Primirea fagilor. Utilizarea practică a fagilor
Eficiență scăzută este compensat phagotherapy fagoprofilaktiki și utilizarea pe scară largă a fagilor pentru a identifica și diferențierea infraspecific a bacteriilor în diagnosticul bolilor infecțioase și studiu epidemiologic focare dizenterie, salmoneloză, difterie și alte infecții stafilococice, în cazul în care cu ajutorul lor, este posibil să se identifice sursele și căile de transmisie de origine infecțioasă. Ca o ilustrare cum să identifice fagilor și determinarea activității lor, metode de inducere a bacteriilor lysogenic și lizotipia.
Izolarea fagului virulent. Pentru a izola fagul, materialul lichid care trebuie testat este centrifugat. Supernatantul într-o cantitate de 1 ml este transferat în 30 ml de bulion de peptonă de carne (MCB), însămânțat cu 1 ml dintr-o cultură de 6-18 ore a microorganismului corespunzător.
Semănatul a fost plasat într-un termostat la 37 ° C timp de o zi, apoi trecut printr-un filtru Seitz și filtratul a fost diluat 1:10 și 1: 100, 1: 1000 și se adaugă la 0,05 ml culturi. Controlul este o cultură de bulion fără filtrat. După 18-20 de ore, tuburile sunt scoase din termostat. Prezența fagilor judecat de albire a mediului (în control au o creștere normală a bacteriilor).
Inducția bacteriilor lizogene cu raze ultraviolete. Svezhevyrosshuyu 8 ore de cultură bacteriană este diluată 1: 20-1: 30 tampon veronal și 5 ml este distribuită în două vase Petri. Unul dintre ei (pilot) este deschis și pentru 30-180 iradiat cu o lampă LUV germicide și al doilea (de control) - păstrate în zona de acoperire UV închisă. Apoi, cele două suspensii de bacterii (3-3,5 ml) a fost inoculată în două tuburi de 5 ml de mediu de cultură adecvat, și după câteva ore de incubare într-un incubator iradiat de însămânțare prezintă efect litică acțiunii fagilor vegetative.
Tiparea stafilococilor cu un set de 23 de fagi standard. Cultura Overnight de Staphylococcus aureus 209 P au fost însămânțate în 2,5 ml Hottinger bulion, cultivate timp de 3-4 ore și proaspăt însămânțate gazon și preuscat pe un vas Petri cu 1,2% agar-lea. Partea de jos a vasului Petri inoculate cu un creion împărțit la 23 pătrat și în fiecare dintre ele o buclă standard sau pipetă Pasteur aplică o picătură fagului corespunzătoare. acțiuni de fagi iau în considerare rezultatele gradului de liză Staphylococcus culturii, indicând avantaje - de la «±» la o metodă Appelman anumită activitate de fag.
Activitatea fagului este determinată în MPB. Pentru aceasta, luați o serie de tuburi care conțin 4,5 ml de bulion. Primul tub este format din 0,5 ml de fage de testare, este amestecat cu mediul și se pipetează într-un alt tub de 0,5 ml și următoarea t. D. Astfel, fagul diluat în serie 10-1 la 10-9 și mai sus.
În fiecare diluție de fagă, se adaugă 0,05 ml dintr-o cultură de bulion de 18 ore a speciilor bacteriene corespunzătoare. Două tuburi de testare cu MPB trebuie monitorizate: una este inoculată cu o cultură de bacterii (controlul prezenței unui fag în ea), al doilea este turnat în fag (controlul sterilității sale). Rezultatele sunt luate după 18-24 ore de la tuburile din termostat. Titrul fagului este determinat de cea mai mare diluție, în care se observă o liză bacteriană completă.
Recomandată de vizitatorii noștri:
Așteptăm întrebările și recomandările dvs.:
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: