Recomandări metodice


Recomandările metodologice au fost făcute de ANKalyuk.

Studii bacteriologice privind microorganismele patogene condiționate

Studii bacteriologice privind microorganismele patogene condiționate








studiu de laborator complex al microflorei cuprinde investigații bacterioscopic și bacteriologică a materialului deținut în dinamica admiterii la tratament spitalicesc, în timpul tratamentului, precum și indicații la pacienții tratați ambulator. Se recomandă să se semene materialul de diagnosticare pe medii nutritive dense, care exclude suprimarea creșterii unui microorganism de către altul și permite estimarea cantitativă a numărului de colonii cultivate. Rata de creștere a microorganismelor poate fi exprimată în cruci și corespunde conținutului unui anumit număr de celule microbiene în 1 ml de material de diagnosticare:

++++ cresterea abundenta a coloniilor confluente (10 m / cl)

+++ creșterea masivă a coloniilor izolate (10 m / cl)

++ creșterea moderată a numărului de colonii numărate (cel puțin 50) (10-10 m / kl)

+ creșterea redusă a coloniilor individuale (30-50) (10 mcl).

Cercetarea microflorei a tractului respirator superior (faringe, nas, cavitate orală). Materialele pentru cercetare sunt: ​​mucus, descărcare purulentă, cruste, film, piese de infiltrate în biopsie. Materialul pentru examinarea microbiologică a gurii este luată cu un tampon de vată sterilă jeun din mucoasa la conductele de evacuare ale glandelor salivare, suprafața limbii de ulcere (pilitură gastrice), cu zonele cele mai afectate. În prezența unui film, acesta din urmă este îndepărtat cu pensete. Materialul din cavitatea nazală este luat cu un tampon de bumbac steril uscat. Materialul este placat pe plăci Petri cu sânge, agar galben-sare, mediu Saburo. Când materialul de însămânțare tampon este frecat în mediu cu întreaga suprafață a tamponului într-o zonă mică de 1-2 cm și accident vascular cerebral a lungul suprafeței. Simultan cu însămânțarea, tampoanele sunt pregătite și colorate de Gram.

Cercetarea microflorei tractului respirator inferior. Materialul de bază pentru acest studiu este sputa, care este colectat în ziua de studiu, în dimineața, după curățarea dinților și clătiți gura proaspăt apă fiartă. Cu spută abundente trebuie tuse până prima porțiune din scuipat, iar următoarele sunt colectate într-un recipient steril și transportate la laborator. Pentru a studia microflora sputei este utilizat ca sputa sămânță nediluat (metoda calitativă) și metoda de reproducere, numita cantitativ. Într-o metodă calitativă pentru însămânțare purulente bulgări de sputa folosite, se spală în ser fiziologic cu microflora oral. În metodele cantitative, se omogenizează 1 ml de spută. Apoi, se fac diluții, ceea ce face posibilă reducerea numărului de microorganisme din cavitatea bucală. Cu ambele metode, se prepară un frotiu în același timp cu semănatul, care este colorat de Gram. Cercetare fie purulent și expectorație mucopurulentă, care sunt prezente în leucocite și celulele epiteliale alveolare, celulele incorporate in mucin, a căror prezență este tipic pentru excreții tractului respirator inferior. Fii atent la predominarea în spută frotiu microflorei nativ, în special diplococci capsulara (pneumococ), mici tije Gram-negative (Pfeiffer coli) și altele.

Metoda calitativă. In spută de laborator a fost turnat într-un vas Petri este selectat 2-3 umflătură purulentă, care se spală o dată în soluție salină și apoi inoculate pe un mediu de sânge și vitelin sare-agar și Sabouraud Endo. Semănarea se face cu o spatulă de sticlă sterilă, care freacă uniform materialul de pe suprafața mediului nutritiv. Pe plăcile cu agar de sânge imediat după însămânțare impune discuri cu antibiotice (streptomicină, penicilină, tetraciclină, eritromicină și cloramfenicol) pentru a furniza informații rapide privind sensibilitatea de droguri a microflorei predominant în cultură. În a doua zi, contoriza numărul de colonii (etiologia este considerată a fi o creștere semnificativă a mai mult de 50 de colonii), omogenitatea sensibilității populației și de droguri, cu o creștere a monocultură lor.

Semănarea apei de spălare a tuburilor bronhice, a lichidului de lavaj. Datorită materialului selectat bulgări de mucus, care fără spălare prealabilă cu soluție salină inoculate pe un mediu nutritiv solid (vezi. Sputa) într-un tub de testare cu diabet bulion. În absența bucăților de mucus se efectuează însămânțarea materialului colectat într-o pipetă Pasteur. Incubarea în timpul zilei la 37 ° C

Investigarea microflorei ochilor. Proba este selectată de un medic cu un tampon steril de bumbac sau o tijă de sticlă. Materialul este luat din zonele afectate și inoculat în bulion de zahăr 0,5%. În absența creșterii, un răspuns negativ este dat după 48 de ore.

Examinarea frotiurilor din ureche. Material tampon de bumbac steril prelevate din canalul urechii și inoculează din sânge și vitelin sare-agar mediu Sabouraud, frecarea materialului pe porțiunea medie și apoi se triturează în întreaga ceașcă.

Examinarea urinei. Studiul este supus unei doze medii de urină dimineață obținută prin urinare normală sau luată de un cateter. Indicatorul bacteriuriei, care are o importanță clinică, este prezența a 100.000 sau mai mulți microbi în 1 ml de urină.

Prima zi a studiului. Se inserează o bucla bacteriologică standard (3 mm) de urină (amestecată cu grijă) în sectoarele A, I, II și III într-un vas Petri cu sânge de 5% sau agar simplu. În sectorul de mediu O porțiune face semănat, materialul frecare uniform pe întreaga suprafață, și apoi, fără a lua noul material de aceeași buclă brăzdată pe un mediu nutritiv în sectorul I (3-4 lovituri) în sectorul I în II, II sector - în III.


Numărul de colonii de bacterii din diferite sectoare ale vasului Petri, în funcție de gradul de bacteriurie (conform lui VS Rabinovsky și VVRodoman)

de la unitate. până la 25 de ani


A doua zi a studiului. Determinați gradul de bacteriurie conform tabelului 1, în funcție de sectorul în care se detectează creșterea coloniilor microorganismului. Dacă există mai puțin de 100 mii de microbi în 1 ml de urină, creșterea coloniilor se observă numai în sectorul A al vasului Petri. Apariția creșterii coloniilor în sectorul I indică un grad mai ridicat de bacteriurie. Numărarea coloniilor din sectorul cu cea mai mică creștere nu este dificilă. Metoda plantării sectoriale în majoritatea cazurilor face posibilă izolarea agentului cauzal al bolii în cultura pură în a doua zi a studiului.

Studiul microflorei de răni, punctate, exsudate, țesuturi rezecate. Exudatele și punctele sunt inoculate cu o pipetă Pasteur în tuburi de testare cu sânge și agar simplu de agar de carne, agar de zahăr. Un tampon cu un material de diagnostic este placat pe plăci Petri cu 5% sânge și 10% agar de sare de gălbenuș. Materialul este frecat de-a lungul marginii mediei și apoi este dispersat peste ceașcă cu aceeași buclă de tampon sau bacteriologică.







Studiul microflorei organelor genitale feminine. Secreții au fost colectate folosind un tampon de vată sterilă și inoculate pe cutii Petri cu 5% agar de sânge, agar vitelin-sare și în tub bulion cu diabet zaharat, precum si mediul Endo.

Examinarea bilei. Bilă se colectează în timpul examinării sau în timpul operației în tuburi sterile și se livrează la laborator în cel mult 2 ore de la momentul prelevării probelor. 0,1 ml de bilă este placată pe o ceașcă de agar sanguin și pe mediu Endo. Culturile și materia primă rămasă sunt plasate într-un termostat la 37 ° C. După 24 de ore, se iau în considerare rezultatele culturilor primare, numărând numărul de colonii din fiecare specie pe medii nutritive dense.

Test de sânge. Sângele este însămânțat la patul pacientului după tratamentul atent al pielii (alcool, eter). Din vena ulnară, luați 10 ml de sânge, care este turnat în două baloane: primul cu 150-200 ml de bulion de zahăr și cel de-al doilea cu un mediu tioglicolic (5 ml fiecare). Culturile sunt ținute într-un termostat timp de 10 zile. În a doua, a 3-a, a 5-a și a 10-a zi, semințele de control sunt făcute pe plăci Petri cu 5% agar sanguin. Se recomandă însămânțarea a 5 ml de sânge într-o fiolă cu un mediu nutritiv în două faze: dens și lichid (conic 5% agar sanguin cu glucoză 1% și bulion de zahăr 50 ml 0,5%). O astfel de tehnică exclude necesitatea transplantului multiplu, elimină posibilitatea de contaminare a microflorei de către mediul înconjurător, permite numărul de colonii care au crescut (adică, pentru a estima intensitatea bacteriemiei). Cultură este plasat într-un termostat la 37 ° C timp de 10 zile. În fiecare zi conținutul flacoanelor este agitat și panta flaconului umezește suprafața teșiturii unui mediu nutritiv dens. Atunci când există o creștere a coloniilor pe teșitura agarului de sânge, se prepară tampoane din acestea și apoi se identifică în conformitate cu regulile de bacteriologie general acceptate. În absența creșterii microorganismelor în a 10-a zi, răspunsul final este dat - cultura sângelui este sterilă.

Cercetarea disbiozelor intestinale. Prelucrate și ponderate (pergament sau ceară) sterile de 3x2 bucăți de hârtie iau o cantitate arbitrară de fecale și cântăresc balanța de torsiune. Hârtia împreună cu materialul este plasată într-un tub steril. Greutatea probei de fecale, minus greutatea hârtiei, este înmulțită cu 9. Suma obținută după înmulțire este egală cu cantitatea de soluție fiziologică care trebuie adăugată la tubul de testare. Diluția 1:10 (I).

De exemplu: greutatea hârtiei 20 mg

greutatea fecalelor cu o bucată de hârtie 420 mg

420-20 = 400 mg; 400 mg 9 = 3600 (3,5 ml).

După emulsificare, baghetă de sticlă sterilă sau suspensie pipetă a fost lăsată să stea la temperatura camerei timp de 10-15 min și 0,1 ml a fost transferat la tubul următor cu 9,9 ml de soluție salină (diluție 10). Apoi, materiile fecale sunt diluate până la un titru de 10. De diluare primară (10) inoculați pe un mediu nutritiv solid pentru izolarea patogen familie bacterii enteric (mediu Ploskireva Lewin). În același timp, face (0.5-1.0) însămânțarea masivă pe mediu de îmbogățire lichid (Mueller, selenitovuyu, magneziu). Din tubul de testare, în care fecalele sunt diluate la 10, se adaugă 0,1 ml la suprafața mediului Saburo și JSA. Din diluția 10, culturile sunt plantate pe plăci de 0,5% sânge de agar și mediu Endo la 0,1 ml. Pentru creșterea coloniilor izolate se folosesc margele de sticlă sau spatule. Margele de sticlă rotunde 12-14 bucăți (pre-sterilizate) sunt coborâte într-o ceașcă cu semințe. Cu o ușoară rotire a ceștii cu bilele timp de 1 minut, materialul este distribuit uniform pe întregul mediu nutritiv. perle de însămânțare începe cu suportul pe care este semănat cea mai mare diluție (10), transferul de granule pe diluare minimă. Pentru a izola anaerobe Bifidobacteria diluții produse de însămânțare de 10, 10 și 10 în cele două tuburi (0,1 și 1 ml) au fost regenerate timp de 1 oră mediu Blaurock. După inoculare, tuburile se rotește viguros între palme pentru a distribui suspensia în mod egal. Mediul pentru creșterea aerobilor este plasat într-un termostat la 37 ° C (Saburo - la 20 °) timp de 18-24 ore. Mediul de creștere pentru contul anaerobi Blaurock timp de 48-72 ore. A doua zi după însămânțare, determinarea cantității de E. coli și alte bacterii în 1 g de fecale în numărul de colonii crescute pe un mediu nutritiv adecvat în ceea ce privește cantitatea de material de semințe și gradul de diluție. Astfel, în cazul în care colonii mediu 30 Endo lactosonegative crescute la inoculare de 0,1 ml de fecale 10 diluare (1: 100000), calculul trebuie înmulțită cu 30 și 10 100000, adică în 1 g vor fi 30.000.000 enterobacterii de lactoză negativă. Și să ia în considerare numărul de colonii lactoză hemolitice de E. coli, prezența Staphylococcus, Proteus și alte microorganisme. Se determină proprietățile enzimatice și sensibilitatea la medicament a microorganismelor. Din tuburile cu mediu Blaurok, sunt pregătite frotiuri. Sub bifidobacterii microscop au forma de tije tipice Gram-pozitive, vâscoasă sau ramificată la capetele aranjate într-un număr roman V, de multe ori sub formă de clustere. Răspunsul bacteriologului indică procentul sau numărul absolut al fiecărui grup de microorganisme.

Identificarea microorganismelor. Metodele de identificare a microorganismelor se bazează pe studiul caracteristicilor morfologice, culturale și biochimice, antigenice și altor culturi.

Cocci gram-pozitivi. Cocci gram-pozitivi aparțin familiei Micrococcaceae, care include genul Micrococcus și Staphylococcus și familia Streptococcaceae.

Familia Micrococcaceae. Pentru microbiologia medicală, este necesară diferențierea stafilococilor de micrococci. Aflați mai multe proprietăți morfologice, hemoliza, capacitatea de a se dezvolta pe un mediu care conține sare, pigment, fermentarea glucozei la acid, în condiții anaerobe, fermentarea glicerolului. Micrococi au de 2-3 ori mai mare de celule de dimensiune (0.5-3.5 microni), care nu fermentează glucoza în condiții anaerobe și glicerol sunt pigment de la galben la roz. Diferențierea diferitelor tipuri de stafilococi se realizează pe o serie de teste: capacitatea plazmokoaguliruyuschey lecithinase activitate, fermentarea manitol în condiții anaerobe, pigmentare, sensibilitate la novobiocin (test - pozitiv la epidermidis St. aureus și St. și negativă la St. saprophyticus). Pentru a izola stafilococul, materialul de testare este inoculat într-un mediu de diagnostic diferențial: agar galben-sare. Când pătată colorate Gram Gram pozitive Staphylococcus aureus și este separat, în perechi sau formează clusterele ca grămezi neregulate. Staphylococcus aureus rezistent la concentrații mari de clorură de sodiu în mediu (7-10%), care este utilizat pentru izolarea sa din material patologic. Atunci când crește pe bulion de pește-carne cauzează turbiditatea uniformă și dă un depozit floculant. Pe medii de nutrienți dense aureus creste sub forma unei colonii strălucitoare rotunde, cu margini netede (0,5-1,5 mm diametru). În a doua zi a studiului a evaluat creșterea cantitativă a coloniilor, ia în considerare activitatea lecithinase izolate în cultură pură a unui microb (însămânțări pe tubul cu lapte sau o cultură înclinată simplă). În cea de-a treia zi - au efectuat teste pentru diferențiere și sensibilitate la medicament.

La determinarea activității coagulazo sunt liofilizata plasma de sânge de iepure diluat cu soluție salină sterilă de 1: 5 și se toarnă în fiole sterilizate de 0,5 ml fiecare. O buclă a unei culturi de agar zilnic a tulpinei de testare este inoculată în tub și introdusă într-un termostat la 37 ° C Rezultatele sunt înregistrate după 30 de minute, 1 oră, 2 ore și 24 de ore. Toate gradele de coagulare a plasmei dintr-o bucată mică, care rămâne fixă ​​la rotirea tubului, sunt considerate pozitive.

Activitatea lecitinazei este determinată pe agar de sare galbenă. Reacția este luată macroscopic timp de 24-48 ore prin prezența unei zone tulbure și a unei coroane de curcubeu în jurul coloniilor de stafilococi, indicând faptul că au o enzimă de lecitinază.

În studiul fermentării manitolului, cultura culturii de agar zilnic a tulpinii test este transformată într-o coloană de 1% agar cu manitol și ulei de vaselină. Când se fermentează manitolul, bara de agar devine albastră. O reacție este considerată pozitivă atunci când se fermentează 2/3 din coloana de agar.

Pentru a determina formarea pigmentului, culturile de stafilococ sunt inoculate cu 10% agar de lapte. Contabilitate după 18-20 ore.

Determinarea capacității culturii stafilococ hemolitic se realizează pe 5% agar de sânge (sânge donat fără a adăuga conservanți) prin prezența iluminării în jurul coloniilor, care sunt identificate în lumina transmisă în mod clar. Pozitiv agar Testul hemolitice cu sânge uman, de obicei din cauza hemotoxin întrucât un rol fundamental în patogeneza infecțiilor stafilococice joacă alfa-toxina, care poate fi detectată pe agar cu sânge de iepure.

Familia Streptococcaceae. Streptococi sunt un grup mare și destul de eterogen de microorganisme. Cei mai studiați sunt reprezentanții aerobi: Streptococcus pyogenes, S. faecalis, S. pneumoniae. Microbul are o formă sferică, Gram-pozitivă, în frotiuri din medii nutritive dense fiind localizat sub formă de lanțuri scurte de 2-3 cocci, pe medii nutritive lichide care dau lanțuri mai lungi. Când cresc streptococi ar trebui să ia în considerare nevoia lor crescută de nutrienți. Prin urmare, pentru cultura de streptococi, se utilizează medii nutritive conținând glucoză (1%), sânge (5-10%), ser (10-20%).







Articole similare

Pagina anterioară

Pagina următoare

Trimiteți-le prietenilor: