată prin formarea incluziunilor intracelulare.

Pentru a calcula numărul de virioni utilizați metoda plăcii. Celulele monostrat, acoperite cu un strat subțire de agar, într-un cal roșu, sunt infectate cu virusul și numărul de virioni numărați în funcție de numărul de plăci sau de "picaturi sterile". Se crede că o placă se formează prin înmulțirea unui virion.

Reproducerea virusului în celulă poate fi, de asemenea, detectată prin reacția de hemadsorbție. Aceasta este o variantă a reacției de hemaglutinare. Eritrocitele introduse în cultura celulară sunt adsorbite pe suprafața celulelor infectate cu virusul. Reacția este utilizată, de exemplu, pentru detectarea virusului gripal.

Fenomenul bacteriofagiei a fost descoperit și studiat de microbiologul francez d'Errell. În 1917, el a observat o liză a culturii de bacterii de dizenterie după introducerea unui filtrat al fecalelor pacientului care se recuperează din dizenterie. Cu pasaje multiple, adică transferul de la o cultură la alta, filtratii și-au păstrat activitatea și chiar au întărit-o. Omul de știință a făcut din această concluzie corectă că agentul de liză este viu și se propagă în bacterii la trecere. D'Errell a numit acest agent un bacteriofag (fagos-devorant latin) și chiar fenomenul de liză - bacteriofag.

Mai târziu, sa confirmat faptul că bacteriofagul este viu. Este un virus bacterian, se multiplică în bacterii, provocând liza lor. Adăugarea unui bacteriofag la o cultură de bacterii pe un mediu nutritiv lichid determină o înălbire a mediului. Pe medii nutritive dense, când un amestec de bacterii și bacteriofagi este semănat pe fondul unei creșteri continue a bacteriilor, apar pete sterile sau colonii negative de fagi.

Bacteriofage și specifice, adică liză anumite tipuri de bacterii. Prin urmare, numele lor: bacteriofag dysenteric, bacteriofag stafilococ. S-au detectat faguri de bacterii, dar și actinomicite.

În medicina practică, bacteriofagii au fost utilizați ca agenți terapeutici și preventivi.

O mare importanță este faptul că multe probleme de virologie generală și genetică moleculară au fost descoperite și studiate pe exemplul de bacteriofag.

Dimensiunile bacteriofagilor variază de la 20 nm la 200 nm. Ca toate virusurile, conțin ADN sau ARN și o capsidă proteică. Bacteriofagele care au forma de spermatozoizi sau de tadpole sunt întâlnite mai des și studiate mai bine. Acestea constau dintr-un cap, un proces caudal, o placă de luptă cu anvelope scurte și fire de coadă. În interiorul capului este răsucite în spirală pentru a bea ADN, acoperit cu o capsidă proteică. Procesul caudal - acea bară cilindrică goală, înconjurată de o acoperire contractilă. Placa bazală și firele realizează procesul de adsorbție a bacteriofagului pe celula bacteriană. Există bacteriofagi care au o structură diferită: cu un proces scurt, cu un proces fără o acoperire de contracție, fără un adaos, o formă filiformă.







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: