Această reacție universală servește ca punct de referință pentru evaluarea altor răspunsuri serologice.
Principiul său este că atunci când un antigen (virus) interacționează cu anticorpi omologi, se formează un complex de anticorpi + anticorpi, astfel încât infecția virusului este neutralizată. Indicatorul virusului liber (care nu este asociat cu anticorpi) este un sistem viu sensibil la viruși: animale, embrioni de pui sau culturi celulare.
La formularea de reacție in vitro amestecat volume egale de ser și a virusului, amestecul este menținut la o temperatură adecvată (4, 22 sau 37 ° C) timp de o oră sau 16-18 ore (în funcție de virusul și condițiile experimentale). Apoi, acest amestec infectează un sistem de viață sensibil la virus, observă starea obiectelor vii și, după un timp adecvat (în funcție de virus), ia în considerare rezultatul neutralizării virusului prin absență:
1) moartea, dezvoltarea imaginii clinice a bolii și modificările patologice ale organelor și țesuturilor animalelor de laborator;
2) moartea, modificările patologice ale membranelor, țesuturile embrionare și absența hemaglutininelor în fluidele din cavitățile embrionilor de pui;
3) acțiunea citopatică (CPD) sau formarea plăcilor în cultura celulară.
Serurile utilizate în PH trebuie să fie eliberate anterior prin încălzire prin inhibitori termo-nestabili nespecifici. Atât sistemul sensibil, cât și metoda de infectare a acestuia sunt selectate luând în considerare cea mai bună posibilitate de cultivare a acestui virus.
Deoarece pentru a neutraliza o anumită cantitate de virus necesită un anumit număr de anticorpi și una dintre aceste componente este încă necunoscută, atunci PH poate fi pus în două versiuni:
1) la diferitele doze (diluții) serice (de obicei sub formă de diluții consecutive de 2 ori), adăugați aceleași doze ale virusului (de obicei 100-1000 ED50). În această realizare, titrul anticorpilor de neutralizare din ser, care servește ca o diluție indicator de ser care protejează de virus Acțiuni 50% din sistemele biologice infectate;
2) la diferite doze (dilutie) a virusului (de obicei sub formă de diluții seriale de 10 ori), s-a adăugat aceeași doză ser (în mod tipic 10 sau diluții 1. 1. 20). Atunci când această variantă de PH este formulată, în plus față de serul de testat (sau specific), se utilizează ser normal (negativ). În acest caz, se determină indicele de neutralizare (IN), care arată de câte ori serul imun (specific) sau de test scade titrul virusului comparativ cu serul normal.
Trebuie reamintit faptul că orice reacție serologică (inclusiv PH) trebuie să fie însoțită de controale pentru fiecare componentă implicată în reacție.
PH vă permite să rezolvați următoarele probleme de diagnosticare:
Pentru a detecta și a determina titrul anticorpilor de neutralizare a virusului cu ajutorul unui virus cunoscut;
Identificați un virus necunoscut (izolat) examinându-l cu diferite seruri cunoscute (anticorpi).
Avantajele PH sunt versatilitatea și specificitatea ridicată; dezavantaje - intensitate mare a forței de muncă; necesitatea de a respecta cu strictețe sterilitatea materialelor, vesela și uneltele; costuri ridicate ale sistemelor biologice vii; durata relativă a testului biologic și necesitatea unor calcule matematice.
Distribuiți un link cu prietenii
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: