Cultura celulară cu role. Până de curând, culturile de țesut au fost utilizate în virologie, în primul rând sub forma culturilor staționare cu un singur strat.
În multe cazuri, această metodă de creștere a celulelor este de neînlocuit. Mulți ani de experiență arată că atunci când se utilizează culturi staționare de un singur strat, există o serie de dificultăți asociate cu cheltuielile uriașe ale timpului de lucru și a materialelor. Din acest punct de vedere, culturile filatoare mai avantajoase, care sunt economice, caracterizate printr-un raport optim de suprafața utilă de cultivare a volumului mediu de cultură și se deschide oportunități pentru acumularea masei de celule.
Termenul de cultură de cilindru desemnează o metodă de cultivare în care un monostrat celular este localizat pe suprafața cilindrică a vaselor orizontale rotative și este spălat periodic cu un mediu nutritiv. Din anumite motive, un număr de celule poate fi cântărit, în unele cazuri, într-un mediu de cultură.
Într-o variantă similară, cultura celulară se numește suspensie rulou. Randamentul culturii celulare va fi mai mare, cu atât este mai mare zona cu care sunt recoltate celulele. Cercetatorii au folosit diverse moduri de a mări suprafața peste care atașamentul și proliferarea celulelor. În acest scop, diferite baze natura cu suprafață mare solidă, burete, lână, colagen, pe spiralele de sticlă și t. D. O răspândire largă a acestor metode nu sunt recepționate, deoarece împiedică în mod semnificativ manipularea celulelor, dar trebuie remarcat faptul LS descrise Ratner și metoda VA Krikun de cultivare multi-strat.
Celulele au fost cultivate în sticle de 1,5, 10 și 15 de litri încărcate complet cu tuburi ovale de sticlă situate paralel cu axa longitudinală a vaselor. Suprafața utilă a crescut astfel în comparație cu culturile staționare cu un singur strat în vase de același volum de 20 de ori. Cultivarea a avut loc în 2 etape.
În prima etapă, sticlele s-au rotit în jurul axei orizontale pentru a distribui celulele în mod uniform. Mai târziu, când celulele erau atașate la sticlă, cultivarea a continuat într-o poziție staționară. Sistemul de cultură descris a fost utilizat cu succes pentru cultivarea virusului febrei aftoase. Mai eficientă a fost rotirea vaselor în care a apărut multiplicarea celulelor. Inițial, celulele au fost cultivate în tuburi de testare, dar odată cu dezvoltarea echipamentului tehnic, volumele vaselor de cultură au crescut, iar din creșterea celulelor în tuburile rotative de testare, cercetătorii s-au mutat în sticle rotative.
Rolurile culturilor au început să fie utilizate atât pentru acumularea de celule, cât și pentru multiplicarea virușilor. Cultivarea cu role foloseste masini specializate pentru sticle sau tobe rotative. Cel mai adesea, 0,5 sticle de 3 litri sunt folosite pentru cultivare. În condițiile de producție, volumul lor poate atinge 20 litri sau mai mult.
Recomandat pentru primele 30 de minute. după însămânțarea celulelor, asigurați o viteză mare de rotație a flacoanelor de 0,5 1,0 min pentru distribuirea uniformă a materialelor, apoi transferați-le la o viteză redusă de rotație de 20 30 pe oră. Concentrația inoculare în 1 ml de mediu pentru celulele PK, BHK-21, HeLa, L - 6-80 pentru diploide 100-200 mii de celule în culturi primare -. 200-300 volum mediu de mii de creștere trebuie să fie 110, rola 120 din volumul flacon.
Metoda rola de cultivare vă permite să obțineți mai multe celule. Astfel, cu un flacon de 3 litri poate fi preparat recoltare de celule HeLa de 8 ori, BHK-21 - 9 ori, ca - 11 ori mai mare decât o sticlă de cultură monostrat staționară cu o capacitate de 1 litru. Multiplicitatea economiei mediilor cu utilizarea de fiole de 3 litri este de 2,8 pentru celulele HLA-21-5,0, AO-4,0. Abilitatea de a crește și de a se multiplica în condiții de roller sunt subculturi, culturi transplantate și, mai puțin adesea, primare, precum și tulpini de celule diploide. Pentru o multiplicare mai bună a celulelor în mașini cu role, este necesară adaptarea lor la noile condiții de cultivare.
Metoda de cultivare prin role permite obținerea unui număr mare de celule. Avantajul culturilor roller în comparație cu culturile staționare tradiționale este, în special, utilizarea mai economică a mediilor nutritive și un randament mai mare de antigen viral cu 1 2 lg. 3.4.
Toate subiectele din această secțiune:
Tipuri de culturi celulare
Tipuri de culturi celulare. Transferul celulelor întregului organism în condițiile de viață in vitro încetează să mai existe ca unul dintre numeroasele elemente structurale ale țesutului sau ale organelor, în care
Prepararea culturilor celulare primare
Prepararea culturilor celulare primare. Primar - este o cultură derivată din țesut și cultivată in vitro înainte de începerea subculturii, adică înainte de prima însămânțare. Primar rece
Prepararea culturilor celulare transplantabile monostrat
Producerea de culturi celulare transplantabile monostrat. Așa cum s-a menționat deja mai sus, una dintre metodele de obținere a liniilor celulare transplantabile este selectarea celulelor cu activitate crescută de creștere și proliferare
Cultură de celule de suspensie
Cultură de celule de suspensie. În 1953, Owens și colaboratorii au demonstrat pentru prima dată capacitatea celulelor de a se multiplica într-un mediu lichid într-o stare liber suspendată. De atunci, metoda cu
Creșterea virușilor în culturile celulare
Creșterea virușilor în culturile celulare. În prezent, culturile primare, tulpinile celulare și liniile celulare stabilite sunt utilizate pentru izolarea și multiplicarea virusurilor animalelor. În comunitate
Precauții atunci când lucrați cu celule infectate cu virus
Precauții la lucrul cu celulele infectate. Virușii au un efect citopatogen și servesc ca agenți etiologici în multe boli ale oamenilor și animalelor. În plus față de
Detectarea virușilor
Detectarea virușilor. Pentru a detecta prezența virușilor și a determina numărul lor, se poate utiliza un număr de teste diferite, de exemplu 1 Activitatea virusului se măsoară prin determinarea cantității de sodiu
Cultivarea picornavirusurilor prin exemplul obținerii unui tip de poliovirus
Cultivarea picornavirusurilor prin exemplul obținerii unui tip de poliovirus. ÎN CULTURA CELULELOR SĂNĂTĂTOARE. Ca o tehnică specifică pentru cultivarea virușilor, se poate menționa metoda de creștere a poliovirusului în
Doriți să primiți ultimele știri prin e-mail?
Articole similare
Trimiteți-le prietenilor: